新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒比對研究*

劉冬冬，何紹平，姜亞運，袁成良

(德陽市人民醫院檢驗科,四川 德陽 618000)

2020年，一種新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)被發現，研究顯示存在人傳人現象[1-2]。病毒基因測序后，與核苷酸序列數據庫(GenBank)比對，發現其與非典(SARS) 病毒相似[3]。新型冠狀病毒感染席卷全球，在許多國家暴發流行，隨著各地病例數的增多，部分地區報道了無癥狀感染者的存在[4]。無癥狀感染者的存在可導致疑似感染者及密切接觸者數量大量增加，加速疫情的蔓延。相比病毒測序，實時熒光PCR試劑研發和生產速度較快[5]，操作簡單、耗時短、成本低[6]，所以實時熒光PCR檢測新型冠狀病毒核酸成為確診COVID-19的主要方法。自中國疾控中心公布新型冠狀病毒基因序列后，許多公司迅速推出新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒。但目前僅有少量文獻對新型冠狀病毒核酸檢測試劑進行評價[7-9]。

本研究以已獲得中國疾控中心批準上市的上海之江生物技術有限公司的新型冠狀病毒核酸檢測試劑作為比對試劑，檢測了14例COVID-19確診患者，以及211例普通入院患者咽拭子樣本中的新型冠狀病毒核酸，對不同試劑的新型冠狀病毒核酸陽性檢出率及Ct值進行了對比觀察，評價邁克生物股份有限公司的同類試劑的檢測性能，為臨床及檢測部門選取合適的檢測試劑提供依據。

1 資料與方法

1.1標本來源 14例咽拭子陽性標本來源于四川省疾控中心確診的COVID-19患者，211例咽拭子陰性標本來源于2020年2月18日至2月24日211例普通入院篩查患者。

1.2檢測試劑與儀器 新型冠狀病毒核酸檢測試劑：試劑A(上海之江生物科技股份有限公司，批號P20200209，國械注準20203400057)，試劑B(邁克生物股份有限公司，批號020041，國械注準20203400184)。兩種試劑的基本信息見表1。

表1 兩種核酸檢測試劑盒的基本信息

1.3檢測方法 在生物安全柜內，打開標本轉運箱，取出待檢標本。將咽拭子采樣管充分振蕩混勻后靜置10 min，取上清液1 mL 轉移至2 mL 螺口管中。采用上海之江生物科技有限公司生產的病毒DNA/RNA提取試劑盒(批號:20200201)和EX3600全自動核酸提取儀提取咽拭子的RNA，具體操作參照試劑盒說明書。參照各試劑盒說明書進行PCR反應體系配制、反應參數和程序的設置。采用ABI 7500實時熒光定量PCR儀進行PCR反應，結果以Ct值表示。

2 結 果

2.1兩種試劑檢測的新型冠狀病毒ORF1ab基因、N基因、E基因的Ct值比較 兩種試劑對14例標本的各基因檢測Ct值比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。兩種檢測試劑結果判讀對14例COVID-19確診患者標本判讀均為陽性，211例普通入院患者判讀為210例陰性，1例無效，重復實驗后判讀為陰性，考慮是操作的偶然誤差。

表2 兩種核酸檢測試劑盒的檢測結果比較

2.2兩種試劑檢測的新型冠狀病毒 ORF1ab基因、N基因、E基因的相關性分析 為進一步探究兩種試劑檢測結果的一致性，將邁克和之江的新型冠狀病毒檢測結果作散點圖，并進行相關性分析。結果顯示，兩種試劑檢測新型冠狀病毒中的ORF1ab基因、N基因、E基因的相關系數(r)分別為0.824、0.834和0.890，均P<0.01，見圖1。由此，我們認為邁克與之江的新型冠狀病毒核酸檢測試劑檢測結果一致性良好。

A.ORF1ab基因；B.N基因；C.E基因。

2.3參考比對試劑，邁克檢測結果的相對偏差分析 參考之江新型冠狀病毒核酸檢測結果，邁克的ORF1ab基因、N基因的相對偏差均在±16%以內，且均在評價范圍的標準之內，見表3。內參基因的相對偏差略大，可能是兩種試劑盒所檢測的基因片段存在差異。

表3 兩種核酸檢測試劑盒的檢測結果

3 討 論

目前，國外感染人數仍不斷增加，全球疫情仍十分嚴峻。國家衛生健康委員會發布了《關于加快推進冠病毒核酸檢測的實施意見》，提出積極擴大新型冠狀病毒核酸檢測范圍，全力排查風險隱患，要求重點人群“應檢盡檢”，其他人群“愿檢盡檢”。因此，國內外對核酸檢測試劑需求量日益增加。COVID-19診斷較為復雜，需結合流行病史、臨床表現和實驗室檢查結果綜合判斷[10]。根據《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》，實時熒光PCR檢測新型冠狀病毒核酸陽性為確診病例的病原學“金標準”之一[11]。

2020年1月，我國科研工作人員通過基因組測序成功破譯新型冠狀病毒全基因組序列，并提交在GenBank和virologic.org網站。隨后，各種新型冠狀病毒檢測試劑盒相繼面世，因PCR方法有著靈敏度高、特異性強和易操作的優點[12]，目前已成為檢測新型冠狀病毒核酸的主要方法[13]。加之臨床診療工作需要檢測得及時和準確，無癥狀感染者需早發現、早隔離，實時熒光PCR的核酸檢測仍是其主要的確診方法。但新型冠狀病毒核酸檢出率只有30%～50%[14]，除去檢測樣本的影響，檢測試劑盒未經過大量臨床樣本優化也是一個重要因素[15]。所以，新型冠狀病毒核酸檢測試劑經過完整的性能驗證及臨床試驗驗證，對減少結果假陰性或假陽性十分重要。

本研究中，以我國法定檢驗機構檢定合格的首個新型冠狀病毒檢測產品，且已獲得中國疾控中心國家藥品監督管理局批準的上海之江生物技術有限公司的新型冠狀病毒核酸檢測試劑作為比對試劑，與邁克生物技術有限公司的新型冠狀病毒核酸檢測試劑進行比較。采用盲法平行測定，數據顯示陽性檢出率和陰性符合率一致性，ORF1ab基因、N基因和E基因的檢測相關性較強，檢測相對偏差均在可接受范圍內。綜上所述，與已獲批上市的試劑比對，邁克生物技術有限公司的新型冠狀病毒核酸檢測試劑可滿足臨床需求，具有臨床適用性。