復方苦參合劑的穩定性試驗研究

谷世平 段雪云 蔡權 李森 范恒

〔摘要〕 目的 研究復方苦參合劑的穩定性。方法 采用鈉鈣玻璃輸液瓶包裝，在高溫（60 ℃）、高濕（90%±5%）、強光[（4 500±500）lx]照射下10 d;在室溫自然貯存18個月;于（40±2） ℃、相對濕度（75%±5%）條件下貯存6個月，按復方苦參合劑質量標準進行檢測;采用觀察、口嘗法確定其性狀;采用pH計測定pH值;比重瓶法測定相對密度;HPLC法測定含量;微生物限度檢查法測定微生物限度。結果 與0月比較，影響因素試驗（0、5、10 d）、加速試驗（0、1、2、3、6個月）、長期試驗（0、3、6、9、12、18個月）中各時間點，復方苦參合劑的性狀、pH值含量、相對密度、微生物限度檢查中各項指標均無明顯變化（P>0.05），含量變化也在合格范圍內。結論 復方苦參合劑的有效期暫定12個月，應儲存于干燥陰涼處。

〔關鍵詞〕 復方苦參合劑;穩定性;影響因素試驗;加速試驗;長期試驗

〔中圖分類號〕R285? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.08.012

Study on the Stability of Compound Sophorae Mixture

GU Shiping1， DUAN Xueyun1， CAI Quan2，3*， LI Sen3， FAN Heng3

（1. Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine/Hubei Province Academy of Traditional Chinese Medicine， Wuhan， Hubei 430061， China; 2. The Fifth Hospital of Huangshi City， Huangshi， Hubei 435005， China; 3. Union Hospital of Tongji Medical College， Huazhong University of Science and Technology， Wuhan， Hubei 430022， China）

〔Abstract〕 Objective To study the stability of Compound Sophorae Mixture. Methods Soda-lime glass infusion bottle was used for packaging; high temperature （60 ℃）， high humidity （90%±5%）， strong light [（4 500±500） lx] for 10 days; natural storage at room temperature for 18 months; at （40±2） ℃， relative humidity （75%±5%） for 6 months; and Compound Sophorae Mixture was tested according to the quality standard of Compound Sophorae Mixture; observation， tasting method was used to determine traits; the pH value was determined by a pH meter; relative density was detected through the pyknometer method; HPLC method was used to detect the content; microbial limit test was used to determine microbial limit. Results Compared with 0 month， there were no significant changes （P>0.05） in the indicators of the traits， pH content， relative density and microbial limit inspection in each time point in influencing factor test （0， 5， 10 d）， accelerated test （0， 1， 2， 3， 6 months） and long-term test （0， 3， 6， 9， 12， 18 months）， and the content changes were within the qualified range. Conclusion The effective period of the Compound Sophorae Mixture is tentatively 12 months， and it should be stored in a dry and cool place.

〔Keywords〕 Compound Sophorae Mixture; stability; influencing factor test; accelerated test; long-term test

復方苦參合劑是以華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院中西結合科二十多年治療潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis， UC）常用經驗方制成，由苦參5 g、地榆炭5 g、青黛1 g、白及3 g、甘草3 g組成，具有清熱解毒、燥濕殺蟲、生肌止血、消腫斂瘡等功效，適用于中醫痢疾及西醫UC活動期（濕熱證）、克隆恩病或放射性腸炎患者的口服治療[1-3]。通過長期的臨床應用及實驗研究[4-6]發現，復方苦參合劑可祛大腸濕熱穢濁之邪，促進腸黏膜糜爛、潰瘍的愈合，修復腸道黏膜屏障，減輕腸道的炎癥反應，改善機體低下的免疫功能狀態。臨床治療UC患者3 000多例，療效顯著，有效率達96%以上，其療效優于臨床常用的同類中西醫藥物[7-10]。因此，復方苦參合劑的開發和應用顯得尤為重要和必要，為確保臨床用藥安全有效，本研究將依據《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則9001項下原料藥物與制劑穩定性試驗指導原則[11]，對復方苦參合劑進行穩定性考察，目前復方苦參合劑已取得湖北省醫療機構注冊批件，本研究將為進一步的新藥研究開發奠定基礎。

1 儀器與試劑

1.1? 儀器

Waters2695高效液相色譜儀（美國Waters公司）;BT25S型十萬分之一分析天平（德國賽多利斯科學儀器有限公司）;AR1140/C萬分之一分析天平（美國奧豪斯公司）;ZY-600U薄層色譜自動成像分析系統（北京先驅威鋒技術開發公司）;LHH-80SD藥品穩定性試驗箱（上海一恒科學儀器有限公司）;CSH-111GD-IPM藥品強光紫外照射試驗箱（重慶創測科技有限公司）。

1.2? 試劑

復方苦參合劑由武漢協和醫院制劑中心生產，批號：20181015、20181017、20181022、20181112、20181114、20181116;苦參堿對照品（批號：110805-201709，純度98.7%）、氧化苦參堿對照品（批號：110780-201508，純度92.5%）、槐定堿對照品（批號：110784-201706，純度98.4%）、苦參對照藥材（批號：121019-201708）、白及對照藥材（批號：121262-201706）均購自中國食品藥品檢定研究院，所有試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1? 性狀考察

按復方苦參合劑質量標準“性狀”項下描述進行考察，觀察復方苦參合劑色澤、氣味、有無變質現象。本品為棕褐色的液體;有少量搖之易散的沉淀，氣微香，味苦。具體檢驗結果見表1-3。

2.2? 薄層色譜鑒別

2.2.1? 苦參的鑒別? 取復方苦參合劑10 mL，加氨水調節pH=11，置分液漏斗中，用二氯甲烷振搖提取3次，每次20 mL，合并提取液，蒸干，殘渣加二氯甲烷1 mL溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加二氯甲烷制成0.5 mg/mL的苦參堿對照品溶液。取槐定堿對照品，加乙醇制成0.2 mg/mL的槐定堿對照品溶液。

按照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0502）試驗[11]，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-濃氨試液（2∶4∶3∶0.2）為展開劑，飽和5 min，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖1。檢驗結果見表1-3。

2.2.2? 白及的鑒別? 取復方苦參合劑 20 mL，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，揮至 1 mL，作為供試品溶液。另取白及對照藥材1 g，加70%甲醇20 mL，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加水10 mL使之溶解，按樣品同法制成對照藥材溶液。

按照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0502）試驗[11]，吸取供試品溶液5～10 μL、對照藥材溶液5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲醇（6∶2.5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱數分鐘，放置30～60 min。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖2。檢驗結果見表1-3。

2.3? 相對密度測定

按《中華人民共和國藥典》2015年版四部相對密度檢查法（通則0601）測定[11]。檢驗結果見表1～3。

2.4? pH值測定

按《中華人民共和國藥典》2015年版四部pH檢查法（通則0631）測定[11]。檢驗結果見表1-3。

2.5? 含量測定

按本品質量標準“含量測定”項下方法測定[12-13]。本品每1 mL含苦參堿、氧化苦參堿總計，不得少于 0.50 mg。見圖3。

2.5.1? 色譜條件與系統適用性試驗? 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（81∶8∶11）為流動相;柱溫為30 ℃;檢測波長為220 nm。

2.5.2? 對照品溶液的制備? 取苦參堿、氧化苦參堿對照品適量，精密稱定，以乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（81∶8∶11）混合溶液分別制成每1 mL含苦參堿78.96 μg、氧化苦參堿74.00 μg的溶液，即得。

2.5.3? 供試品溶液的制備? 精密量取離心（12 000 r/min，10 min，離心直徑10 cm）后的本品上清液2 mL，加濃氨溶液0.2 mL、飽和氯化鈉溶液1.0 mL;用二氯甲烷振蕩提取4 次，每次5 mL，合并提取液，蒸干，殘渣用5 mL二氯甲烷溶解后上堿性氧化鋁柱（100～200目，5 g，內徑10 mm），用二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇（7∶3）各20 mL洗脫，收集兩次的洗脫液，蒸干，殘渣以流動相溶解并定容至10 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.5.4? 測定方法? 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，測定，即得。測定結果見表1-3。

2.6? 微生物限度檢查

按《中華人民共和國藥典》2015年版四部微生物限度檢查法檢查[11]。結果見表1～3。

2.7? 影響因素試驗

將復方苦參合劑（批號：20181112）置于高溫（60 ℃）、高濕（90%±5%）、強照射[（4 500±500）lx]下10 d后，分別于第0、5、10天取樣，檢測性狀、薄層鑒別、pH值、相對密度、含量、微生物限度。

復方苦參合劑（批號：20181112）在不同時間點各指標差異無統計學意義（P>0.05），該藥物在高溫、高濕以及強光照射下穩定性較好。見表1。

2.8? 加速試驗

采用鈉鈣玻璃輸液瓶包裝3批復方苦參合劑，于（40±2） ℃、相對濕度（75%±5%）條件下貯藏6個月，分別于第1、2、3、6個月末取樣，檢測性狀、相對密度、pH值、微生物限度檢查。

經檢測，各項指標均合格，在不同時間點各指標差異無統計學意義（P>0.05），苦參堿、氧化苦參堿的含量稍有上升趨勢，但變化趨勢不明顯，RSD均小于5.0%。見表2、圖4。

2.9? 長期試驗

采用鈉鈣玻璃輸液瓶包裝3批復方苦參合劑，于室溫下自然貯存18個月，分別于第3、6、9、12、18個月取樣，檢測性狀、相對密度、pH值、微生物限度檢查。

各項檢測指標均合格，在不同時間點差異無統計學意義（P>0.05），苦參堿、氧化苦參堿的含量1～18個月間變化趨勢不明顯，均在合格范圍，RSD均小于5.0%。見表3、圖5。

3 討論

苦參為復方苦參合劑方中君藥，現代藥理研究[14]表明，苦參煎劑具有抑菌、抗炎、升高白細胞等功效;氧化苦參堿、苦參堿為苦參的主要成分，具有抑制體液免疫和調節細胞免疫的作用[15]，是方中主要藥物活性成分，在加速試驗中，其總量變化隨著時間的延長而稍有上升，在長期試驗中沒有明顯的變化，這些數據充分說明二者之間的相互轉化，所以選擇苦參堿及氧化苦參堿的總量為檢測指標能更好地控制藥物的質量。復方苦參合劑采用鈉鈣玻璃輸液瓶包裝，在高溫（60 ℃）、高濕（90%±5%）、強光[（4 500±500） lx]照射下10 d后;在室溫自然貯存18個月;于（40±2） ℃、相對濕度（75%±5%）條件下貯存6個月，按《中華人民共和國藥典》2015版四部合劑“通則”項下[11]檢測均符合本品質量標準要求;而含量是合劑的主要檢測項，故本實驗將作為穩定性研究的關鍵檢測指標，影響因素、加速穩定性、長期穩定性試驗中的含量變化趨勢平緩，RSD均小于5.0%。根據《湖北省醫療機構制劑注冊管理實施細則》附件九“醫療機構制劑使用期限規定”，結合本品穩定性試驗研究結果，暫定復方苦參合劑的有效期為12個月，陰涼處保存。

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