抗瓜氨酸化α 烯醇化酶多肽1 抗體在初治類風濕關節炎患者中的表達及其臨床價值研究

賈浩楠，王麗茹，張辰蔚，董霞，彭靜，許興路

1.黑龍江省醫院風濕免疫科，黑龍江哈爾濱 150036；2.黑龍江省醫院放射免疫特檢科，黑龍江哈爾濱 150036

類風濕關節炎（RA）是一種慢性、炎癥性自身免疫病，以滑膜炎為病理特征，主要累及雙側對稱小關節，RA 患者如未早期發現、早期診治，會導致關節畸形和功能喪失[1-2]。因此，在疾病發作時，早期識別預后不良標志物有助于臨床醫生預測病情，從而進行周密的隨訪與有效及時的治療。自身抗體的研究，有助于RA 患者早期診斷，進而早期干預，延緩疾病進展，改善預后。多個研究表明，RA 患者體內自身抗體的產生早于患者出現臨床表現的時間[3-4]。目前，抗環瓜氨酸蛋白（cCCP）抗體和類風濕因子（RF）廣泛應用于臨床[5-6]。由于RA是一種復雜的疾病，異質性強，CCP 是人工合成的瓜氨酸化多肽，不是自身抗原，并且其來源聚絲蛋白在RA關節中無表達，無法解釋RA 病因，因此發現一種新的特異性較強的自身抗體有著重要作用[7]。近年來研究人員發現，抗瓜氨酸化α 烯醇化酶多肽1（CEP-1）抗體對于RA 的聯合診斷或在血清學陰性RA 的輔助診斷中具有較好意義[8]。該研究回顧性收集2019 年4 月—2020 年5 月院內50 例病例進行分析，通過對初治RA患者血清中抗CEP-1 抗體水平的檢測，進一步探討其在RA 診斷、判斷病情活動及預后中的臨床價值。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析于該院行相關檢查的50 例初治RA 患者，30 名健康體檢者臨床資料，將RA 患者納入RA組，將健康體檢者納入健康對照組。根據抗CEP-1 抗體陽性與否將初治RA 患者分為陽性組33 例和陰性組17 例。RA 組女43 例，男7 例；年齡為20～55 歲，平均（32.25±5.67）歲；病程為2 個月～3 年，平均（1.86±0.34）年。診斷均符合2010 年的RA 分類診斷標準[9]，且所有RA 患者在入選前均未接受過激素、免疫抑制劑或生物制劑等藥物治療。對照組女20 名，男10 名；年齡22～58歲，平均（35.68±6.14）歲；均為同期來自該院體檢中心的健康體檢人員，無自身免疫性疾病、無關節痛病史。兩組一般資料對比差異無統計學意義（P>0.05）。該研究經該院醫學倫理委員會批準，且所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

采集禁食水8 h 以上的空腹外周靜脈血3～4 mL，離心后取上層血清，置于-20℃冰箱保存，以備統一進行抗CEP-1 抗體檢測。采用酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）測定抗CEP-1 抗體，檢測具體步驟嚴格按照說明書進行操作，抗CEP-1 抗體以20 RU/mL 為陽性臨界值。

1.3 觀察指標

記錄各組觀察對象抗CEP-1 抗體表達情況。記錄兩組RA 患者DAS28、改良Sharp 評分，采用Spearman相關性分析法分析初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達與DAS28、改良Sharp 評分的相關性，采用Logistic 多元回歸分析法分析初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達獨立風險因素。

1.4 評估標準

28 個關節疾病活動度評分（DAS28）用于評估患者疾病活動度[10]，分值越高表示疾病活動度越高。改良Sharp 評分用于評估患者骨侵蝕、破壞程度[11]，主要從其手部X 線片變化入手，對關節侵蝕、間隙狹窄情況進行評判，分值越高表示其結構性病變程度越嚴重。

1.5 統計方法

采用SPSS 21.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料的表達方式為（），采用t 檢驗進行組間比較，計數資料的表達方式為[n（%）]，采用χ2檢驗進行組間比較，相關性分析采用Spearman 相關模型，獨立危險因素采用Logistic 多元回歸分析評估，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組CEP-1 抗體表達情況比較

RA 組抗CEP-1 抗體陽性率為66%（33/50），顯著高于健康對照組的0%（0/30），差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 兩組DAS28、改良Sharp 評分比較

初治RA 患者中，陽性組DAS28、改良Sharp 評分顯著高于陰性組，差異有統計學意義（t=6.548、6.008，P＜0.05），見表1。

表1 兩組DAS28、改良Sharp 評分比較[（），分]

表1 兩組DAS28、改良Sharp 評分比較[（），分]

2.3 初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達與DAS28、改良Sharp 評分的相關性分析

Spearman 相關分析結果表明，初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達與DAS28、改良Sharp 評分呈正相關（P＜0.05），見表2。

表2 初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達與DAS28、改良Sharp 評分的相關性分析

2.4 初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達的多因素分析

經Logistic 多元回歸分析法分析得出，DAS28、改良Sharp 評分均可受到初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達的獨立影響（P＜0.05），見表3。

表3 初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達的Logistic 多因素分析

3 討論

RA 屬于一類慢性免疫系統疾病，患者常見的病理學特征為滑膜炎，發病后可對稱性地侵襲身體不同關節[12]，若此類患未得到有效的早期診斷、治療，其關節可能出現不可逆畸形，使其正常功能發生障礙或完全喪失。目前臨床研究認為，該病發生發展與諸多自身抗體表達有關，主要包括RF、抗CEP-1 抗體及ACPA 抗體等。

α-烯醇化酶（α-ENO）作為一類糖酵解酶，其與RA患者慢性炎癥、丙酮酸合成均存在密切關聯，屬于類型較新的一種表面蛋白，雖無法進行表面轉運，但可經某種未知途徑進行細胞表面運輸，并以纖溶酶原受體的形式在諸多上皮細胞、內皮細胞、造血干細胞表面存活，可與機體纖溶系統及血管內部發揮一定作用。近年來，有關α-ENO 報道指出，其以自身抗原的形式在諸多侵襲性、系統性的免疫疾病中活躍表達，尤其當RA患者機體出現感染、炎癥時表現更為活躍[13]。而亦有研究指出，抗CEP-1 抗體陽性表達與否與患者關節內抗原表達水平具有顯著相關性[14]，前者陽性表達伴隨患者較為嚴重的炎癥反應，進一步印證α-ENO 在RA 患者炎癥反應誘發中的作用[15]。該次研究中，RA 患者抗CEP-1 抗體陽性表達率明顯高于其他對照組，與相關研究背景符合，而RA 患者中抗CEP-1 抗體陽性組DAS28 較陰性組更高，且其表達與DAS28 呈正相關，均提示RA患者抗CEP-1 抗體陽性表達后關節疾病活動度可顯著上升，猜測其原因在于抗CEP-1 抗體陽性表達與患者慢性炎癥反應發生后α-ENO 水平的上升有關，而隨著炎癥反應的進展，患者疾病活動度可進一步受到影響，使其DAS28 明顯升高。Logistic 回歸分析得出，DAS28可受到初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達的獨立影響，原因在于抗CEP-1 抗體表達的陽性與否直接關系到患者炎癥發生情況，對其疾病活動度的影響亦極為顯著，其可借助p38 絲裂原作用將蛋白激酶（MAPK）活化，并通過對單核巨噬細胞的刺激增加促炎介質的分泌產生，亦可刺激α-ENO 在關節組織的表達[16]，使RA 患者炎癥效應期中參與的炎性介質水平更高，影響到關節活動度，這與楊夢溪等[16]研究結果中關于炎癥機制解釋部分較為相似，且該文中RA 患者抗CEP-1 抗體陽性率為66%，與其研究結果64.3%較為相近。

骨破壞作為RA 患者關節病變的重要表現，因其具有不可逆性，臨床應對措施以早診斷、早預防為主，對RA 患者的治療不僅需納入對其具體癥狀的考慮，還需以關節影像檢查為重要觀察點。該次研究中，RA 患者中抗CEP-1 抗體陽性組改良Sharp 評分較陰性組更高，且該抗體表達與改良Sharp 評分具有正相關性，而在羅采南等[17]研究中，發現此類患者抗CEP-1 抗體表達與骨破壞存在顯著相關性（r=0.673，P＜0.05），均提示抗CEP-1 抗體陽性RA 患者骨破壞程度更嚴重，其原因在于此類患者炎癥反應程度較重，長期持續可因炎性物質侵襲加重患者骨破壞程度，導致其改良Sharp 評分明顯升高。而經Logistic 回歸分析可發現，改良Sharp 評分可受到初治RA 患者抗CEP-1 抗體表達的獨立影響，其亦證實了此類患者發生骨破壞與其自身炎癥有關。

綜上所述，RA 患者大多表現為抗CEP-1 抗體陽性，其表達與其疾病活動度、骨破壞程度關系密切，可為臨床早期診療提供一定作用。