急性白血病初診及緩解后bcl-2表達水平的比較及臨床意義

袁冬妹，張敬東，孟美麗，何程明

（贛州市人民醫院血液內科，江西 贛州 341000）

目前化療為臨床治療急性白血病（AL）的常用方式，可有效降低機體腫瘤細胞含量，達到抑制疾病發展的目的，但該病治療難度大且易復發，因此，對患者治療后的預后評估至關重要，可為進一步治療提供依據[1]。白血病基因2（bcl-2）是一種耐藥基因，在AL患者中有較高表達，既往臨床評估患者預后多對患者骨髓細胞中的bcl-2水平表達進行檢測，但應用中發現，仍有部分患者存在較高的復發率[2]。相關研究表明，治療后，骨髓活檢組織中仍存在成簇分布的原始bcl-2細胞，因此，聯合骨髓活檢組織檢測可進一步提升預后價值[3]。鑒于此，本研究回顧性分析2016年1月至2020年1月于本院確診并接受治療的91例AL患者的臨床資料，通過研究急性白血病骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平，旨在探討急性白血病初診及緩解后白血病基因2（bcl-2）表達水平及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2016年1月至2020年1月于本院確診并接受治療的91例AL患者的臨床資料，其中男44例，女47例；年齡26～41歲，平均年齡（33.26±3.29）歲；體質量41～73 kg，平均體質量（57.19±5.16）kg。分別在治療前、緩解后抽取所有患者骨髓活檢組織和骨髓液，檢測bcl-2表達水平，并分析急性白血病骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平對患者預后的預測價值。

1.2 納入及排除標準 納入標準：符合急性髓系白血病或急性淋巴細胞白血病診斷標準；同意化療；依從性較高；臨床資料完整，且患者及家屬均簽署知情同意書。排除標準：精神狀態異常，無法正常交流；治療依從性差；先天性發育不良；合并全身感染性、免疫系統疾病；嚴重基礎疾病，如心、腦、肝等重要器官存在器質性病變。

1.3 方法

1.3.1 骨髓細胞中bcl-2水平檢測 分別在治療前、緩解后抽取所有患者骨髓液，在所獲得的骨髓液中加入PBS緩沖液，緩沖液與骨髓液的比例為2∶1，然后按等比例加入淋巴細胞分離液上層，800×g離心20 min，吸取中間細胞層，加入ACK裂解殘存的紅細胞，離心獲取單個核細胞，采用細胞免疫熒光標記法測定患者骨髓單細胞內的bcl-2水平。

1.3.2 骨髓活檢組織中bcl-2水平檢測 分別在治療前、緩解后抽取所有患者骨髓活檢組織，并用10%中性福爾馬林固定液固定，采用免疫組化染色法測定患者骨髓活檢組織內bcl-2水平。

1.4 統計學方法 采用SPSS 24.0統計學軟件進行數據處理，計數資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，計量資料以“±s”表示，行t檢驗，采用Logistics回歸分析檢驗AL患者骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平于預后的相關性，并繪制患者工作曲線（ROC）得到曲線下面積（AUC），檢驗AL患者骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平對預后的預測價值：AUC值＞0.90表示預測性能較高，0.71～0.90表示有一定的預測性，0.50～0.70表示預測性能較差，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 治療前后骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平比較 聯合化療后，骨髓活檢組織中bcl-2、骨髓細胞中bcl-2水平均低于治療前，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 治療前后骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平比較（±s）Table 1 Comparison of bcl-2 expression levels in bone marrow biopsy tissue and bone marrow cells before and after treatment(±s)

表1 治療前后骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平比較（±s）Table 1 Comparison of bcl-2 expression levels in bone marrow biopsy tissue and bone marrow cells before and after treatment(±s)

注：bcl-2，白血病基因2

時間治療前（n=91）聯合化療后（n=91）t值P值骨髓活檢組織中bcl-2 2.05±0.81 0.97±0.26 12.111＜0.001骨髓細胞中bcl-2 1.01±0.37 0.46±0.18 12.751＜0.001

2.2 Logistics回歸分析結果 將AL患者預后作為因變量，將骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平作為協變量，進行Logistics回歸分析，回歸方程為Y=14.582-4.220X1-10.938X2，提示骨髓活檢組織和骨髓細胞中低bcl-2表達水平是AL患者預后的保護因素（OR＜1，P＜0.05），相關參數見表2。

表2 Logistics回歸分析結果Table 2 Logistics regression analysis results

2.3 骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平在AL患者預后的預測價值 將AL患者預后作為狀態變量，骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平作為檢驗變量，繪制ROC曲線，結果顯示，骨髓活檢組織中bcl-2表達水平單獨預測的AUC為0.861，具有一定的預測價值；骨髓細胞中bcl-2表達水平單獨預測AUC為0.854，具有一定的預測價值；骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平聯合預測AL患者預后的AUC為0.944，具有較高的預測價值。

3 討論

AL為臨床血液系統常見的惡性疾病，是造血干細胞的惡性克隆性疾病，發病骨髓中異常的原始細胞及白血病細胞大量增殖，蓄積于骨髓并抑制正常造血功能，也可廣泛浸潤肝、脾、淋巴結等髓外臟器，臨床癥狀主要表現為面色蒼白、疲乏、出血、發熱等，如不及時治療，不僅會損害呼吸、消化、泌尿等系統，還可造成酸堿電解質平衡紊亂，危脅患者健康及生命[4-6]。化療為治療AL的常用方式，但臨床應用中發現，該病治療難度較大，化療后患者的緩解率及5年生存率均較低。因此，本研究旨在尋找一種評估患者預后的相關指標，為臨床進一步治療提供可靠依據。

本研究結果顯示，緩解后骨髓活檢組織中bcl-2、骨髓細胞中bcl-2水平均低于治療前；Logistics回歸分析，得到回歸方程Y=14.582-4.220X1-10.938X2，提示骨髓活檢組織和骨髓細胞中低bcl-2表達水平是AL患者預后的保護因素（OR＜1，P＜0.05）；繪制ROC曲線，結果顯示，骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2表達水平預測AL患者預后的AUC為0.944，具有較高的預測價值。其原因在于，bcl-2是一種耐藥基因，具有明顯抑制細胞凋亡的作用，在AL患者中有較高表達，化療緩解后，患者機體bcl-2水平顯著降低，表明bcl-2高表達是急性白血病難治、復發的重要原因，對判斷預后有一定臨床價值。但在研究過程中還發現，達到骨髓細胞學緩解的患者，bcl-2表達處于低水平時仍有較高的復發率，因此，可能存在部分AL患者骨髓細胞檢查并不能完全代表真正意義上的完全緩解[7-9]。而對患者骨髓活檢組織檢測發現，骨髓細胞檢查已達完全緩解標準，緩解后骨髓活檢組織中仍存在成簇分布的原始bcl-2細胞，由此可見，同時進行骨髓活檢組織和骨髓細胞bcl-2檢測能更準確評估AL的預后[10-12]。

綜上所述，AL緩解后骨髓活檢組織中bcl-2、骨髓細胞中bcl-2水平均低于治療前，骨髓活檢組織和骨髓細胞中bcl-2水平表達與AL患者的預后水平密切相關，聯合檢測具有較高的臨床價值，可為臨床評估AL患者疾病恢復情況并實施有效的治療方案提供參考依據，值得推廣應用。