白術調節結腸黑變病黏膜狀態的實驗觀察

羊燕群 王子威 鄭澤娜 張靜 張均倡 田廣俊

[摘要]目的觀察白術對黑變病結腸黏膜的治療作用。方法將60只實驗大鼠分為正常對照組、模型組、白術低劑量組、白術中劑量組、白術高劑量組，每組各12只，給予相應生大黃液及白術液，觀察各組大鼠結腸黏膜一般情況及病理組織學改變。結果隨著白術劑量升高，肉眼可見結腸黏膜著色呈逐漸變淺趨勢，白術高劑量組與模型組差異有統計學意義（ P <0.05），顯微鏡下見黏膜層棕褐色顆粒狀物質沉積亦隨著白術劑量升高而相應變化。結論白術可改善結腸黑變病黏膜的黑變程度，減少結腸黏膜蒽醌類物質沉積，改善程度與白術液劑量呈正相關。

[關鍵詞]白術;結腸黑變病;結腸黏膜;病理組織學改變

[中圖分類號] R285? [文獻標識碼] A?? [文章編號]2095-0616（2021）23-0027-04

Experimental observation of Baizhu regulating mucosal state of melanosis coli

YANGYanqun1 WANGZiwei1 ZHENGZe'na1 ZHANGJing1 ZHANGJunchang1 TIANGuangjun

1. Department of Traditional Chinese Medicine， Shenzhen Hospital of Southern Medical University， Guangdong， Shenzhen 518101， China;2. Zhuhai Branch of Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine， Guangdong， Zhuhai 519015， China

[Abstract] Objective To observe the therapeutic effect of Baizhu on mucosa of patients with melanosis coli （MC）. Methods The 60 experimental rats were divided into the normal control group， model group， Baizhu low- dose group， Baizhu medium-dose group and Baizhu high-dose group，12 in each group. The corresponding rhubarb root and Dahuang liquid and Baizhu liquid were given， and the general conditions and histopathological changes of colon mucosa in each group were observed. Results With the increase of the dosage of Baizhu， the staining of colonic mucosa gradually became lighter with naked eyes， and there was a significant difference between the Baizhu high-dose group and the model group （P <0.05）. Microscopically， the deposition of brown granular substances in mucosal layer also changed correspondingly with the increase of the dosage of Baizhu. Conclusion Baizhu can improve the degree of melanosis of colon mucosa and reduce the deposition of anthraquinone in colon mucosa， and the improvement degree is positively correlated with the dose of Baizhu solution.

[Key words] Baizhu; Melanosis coli; Colon mucosa; Histopathological changes

隨著現代生活壓力增大及飲食結構的改變，慢性便秘發病率逐年提高。使用蒽醌類瀉劑導致的結腸黑變病（melanosiscoli， MC）隨著結腸鏡檢查的普及，其檢出率也逐年升高，且往往伴有息肉、慢性結腸炎，甚至與腫瘤的發生也有相關性[1]。結腸黑變病伴有的腹脹、便秘、排便無力的癥狀，在中醫理論中認為是“虎狼之劑”誤下之后，脾虛氣弱、傷津耗液之癥，治療當以健脾益氣、補液生津為治則。中藥白術具有健脾、益氣、養陰的作用，是 meta 分析出來最常用的治療便秘的中藥之一[2]。研究顯示白術或白術提取物對修復腸道黏膜、恢復腸道動力有確切治療效果[3]。本研究旨在明確中藥白術對結腸黑變病的治療作用，并初探其對結腸黑變病治療作用的改善位點。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1中藥制備項目所需白術（廣州至信，批號：190810）、生大黃（南城建洪，批號：1907004）一次性購齊，所有藥材品質符合《中華人民共和國藥典》2015年版標準。

白術水煎液：取生白術飲片用蒸餾水浸泡0.5 h 后高火煎煮20 min，倒出煎液，12層紗布過濾，重復煎煮2次，合并濾液，濃縮為1 g/ml 濃度藥液。

生大黃液：取生大黃飲片經70℃熱蒸餾水浸泡，過濾，提取為1 g/ml 濃度生大黃液。

以上藥液均4℃保存，當天使用藥液加熱后降至40℃左右使用。

1.1.2實驗動物8周齡 SD 大鼠180～220 g，雌雄各半，共60只，廣東省實驗動物中心提供（許可證號： SCXK 粵2018-0002）。

1.1.3主要設備顯微鏡（日本奧林巴斯 BX51T- PHD-J11），石蠟切片機（德國萊卡 RM2015）。? 1.1.4主要試劑蘇木精-伊紅染色液。

1.2方法

1.2.1分組與給藥將60只8周齡 SD 大鼠隨機分為五組：正常對照組、模型組、中藥組（低、中、高劑量組），每組各12只，按組別給予不同干預治療措施，實驗周期為8周。正常對照組：自由進食進水，對照性灌胃蒸餾水1.5 ml/100 g 體重;模型組：予每日灌胃大黃液1.5 ml/100 g 體重;中藥組在造模基礎上按照臨床分低、中、高劑量組，分別予0.3、0.6、1.2 g/100 g 體重白術水煎液灌胃。

1.2.2組織標本采集在實驗最后一天麻醉處死所有大鼠，將結腸標本用冰生理鹽水清洗后腸黏膜層向上，平鋪于試驗臺上，肉眼觀察盲腸近段結腸、中段結腸、遠段結腸及回盲部并記錄結腸黏膜的黑變程度并評分。用冰生理鹽水反復沖洗腸內容物后在大鼠盲腸端后結腸連續截取0.5 cm 結腸組織兩段，置于甲醛固定液中固定，繼續依次截取相同結腸組織置于液氮中保存待用。

1.3觀察指標

1.3.1肉眼觀察結腸黏膜黑變病情況觀察標準參照文獻[4]進行肉眼下大體評分，顏色：淺紅色0分，淺褐色1分，暗褐色2分，深褐色3分;范圍：無黑變0分，盲腸1分，盲腸和部分近段結腸2分，全結腸3分;組織學大體評分為顏色評分與范圍評分之和。

1.3.2光鏡下觀察結腸黏膜黑變病情況通過 HE 染色光鏡下觀察結腸組織病理學變化，比較各組大鼠結腸黑變病黏膜狀態。

1.4統計學方法

所有數據用 SPSS 14.0統計學軟件分析，所有實驗數據用（x ±s）表示，各組間比較采用獨立樣本 t 檢驗，兩組變量相關性分析用 Pearson 相關性分析，P <0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1肉眼觀察結腸黏膜黑變病情況

正常對照組：結腸黏膜側呈肉紅色，無黑變現象，整體光滑，結構完整。模型組：盲腸及近端結腸可見條索狀黑色病變，向結腸遠端逐漸變淺至不能看到。白術低、中、高劑量組：盲腸及近端結腸黏膜可見條索狀黑色病變，向結腸遠端逐漸變淺至不能看到。隨著白術劑量升高，結腸黏膜著色呈逐漸變淺趨勢，黑變病評分與白術給藥劑量呈負相關（ P <0.05）。見表1及圖1。

2.2病理組織學觀察

病理組織學觀察見圖2。

3討論

MC 是結腸鏡下檢查發現結腸黏膜呈暗褐色花斑樣改變的一種病變。其發病原因和慢性便秘患者長期服用含蒽醌類成分的瀉劑有密切關系[5-6]。蒽醌苷類藥物具有細胞毒性作用，可誘導結腸上皮細胞凋亡，產生的凋亡小體被單核巨噬細胞吞噬后，通過基底膜小孔轉移到結腸黏膜固有層巨噬細胞的溶酶體內，由凋亡小體轉化為褐脂素或其他色素;大量巨噬細胞沉積在結腸黏膜固有層間質內，即表現為色素沉著[7]。市面上常見通便藥如大黃、蘆薈[8]、番瀉葉等中藥含有蒽醌類物質成分，長期使用均有明確的導致 MC 發生的副作用[9-10]。有諸多文獻證據顯示 MC 與結腸息肉、間質瘤、炎癥性疾病有直接關系，如可能影響 PI3K 等蛋白的表達，通過 Ras 信號通路、TNF 信號通路等調控結腸上皮細胞的增殖與凋亡，推動腫瘤細胞的侵襲轉移;誘導原癌基因 c-myc表達上調，增加結腸、直腸癌癥發生幾率等[11]。MC 在60歲以上老人或者年輕女性中的發病率較其他人群高[12-13]。而這部分人群也是最容易出現慢性便秘并依賴口服蒽醌類瀉劑通便的人群。停止服用蒽醌類瀉劑后大部分黑變結腸可在一定時間內逆轉，但是其排便功能卻往往不能同步恢復，多數患者發展為進一步的腹脹、便秘和排便困難，甚至出現嚴重的腸動力障礙[14]。除了停止蒽醌類瀉劑的服用，口服臨床常用的通便藥物改善癥狀，目前西醫內外科對 MC 及其伴隨的排便功能障礙尚無確定的治療方案[15]。

MC 的臨床癥狀主要是便秘，大便干結或不干結，排便費力，或有腹脹、腹痛、便血等非特異性癥狀，屬于中醫“便秘”“腹脹”等范疇。有 meta 分析認為中醫藥治療結腸黑變病在緩解癥狀、改善腸黏膜病理狀態方面療效明確，與西醫相比有一定優勢[16]。夏婉等[17]認為其病機為大腸傳導功能失司，與脾胃及腎關系密切。張喜珍等[18]認為 MC 病機主要為氣陰兩虛，采用益氣養陰法口服加保留灌腸治療結腸黑變病有效。栗寧等[19]認為 MC 需從“血瘀”論治，治以活血化瘀，輔以益氣養血。付敏軍等[20]認為 MC 病位在腸，病機主要為腸燥津虧、脾胃虛弱及腎氣不足，治以滋陰潤腸、補脾益腎。丁澤林等[21]認為本病發病主要與肝、脾相關，臨床治療方面重在疏肝理氣、健運脾胃，佐以滋陰潤腸、活血化瘀之法。不論哪種病機理論，MC 的臟腑歸經總不離脾臟，病機都有“脾虛”參與其中。

白術性溫，味苦、甘，歸脾、胃經，主健脾益氣。清代陳修園《神農本草經讀》認為：“白術，此為脾之正藥。”清代張志聰《本經崇原》認為：“白術氣味甘溫，質多脂液，乃調和脾土之藥也。”臨床應用中，白術燥而作潤、溫而能和，是治療便秘和 MC 的要藥。現代藥理研究發現白術可通過調節水通道蛋白增加大便含水量從而提高結腸炭末推進率[22]。并能改善脾虛證大鼠腸道菌群，有利于腸道菌群的平衡[23]。白術還能升高“瀉劑結腸”大鼠結腸組織中 c-Kit 含量而恢復其排便功能[24]。白術提取物還能多靶點修復腸道黏膜[25]。在 meta 分析中，白術是排第一位的治療結腸黑變病的中藥。

本實驗觀察到白術液高劑量時大鼠結腸黏膜的棕褐色沉積物明顯減少，結腸黑變病評分隨著白術液劑量的升高而降低，顯示白術對黑變病結腸黏膜的改善修復程度與白術液的劑量呈現正性量效關系。因此，白術作為治療慢性便秘中的主藥，也是便秘諸型均可用到的“百搭”中藥，對結腸黑變病的黏膜狀態改善是有明確治療作用的。但是其有效性是否會繼續隨用量升高而持續升高，其最佳使用劑量是多少，是否在隨著劑量提高過程中，出現其他毒副作用，且其改善 MC 的作用機制與上皮細胞修復、神經細胞修復還是腸道菌群改善有關，尚需進一步實驗研究來逐步明確。

本實驗與本研究團隊既往的實驗研究體會及參考已有的結腸黑變病相關研究文獻資料[26-27]，認為目前結腸黑變病模型動物可選擇豚鼠或大鼠。相對于豚鼠，大鼠的價格便宜，實驗造模過程中死亡率低，是它的優勢。但是大鼠結腸黑變病模型相對豚鼠模型，病變結腸顏色淺，病變腸段短，結腸黑變病評分低。因此在選擇大鼠作為模型動物時，需要設計更長造模時間和更高劑量的蒽醌類藥物作為造模因素以確保實驗效果。

[參考文獻]

[1]周青，張丹，陳玉根.大腸黑變病322例臨床分析[J].中國中西醫結合消化雜志，2012，20（12）：551-553.

[2]王慧靜，劉瑜，孫千惠，等.基于數據挖掘結腸黑變病中藥用藥規律探究[J].世界中西醫結合雜志，2020，15（8）：1421-1425，1466.

[3]宋厚盼，謝夢洲，胡志希，等.白術、黃芪、黨參促進 IEC-6細胞損傷后的快速修復[J].中成藥，2015，37（6）：1170-1175.

[4]陳建永，潘鋒，張濤.結腸黑變病模型復制的實驗研究[J].中華中醫藥學刊，2009，27（3）：514-516.

[5]Chung-Ming Lo，Chun-Chang Chen，Yu-Hsuan Yeh，et al. Quantitative analysis of Melanosis Coli colonic mucosa using Texturalpatterns[J].Applied Sciences，2020，10（1）：404.

[6]黃政凱，林志健，王雨，等.基于生物信息與文獻數據分析大黃素致結腸黑變病的機制與風險預警[J].中國藥物警戒，2021-05，http：//kns.cnki.net/kcms/ detail/11.5219.R.20210510.1309.020.html.

[7]Jang JE，Ko MS，Yun JY，et al.Nitric oxide produced by macrophages inhibits adipocyte differentiation and promotes profibrogenic responses in preadipocytes to induce adipose tissue fibrosis[J].Diabetes，2016，65（9）：2516-2528.

[8]Masaya Iwamuro，Takehiro Tanaka，Hiroyuki Okada. Melanosis Coli due to Aloe Vera consumption： Pictures in clinical medicine[J].Internal Medicine，2020，59（20）：2633-2634.

[9]Ningning Yang，MengtingRuan，ShizhuJin.Melanosis coli： A comprehensive review[J].Gastroenterologíay Hepatología （English Edition），2020，43（5）：266-272.

[10]Said AbasseKassim，Muhammad Abbas，Weiyan Tang，et al.Retrospective study on melanosis coli as risk factor of colorectal neoplasm： A 3-year colonoscopic finding in Zhuhai Hospital， China[J].International Journal of Colorectal Disease，2020，35（5）：213-222.

[11]程一乘，郁強，劉薇，等.豚鼠結腸黑變病模型中原癌基因 c-myc、K-ras和 p53差異表達的實驗研究[J].癌癥進展，2020，18（1）：22-25.

[12]田甜，胡文煒，王瑞玲，等.結腸黑變病合并結腸息肉與性別的相關性研究[J].長春中醫藥大學學報，2020，36（4）：763-765.

[13]虎金朋，楊珍，牛敏，等.620例結腸黑變病臨床資料分析[J].中華胃腸內鏡電子雜志，2019，6（2）：66-69.

[14]王偉.“瀉劑結腸”的研究進展[J].西南軍醫，2015，17（2）：224-226.

[15]何穎華，徐佳，賈菲，等.李國棟教授從“瘀”論治結腸黑變病經驗總結[J].中國醫藥導報，2018，15（18）：140-142.

[16]李紅，李裕昌，李方玲.中醫藥治療結腸黑變病的 Meta 分析[J].河北中醫，2018，40（4）：623-627.

[17]夏婉，李如輝.中藥治療結腸黑變病1例[J].實用中醫藥雜志，2019，35（12）：1549-1550.

[18]張喜珍，馮喬林.益氣養陰法口服加保留灌腸治療結腸黑變病50例[J].中國肛腸病雜志，2018，38（10）：78.

[19]栗寧，李治兵，孫曉娜.孫曉娜從活血化瘀法論治結腸黑變病經驗[J].中國民間療法，2020，28（5）：17-18.

[20]付敏軍，高倩倩，張睿，等.鄭紅斌辨證論治結腸黑變病經驗[J].江西中醫藥，2018，49（5）：25-26.

[21]丁澤林，劉朝霞.謝晶日教授從肝脾論治結腸黑變病心得[J].中醫研究，2017，30（1）：40-41.

[22]陳思敏，關麗娜，龐峻，等.生白術對慢傳輸型便秘模型大鼠結腸水通道蛋白表達影響的研究[J].新中醫，2019，51（6）：12-16.

[23]關婷，黃海陽，黃純美，等.不同藥性歸脾經中藥對肝郁脾虛證動物模型腸道微環境的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2021，32（4）：511-517.

[24]景嵐，石欣，張波，等.白術對“瀉劑結腸”大鼠結腸 c-Kit 含量的影響[J].江蘇醫藥，2016，42（14）：1544-1546.

[25]王海霞，康顯杰，朱燕，等.基于網絡藥理學和分子對接技術探討白術治療潰瘍性結腸炎的潛在分子機制[J].浙江中醫藥大學學報，2020，44（9）：916-923，928.

[26]張兆林，陳凍伢，徐虹，等.白芨水煎劑對結腸黑變病模型豚鼠結腸上皮細胞凋亡及凋亡相關蛋白的影響[J].浙江中西醫結合雜志，2019，29（3）：191-194，260.

[27]賀穎.大黃長期給藥對大鼠結腸及其微生態的影響[D].西安：西北大學，2019：32-39.

（收稿日期：2021-06-15）