2020年北疆部分地區(qū)豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體ELISA檢測與分析

周海琴 林津如 陳明霞 屈勇剛*梁 晏*李 娜 常軍帥 張小玉

（1石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子 832003；2動物疾病防控兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆石河子 832003）

豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）是引起豬偽犬病（Pseudorabies,PR）的病原。PRV具有急性、熱性和高度接觸性傳染的特點(diǎn)，嚴(yán)重危害了生豬養(yǎng)殖企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。豬是PRV的自然宿主，自然界中只有豬是該病毒的唯一宿主[1]。感染PRV后，種豬主要表現(xiàn)為繁殖障礙，母豬產(chǎn)死胎、木乃伊胎和流產(chǎn)。PRV對仔豬危害最嚴(yán)重，對仔豬的致死率可達(dá)100%；對成年豬危害不嚴(yán)重，一般為隱性感染，感染豬只主要表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)綜合征，整體生產(chǎn)性能變差[2]。PRV感染會引起豬的機(jī)體免疫抑制，而且豬體可長期帶毒和排毒，容易并發(fā)感染其他疾病[3]。目前對于PRV的治療尚無特效藥，最好的方法是疫苗免疫，豬場多用PRV-gE基因缺失苗免疫，并通過ELISA方法檢測豬只是否存在PRV-gE抗體。通過抗體檢測可判斷豬群是否被野毒感染，為養(yǎng)豬生產(chǎn)提供幫助。

由于新疆為穆斯林人口集中地，對豬肉需求較少，而北疆地區(qū)對豬肉有較大需求，豬肉產(chǎn)量占全新疆的76.14%，故試驗(yàn)將北疆部分地區(qū)的養(yǎng)豬場作為采樣地。通過對采集的樣品進(jìn)行PRV-gE抗體檢測，根據(jù)檢測結(jié)果為豬場免疫程序的調(diào)整提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 血樣來源

2020年1—12月從北疆不同地區(qū)共采集生豬血清樣品657份。

1.1.2 試驗(yàn)儀器與材料

豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒（購自北京愛德士元亨生物科技有限公司）；微量移液器、恒溫培養(yǎng)箱、自動酶標(biāo)儀（購自美國Bio Tek儀器有限公司）；獸用采血器（購自廣州金默生物科技有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集

在豬前腔靜脈處使用一次性獸用采血器采血3～5 mL/頭，室溫靜置，待血清析出后，移至無菌EP管中，EP管依次對應(yīng)標(biāo)記，4 000 r/min，離心5 min，立即進(jìn)行ELISA檢測。

1.2.2 檢測方法

根據(jù)豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA檢測試劑盒說明書操作。室溫下，先將待檢血清、陽性對照、陰性對照均進(jìn)行2倍稀釋處理，隨后在抗原包被板的微孔中添加稀釋的待檢血清和陰、陽對照各100 μL，常溫孵育60 min；經(jīng)3～5次洗滌后加入100 μL酶標(biāo)抗體，孵育20 min；再次洗滌，每孔加入100 μL的TMB溶液，避光放置15 min，加入50 μL終止液終止反應(yīng)，測量各反應(yīng)孔中的OD650nm值，進(jìn)行結(jié)果判定。

1.2.3 判定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)

判定本試驗(yàn)成立的條件是：NC（陰性對照）－PC（陽性對照）≥0.30，否則結(jié)果不成立。若S/N＞0.70，樣品判定為陰性；若S/N≤0.60，樣品判定為陽性；若0.6＜S/N≤0.70，樣品判定為可疑。其中S為各樣品OD650nm值。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS軟件和Excel軟件進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 北疆4個地區(qū)的PRV-gE抗體水平檢測結(jié)果

由表1可知，從北疆4個地區(qū)采集的657份血清樣品中，PRV-gE抗體陽性樣品有196份，陽性率為29.83%（196/657）。烏蘇地區(qū)的血清樣品PRV-gE抗體陽性檢出率最高，為63.06%（70/111）；沙灣地區(qū)血清樣品PRV-gE抗體陽性檢出率最低，為0.00%（0/30）。烏蘇地區(qū)血清樣品PRV-gE抗體水平與其他地區(qū)均存在一定差異（＜0.05）；庫車地區(qū)血清樣品PRV-gE抗體水平與石河子地區(qū)、沙灣地區(qū)不存在差異（＞0.05）。

表1 新疆4個地區(qū)11個豬場PRV-gE蛋白抗體檢測結(jié)果

2.2 各豬場PRV-gE蛋白抗體水平

由表2可知，北疆地區(qū)11個規(guī)模化豬場（A～K）血清樣品中，PRV-gE抗體陽性樣品有196份。其中，A場的陽性檢出率最高，為83.78%（62/74）；D、H場陽性檢出率最低，均為0.00%。A場抗體水平與其他場均存在一定差異（＜0.05）；D場抗體水平與E場、H場、I場、K場差異不顯著（＞0.05）。

表2 各豬場PRV-gE蛋白抗體水平檢測結(jié)果

2.3 不同類別豬群的PRV-gE蛋白抗體水平

由表3可知，不同豬群的PRV-gE蛋白抗體水平陽性率為33.01%（170/515），試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)保育豬的PRV-gE蛋白抗體陽性率最高，為46.77%（29/62）；育肥豬陽性檢出率最低，為27.91%（12/43）。哺乳仔豬抗體水平與其他豬群均存在一定差異（＜0.05）；經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬的抗體水平差異不顯著（＞0.05）。

表3 不同類別種豬CSFV抗體檢測結(jié)果

3 討論與分析

PR是一種急性、烈性傳染病，也是威脅我國規(guī)模化豬場的主要疫病之一，能夠?qū)е氯焉锬肛i流產(chǎn)或產(chǎn)死胎[5]。本試驗(yàn)對所采集的657份血清樣品進(jìn)行PRV-gE蛋白ELISA檢測，其抗體陽性率為29.83%（196/657），略高于齊向濤[6]、劉鴿等[7]對北疆PRV-gE蛋白的ELISA檢測結(jié)果；明顯低于魏其等[8]的檢測結(jié)果（45.14%）。檢測4個地區(qū)的PRV-gE蛋白抗體水平具有明顯區(qū)別，說明PRV-gE在不同時(shí)間、不同地方的感染情況也不盡相同。11個豬場中，有9個豬場存在PRV野毒感染，這與豬場的環(huán)境、飼養(yǎng)條件、防控意識和管理人員的專業(yè)素質(zhì)等有關(guān)。不同類別豬群檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，種豬群存在一定程度的PRV野毒感染，應(yīng)加強(qiáng)種豬的免疫防疫。

4 小結(jié)

從近幾年研究結(jié)果來看[6-10]，PRV在北疆地區(qū)流行較廣，大部分豬場都有PRV野毒感染的情況。生產(chǎn)中應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和疾病預(yù)防工作，做好豬場的日常消毒工作。定期進(jìn)行抗體檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)豬群免疫中可能存在的漏洞，制定相應(yīng)的優(yōu)化改進(jìn)方案。