脂聯素及其受體在非小細胞肺癌組織中的表達及預后評估價值研究

鄭曉宇

（廣西南寧市第一人民醫院胸心血管外科，廣西 南寧 530021）

非小細胞肺癌（NSCLC）是臨床常見惡性腫瘤，具有較高的發病率及死亡率，嚴重危害人類身體健康及生命安全。目前，臨床治療NSCLC常采用手術、化療、放療等綜合治療手段，可顯著提高患者生存率，但同一治療方法針對相同病理類型及分期的患者，預后差異較大[1]。因此，需尋找新的治療靶點，以衡量NSCLC患者預后指標，增強臨床治療效果。研究發現，脂聯素（APN）與腫瘤的發生密切相關，可抑制癌細胞的轉移和增殖，同時，其受體脂聯素受體l（AdipoR1）和脂聯素受體2（AdipoR2）在多種腫瘤組織中均有表達[2]。但關于脂聯素及其受體與NSCLC的關系研究報道較少。基于此，本研究旨在探討APN及其受體在NSCLC組織中的表達及預后評估價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2013年3月至2014年10月收治的NSCLC患者40例，其中將手術切除的肺癌組織作為實驗組，手術切除的癌旁正常肺組織作為對照組。其中男26例，女14例；年齡36～64歲，平均年齡（53.47±6.49）歲；臨床分期：Ⅰ/Ⅱ期19例，Ⅲ/Ⅵ期21例；有吸煙史16例，有吸煙后毛細支氣管炎史11例，合并肺氣腫5例，有無淋巴結轉移17例。本研究獲得本院醫學倫理委員會審核批準。

1.2 納入及排除標準 納入標準：經病理診斷確診者；無嚴重精神系統疾病者；有認知、書寫、溝通能力者；患者及家屬均簽署知情同意書。排除標準：心臟、肝、腎等臟器疾病者；術前接受抗腫瘤治療，如化療、放療等者；不能配合檢查或中途退出者。

1.3 方法 術中取手術切除肺癌組織塊1 cm3，距離癌組織5 cm處選取正常肺組織塊l cm3，常規10%多聚甲醛緩沖液固定，石蠟包埋備用。采用免疫組化方法檢測NSCLC組織及癌旁正常肺組織中APN、AdipoR1和AdipoR2表達，將蠟塊標本行4μm厚度的連續切片，常規脫蠟，并修復抗原，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）浸洗3 min，3次，將切片擦干放入盛水的濕盒內。滴加10%正常山羊血清封閉液，室溫20 min，甩去多余液體，勿洗。滴加50～100μL一抗（A液：兔抗人脂聯素受體多克隆抗體），置于4℃冰箱內孵育過夜；滴加二抗（B液：生物素標記的山羊抗兔IgG），37℃溫箱內孵育20 min，PBS清洗3 min，3次；滴加C液，鏈霉菌抗生物素蛋白一過氧化物酶溶液20 min，用PBS浸洗5 min，4次。用3，3一二氨基聯苯胺（DAB）顯色，蘇木素輕度復染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，經顯微鏡觀察。選擇組織完整、具有代表性的切片拍照，每張切片隨機選擇3個視野（光鏡250倍），連續計數癌細胞100個，記錄陽性細胞數，并計算百分比。陽性細胞百分比，0分：≤5%；1分：6%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：＞75%。染色強度：0分：無著色；1分：淺黃色；2分：深黃色；3分：棕褐色。結果判定：最終評分=染色強度評分+陽性細胞所占百分比評分。

1.4 觀察指標 ①分析APN、AdipoR1和AdipoR2在NSCLC組織與正常癌旁組織中的表達。②分析NSCLC與APN、AdipoR1、AdipoR2的相關性。

1.5 統計學方法 采用SPSS 23.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以“±s”表示，行t檢驗，計數資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，多因素分析采用Logistic回歸方法，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NSCLC組織及癌旁正常肺組織中APN及其受體表達評分 實驗組APN、AdipoR1、AdipoR2表達評分均低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 NSCLC組織及癌旁正常肺組織中APN及其受體表達評分比較（±s，分）Table 1 Comparison of APN and its receptor expression scores in NSCLC tissue and normal lung tissue adjacent to cancer(±s,scores)

表1 NSCLC組織及癌旁正常肺組織中APN及其受體表達評分比較（±s，分）Table 1 Comparison of APN and its receptor expression scores in NSCLC tissue and normal lung tissue adjacent to cancer(±s,scores)

注：APN，脂聯素；AdipoR1，脂聯素受體l；AdipoR2，脂聯素受體2

組別對照組（n=40）實驗組（n=40）t值P值APN 6.02±1.01 2.94±1.12 12.916 0.000 AdipoR1 5.39±1.07 2.41±1.40 10.696 0.000 AdipoR2 5.09±1.17 2.32±1.48 9.286 0.000

2.2 影響NSCLC的線性回歸分析 線性回歸分析顯示，APN、AdipoR1、AdipoR2表達與NSCLC相關，見表2。

表2 影響NSCLC的線性回歸分析Table 2 Linear regression analysis affecting NSCLC

3 討論

近年來，NSCLC發病率不斷升高，其病因尚不明確，常認為與吸煙、環境、電離輻射、既往肺部慢性感染等因素有關，具有侵襲性、轉移性、隱匿性等特點，患者早期伴有胸部腫痛、低熱、咳嗽等癥狀，晚期出現食欲不振、疲乏、咳血，嚴重危脅患者生命安全[3-4]。因此，需采取積極的治療手段，提高患者生存質量，但肺癌的治療除依據TNM分期外，尚需考慮其他因素影響，尋找能改善預后的治療靶點尤為重要[5]。

本研究結果顯示，實驗組APN、AdipoR1、AdipoR2表達評分均低于對照組（P＜0.05）；線性回歸分析顯示，APN、AdipoR1、AdipoR2表達與NSCLC相關。表明APN及其受體在NSCLC組織中低表達，可用于疾病診斷、預后評估。肥胖與癌癥的發生與發展有關，肥胖人群肺癌的發生率較高，脂肪組織作為能量貯存器官，也具備內分泌功能，其分泌的脂肪細胞因子具有多種生物活性[6-7]。APN是脂肪細胞特異分泌的內源性生物活性分子，具有調節糖脂代謝、改善胰島素抵抗、抗炎、抗動脈粥樣硬化及抗腫瘤的作用，與冠心病、糖尿病、高血壓、腫瘤等多種疾病密切相關[8-9]。脂聯素的生物學作用是在脂聯素受體的介導下發生的，其受體包括AdipoR1、AdipoR2，其中AdipoR1主要表達在骨骼肌細胞，對APN的球狀結構域具有高親和力，但對全長APN親和力低，AdipoR2主要表達在肝細胞，對球形及全長型APN有中等親和力[10]。APN通過其受體激活環磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A（PKA）和單磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）兩條通路，可阻礙腫瘤血管生成，抑制細胞增殖、遷移，并促使腫瘤細胞凋亡，發揮抗癌作用[11]。另一方面，APN可抑制巨噬細胞的吞噬活性及巨噬細胞前體的發育，減輕機體炎癥反應，進而減少腫瘤的發生[12-13]。此外，APN通過直接作用于癌基因和抑癌基因，從而抑制細胞的增殖及誘導細胞的凋亡。

綜上所述，APN及其受體在NSCLC組織中呈低表達，為NSCLC的早期診斷、治療及預后評估提供參考依據。