山羊痘病毒屬病毒檢測技術(shù)分析

邵坤

摘要：近年來，我國畜牧業(yè)高速發(fā)展，逐漸呈現(xiàn)出規(guī)模化的養(yǎng)殖方式，在提高了養(yǎng)殖效率的同時，也增加了病毒傳播的概率，山羊痘病毒屬病毒在畜牧業(yè)中是一種比較常見的病毒，包括山羊痘病毒、綿羊痘病毒等，會嚴(yán)重影響牲畜的正常發(fā)育，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，本文對山羊痘病毒屬病毒的檢測技術(shù)做出了討論。

關(guān)鍵詞：山羊痘病毒屬病毒;病毒檢測

山羊痘病毒屬病毒傳播速度快，傳播范圍廣，死亡率高，是動物痘病毒中最危險的一種，最早于13世紀(jì)英國被發(fā)現(xiàn)，被美國疫情控制中心劃歸為危險病毒，在中國、瑞典等地也有人感染羊痘病毒的情況，羊痘病毒屬病毒的防治關(guān)乎著公共衛(wèi)生安全，因此對山羊痘病毒屬病毒檢測技術(shù)進(jìn)行深入分析具有重要意義。

1? 山羊痘病毒屬病毒簡述及特點

山羊痘病毒屬病毒屬于痘病毒科脊椎動物痘病毒亞科病毒，主要包括山羊痘病毒、綿羊痘病毒、牛結(jié)節(jié)疹病毒等，對牛、羊等養(yǎng)殖業(yè)危害嚴(yán)重，甚至有感染人的現(xiàn)象，被世界衛(wèi)生組織列為A類病毒，具有非常強(qiáng)大的傳播性和危害性，13世紀(jì)在英國被首次發(fā)現(xiàn)，感染山羊痘病毒屬病毒的牲畜發(fā)病率達(dá)到了70%左右，其中死亡率在20%到80%之間，羔羊的死亡率甚至可以達(dá)到100%，世界各國均有相關(guān)案例出現(xiàn)，目前在非洲、中東等地較為流行。感染了山羊痘病毒、綿羊痘病毒、牛結(jié)節(jié)疹病毒等的動物，會出現(xiàn)身體發(fā)熱，皮膚、粘膜、器官表面出現(xiàn)丘疹或結(jié)節(jié)的現(xiàn)象，嚴(yán)重時會發(fā)生皮膚水腫、身體消瘦、毛色暗淡枯黃、淋巴結(jié)腫大、乳量下降，甚至是死亡等情況，這種病毒一旦爆發(fā)將會給地區(qū)的養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大危害，嚴(yán)重?fù)p害養(yǎng)殖主的經(jīng)濟(jì)利益，甚至危害生命安全。我國將山羊痘、綿羊痘等疾病列為了一級動物疾病，對其高度關(guān)注，因此對山羊痘病毒屬病毒的檢測技術(shù)進(jìn)行深入分析與研究意義重大。

2? 山羊痘病毒屬病毒檢測技術(shù)

2.1? 病原學(xué)檢測

病原學(xué)檢測是一種常見的山羊痘病毒屬病毒檢測方法，是一種將病毒分離出來的檢查技術(shù)，需要采集染病動物皮膚和粘膜上的痘疹、痘斑，當(dāng)染病動物進(jìn)入發(fā)熱期需要采集其血液、淋巴結(jié)細(xì)胞和肺部病變組織。分離出的山羊痘病毒一般要以原代或次代的羔羊睪丸細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，除此之外，羔羊腎細(xì)胞和牛犢睪丸細(xì)胞也具有同樣的敏感性。在病羊皮膚丘疹、膿皰組織的分離觀察中，可以發(fā)現(xiàn)病毒在植入羔羊睪丸細(xì)胞后第二天，大部分細(xì)胞開始變圓、變細(xì)，細(xì)胞漿內(nèi)有可疑顆粒出現(xiàn)，并產(chǎn)生空泡，感染的單層細(xì)胞會在五天內(nèi)死亡。當(dāng)取內(nèi)蒙古病羊的皮膚痘疹和水皰當(dāng)做試驗樣本時，分別接種于BHK-21傳代細(xì)胞和SPF雞胚細(xì)胞中時，發(fā)現(xiàn)了明顯的區(qū)別，BHK-21傳代細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的病變，并于24h后開始收縮、聚集，48h后出現(xiàn)空泡現(xiàn)象，72h內(nèi)全部死亡[1]。接種同種病毒的SPF雞胚細(xì)胞在120h后仍然存活，將其解刨后發(fā)現(xiàn)雞胚胚體出血，囊毛增厚，接種部位有明顯的痘斑。以不同地區(qū)的病羊病毒作為實驗樣本，可以發(fā)現(xiàn)不同的現(xiàn)象，或者接種于經(jīng)過不同處理方式的原代綿羊睪丸細(xì)胞，也能得到一定的規(guī)律，這種監(jiān)測方法較為緩慢，但是準(zhǔn)確性很高，能觀察病毒的變化規(guī)律和生長方式，多用于病原研究工作中。

2.2? 染色電鏡觀察

對山羊痘病毒屬病毒也可以使用染色電鏡觀察方法進(jìn)行檢測，采集山羊痘疫區(qū)的病羊病料，通過雞胚細(xì)胞和BHG-21傳代細(xì)胞培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)所得的胚胎切片，用硝酸鉛和醋酸鉛進(jìn)行染色，使用專門的病毒電鏡進(jìn)行觀察。經(jīng)由電鏡觀察可知，山羊痘病毒屬病毒在早期的時候呈現(xiàn)卵圓形，大小在250nm到350nm之間，薄膜存在不完整的現(xiàn)象，薄膜內(nèi)電子密度較高的物質(zhì)占比較大，電子密度中等的物質(zhì)則分布在電子密度較高物質(zhì)的邊緣。山羊痘病毒屬病毒在中期的形狀、大小與早期類似，但是電子密度高的物質(zhì)減少，病毒粒子直徑較小。成熟期的山羊痘病毒屬病毒中的病毒粒子致密，電子密度分布極不均勻，中央有啞鈴形的核酸芯髓。

2.3? 血清學(xué)檢測

血清學(xué)檢測是通過血清對山羊痘病毒屬病毒進(jìn)行檢測，針對具體病毒種類的不同，有很多種檢測方法，包括病毒中和試驗、免疫瓊脂擴(kuò)散試驗，酶聯(lián)免疫吸附試驗、熒光抗體試驗等。病毒中和試驗是檢測特異性較強(qiáng)的羊痘病毒的血清檢測方法，被感染動物只能產(chǎn)生低水平或中水平的抗體。免疫瓊脂擴(kuò)散試驗是將病毒在BHK-21傳代細(xì)胞中培養(yǎng)，然后重復(fù)凍融三次，與山羊痘標(biāo)準(zhǔn)血清做瓊脂擴(kuò)散試驗，會發(fā)現(xiàn)染病細(xì)胞將出現(xiàn)白色沉淀線。熒光抗體試驗使用異硫氰酸熒光標(biāo)記山羊痘病抗體，并以山羊痘熒光抗體檢驗病羊的皮膚痘疹切片，會出現(xiàn)黃綠色熒光，此熒光能被山羊痘標(biāo)準(zhǔn)陽性血清特異性抑制，可以較為準(zhǔn)確的檢測出山羊痘病毒屬病毒。血凝試驗也利用山羊痘病毒抗原有較強(qiáng)的特異性和敏感性，不會與其他病毒的抗原發(fā)生交叉反應(yīng)的特點，進(jìn)行檢測，是一種靈活、快速的檢測方法。

3? 結(jié)語

山羊痘病毒屬病毒傳播速度快，適應(yīng)力強(qiáng)，致死率高，是最危險的幾種痘類病毒之一，一旦爆發(fā)將會給地區(qū)畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的危害，因此對山羊痘病毒屬病毒的檢測方法進(jìn)行研究具有重要意義，其中病原學(xué)檢測、染色電鏡觀察、血清學(xué)檢測都是較為常見的檢查方法，應(yīng)該不斷加以深入研究和完善。

參考文獻(xiàn)

[1] 徐瀅，張琪，付明哲，等.山羊痘病毒LAMP檢測方法的建立[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2020，41（3）：12-16.