比較常見外用鎮痛藥經皮釋放特性及其在局部組織的分布

李曉濤，朱華明

(瀘州醫學院基礎醫學院，四川 瀘州 646000)

0 引言

疼痛是肌肉骨骼系統疾病最主要的癥狀，口服NSAIDs鎮痛效果良好，但存在胃腸道安全性問題，故外用NSAIDs 通過改變用藥途徑，在不降低鎮痛效果同時，經皮給藥可顯著減少藥物系統暴露量，提高 NSAIDs的用藥安全性，已在臨床廣泛應用[1]，目前常用外用NSAIDs有洛索洛芬鈉凝膠膏、氟比洛芬凝膠貼膏、吲哚美辛凝膠膏、洛索洛芬鈉貼劑等。在TDDS系統中，藥物的釋放度與透皮率是影響外用NSAIDs藥效的重要因素[2]。由于目前臨床上缺乏各外用NSAIDs的釋藥性能和藥代動力學數據，因此本研究目的是探究外用NSAIDs體外釋放透皮性能及在體內的分布情況。

1 實驗材料

1.1 實驗動物與主要試劑藥品

健康雄性SD大鼠若干只(體重300g±50g，上海動物中心)；洛索洛芬鈉凝膠膏(湖南九典)；氟比洛芬凝膠貼膏(北京泰德)；吲哚美辛凝膠膏(青州堯王制藥)；洛索洛芬鈉貼劑(第一三共)；酮洛芬貼劑(Pacific Pharmaceutic)；吡羅昔康貼劑(江蘇恒瑞)；14C標記的洛索洛芬鈉凝膠膏、氟比洛芬凝膠貼膏、吲哚美辛凝膠膏、洛索洛芬鈉貼劑、酮洛芬貼劑、吡羅昔康貼劑(貝塔醫藥科技)；0.5%冰醋酸；Na2HPO4·12H2O；KH2PO4；三乙胺；稀磷酸；氯化鈉注射液；巴比妥；甲醇；乙腈(均為色譜純，FISHER公司)。

1.2 實驗儀器

高效液相色譜(美國沃特世)，Franz擴散池(天津市正通科技有限公司)；PL202-L電子天平/XS105分析天平(Mettler Toledo公司)；AYJ1-0501-U純水機(重慶市頤科公司)；Inertsil ODS-3C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；透析膜(孔徑0.45μm聚醚砜膜)；HPLC濾膜(0.45μm濾膜)；電動剃毛器；外科手術剪；線性探針(膜長30mm，5000 Da)；液閃計數器。

2 方法

2.1 含量測定HPLC色譜條件

洛索洛芬色譜柱[3]：Inertsil ODS-3C18柱(4.6mm×250 mm，5um)，流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液(40:60，PH3.5)，λ=221nm。氟比洛芬色譜柱[4]：C18柱，流動相：甲醇7.42nmol/L，λ=247nm。吲哚美辛色譜柱[5]：C18柱，流動相：甲醇：水(0.5%冰醋酸) =3:1(PH5.98)，λ=266nm。吡羅昔康色譜柱[6]：C18色譜柱；流動相：乙腈-0.5%冰醋酸溶液(60:40)，λ=243nm。酮洛芬色譜柱[7]：C18柱，流動相：甲醇：水(稀磷酸)=80:20(PH4)，λ=260nm。吡羅昔康色譜柱[8]：以上均為柱溫40℃，流速1mL/min，進樣量20ul。

2.2 體外釋放度實驗[5,8,9]

①配制0.01mol·L-1磷酸鹽緩沖液PBS(pH7.4)，作為接收介質，預溫至37.0℃；②將A組藥固定于Franz擴散池擴散室與接收室間，釋放面向下，在貼膏下方放入透析膜，將釋放介質加至刻度線，攪拌轉速600 r/min，分別于1、2、4、6、8、12、24h取2mL釋放液，含量測定，并補充等量空白介質。計算累積釋放度(%)和繪制藥物滲透曲線。Ln=(Cn×V+Σi=1n-1Ci×V0)/W×100。Ln為累積釋放度，Cn為第n個時間點樣品的濃度，V為接收池體積，Ci為第i個時間點樣品的濃度，V0為每次取樣的體積，W為樣品中相應主藥成分的含量；③其他組實驗方法參照上述A組的實驗方法。

表1 常見非甾體抗炎藥體外滲透率比較

2.3 體外透皮實驗[3,5,8,9]

①制備離體皮膚：巴比妥麻醉大鼠，剃除鼠毛至腹部皮膚表面光潔。快速斷髓處死，剝離全層腹部皮膚，去皮下脂肪和結締組織，PBS沖洗。② 體外透皮實驗：采用Franz擴散池法，上室為擴散室，下室為接受室，有效擴散面積1.77cm2。將A組藥貼鼠皮上，固定在兩室之間，接收室注滿PBS，排氣泡，使液面完全與皮膚內層接觸，攪拌轉速300r·min-1，32℃，在2、4、6、8、10、12、24 h取接收液1mL，補加同體積的新鮮接收液，測含量，計算單位面積累積透過量Qn和繪制滲透曲線。Qn=(VCn+∑n-1i=1Ci×1)/S式中Qn為第n個時間點的單位面積累積透過量，V為接收室中接收液的體積，Cn為第n個取樣點測的藥物濃度，1代表取樣體積1mL，S為擴散面積；③其他組參考A組的實驗方法。

2.4 含水量檢測

每組取3貼，稱重，100℃烘箱烘12h，再稱重，求前后差值和平均值。

2.5 分布-同位素示蹤法[10-12]

①透析膜探針植入：取三只大鼠，麻醉，分別將線性探針用穿刺針引導植入皮膚、骨骼肌、關節腔，將引導針抽回，將微透析探針膜管留于靶組織中，固定，灌流緩解創傷1h。②本底試驗：以空白液灌流，連續收集樣品，加水性閃爍劑，5min內衰減計數作為本底。③回收率試驗：平衡后，灌流含洛索洛芬鈉灌流液，采樣間隔1h，樣品20ul，測相對損失率。④在體皮膚微透析實驗：將14C標記洛索洛芬鈉凝膠膏貼敷于大鼠腹部，相同流速灌流，在給藥后1 h、2h、4h、8 h、12h、24 h、48 h(揭除后24 h)各取微透析樣品20ul，加入水性閃爍液，液閃計數儀測放射性強度，扣除本底并校正。骨骼肌和關節腔微透析實驗參照上述方案；⑤其他五組參照A組方案。⑥繪制藥物濃度變化曲線。

2.6 統計分析

3 實驗結果

3.1 體外釋放度

A、B、C、D、E、F組的12h平均累積釋放率分別為88.4±5.2%，79.8±6.4%，80.2±7.2%，81.8±4.4%，75.2±5.2%，80.2±6.2%，結果提示A組洛索洛芬凝膠膏12h累計釋放率更高(P<0.05)。

圖1 常見外用非甾體抗炎藥的體外釋放度曲線

3.2 體外透皮研究

A、B、C、D、E、F組的12h平均累積滲透率分別為84.4±4.4，80.2±5.3%，78.2±5.3%，78.2±4.6%，76.1±4.2%，75.8±4.8%。結果提示A組洛索洛芬凝膠膏的12h累計滲透率更高(P<0.05)。

3.3 含水量

A、B、C、D、E、F組 的 含 水 量 分 別 為53.2±2.4%，42.7±1.5%，54.1±1.8%，2.4±0.4%，2.2±0.3%，2.1±0.3%，其中A組洛索洛芬鈉凝膠膏和C組吲哚美辛凝膠貼膏含水量更高。

3.4 分布

六組藥物在靶組織中藥物濃度變化趨勢是相似的，均在12h左右達到最大值，A組在給藥12h皮膚、骨骼肌、關節腔中藥物濃度分別達到(286.3±35.9)μg/g、(286.4±31.5)μg/g、(146.4±31.5)μg/g，在24h藥物濃度分別是(235.3±34.8)μg/g、(112.2±36.4)μg/g、 (62.2±36.4)μg/g，均高于其他五組(P<0.05)。結果提示A組洛索洛芬鈉凝膠膏滲透更多、更深、更持久。

圖3 皮膚中藥物濃度變化曲線(ug/g)

圖4 骨骼肌中藥物濃度變化曲線(ug/g)

圖5 關節腔中藥物濃度變化曲線(ug/g)

4 討論

外用NSAIDs作為經皮給藥系統藥物，藥物的釋藥性能是影響藥效發揮的關鍵因素，由于局部經皮給藥后的血藥濃度都非常低，單靠檢測局部用藥后的血(尿)藥濃度往往不能用來衡量藥物的生物等效性。而離體皮膚的吸收、分布和代謝等與在體皮膚相比都發生著巨大的改變，因而無法體現藥物在皮膚中代謝的真實過程。因此本研究選擇離體皮膚進行藥物釋放和透皮滲透方面的研究，并結合在體動物皮膚藥代動力學實驗，更全面地研究藥物釋藥性能及其分布情況。

本研究結果提示：洛索洛芬鈉凝膠A組的12h累計釋放率和累計滲透率達到(88.4±5.2)%和(84.4±4.4)%，高于其他五組(P<0.05)，這可能與凝膠膏劑型的含水量有關，研究發現了洛索洛芬鈉凝膠膏和吲哚美辛凝膠貼膏含水量達到(53.2±2.4)%和(54.1±1.8)%，高于氟比洛芬鈉凝膠膏、吡羅昔康貼、洛索洛芬鈉貼。另外在體分布實驗結果顯示A組在給藥12h皮膚、骨骼肌、關節腔中藥物濃度分別達到286.3±35.9、286.4±31.5、146.4±31.5，在24h藥物濃度分別是235.3±34.8、112.2±36.4、62.2±36.4(ug/g)，均高于其他五種外用NSAIDs藥物(P<0.05)，這表明了洛索洛芬鈉凝膠膏滲透更多、更深、更持久，因此具有更優的透皮性能。

本研究不足之處：雖然同位素示蹤法具有靈敏度高、檢測方便、應用廣泛等這些優點，但其所檢測的只是原形藥物和或體內代謝產物總的放射性強度，不能區分究竟是原形藥物還是代謝產物，且數據精密度不及HPLC/MS等儀器。若在體分布實驗能聯合HPLC/MS檢測，可增加一個維度研究藥物分布以及藥物代謝轉化的過程，試驗設計更科學。