痛風性關節炎患者HLA-B＊5801基因型攜帶率及相關實驗室指標分析

方忠俊， 季蔚青， 張婧嫻， 吳金濤， 吳偉華， 蔣 瑩， 韓振格，何東儀， 邊艷琴， 沈 瑜， 肖漣波， 謝東浩， 孫 陽

（1.上海市光華中西醫結合醫院檢驗科，上海 200052；2.上海市中醫藥研究院中西醫結合關節炎研究所，上海 200052；3.上海市光華中西醫結合醫院藥劑科，上海 200052）

痛風性關節炎（gouty arthritis，GA）是由痛風引發的多因素關節病，患者由于血尿酸（uric acid，UA）長期處于高水平，最終形成尿酸鹽結晶，沉積于關節滑膜囊、軟骨、骨質等組織中，形成微晶體，誘發免疫反應[1]。別嘌呤醇是臨床降低血UA的一線藥物，在其引發的不良反應中，藥疹的發生率為2%～5%，嚴重皮膚過敏反應的發生率為0.1%～0.4%[2]。有研究結果顯示，別嘌呤醇誘導的嚴重皮膚過敏反應與HLA-B*5801基因型密切相關，且過敏反應的嚴重程度與攜帶HLA-B*5801基因型呈正相關[3]。另外，過敏反應的發生還與各種炎癥細胞、細胞因子密切相關；丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）可反映肝功能狀態，參與了藥物的轉化和代謝。為此，本研究擬探討過敏反應、炎癥反應、肝功能相關指標與GA患者攜帶HLA-B*5801基因型之間的相關性。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2018年12月—2019年12月上海市光華中西醫結合醫院確診為GA并行HLA-B*5801基因型檢測的患者120例，其中男106例、女14例，年齡18～83歲；根據UA水平分為低水平UA（<420 μmol/L）組（36例）、中水平UA（420～600 μmol/L）組（50例）、高水平UA（>600 μmol/L）組（34例）；3組之間年齡、性別、病程、病因、貧血狀況、腎功能差異均無統計學意義（P>0.05）。所有患者均按2015年美國風濕病學會（American College of Rheumatology，ACR）和歐洲風濕病聯盟（European League Against Rheumatism，EULAR）發布的痛風分類標準[4]確診，排除類風濕性關節炎、化膿性關節炎、創傷性關節炎、蜂窩織炎、假性痛風、銀屑病關節炎及其他關節炎患者，排除合并其他疾病的患者。以上海市光華中西醫結合醫院體檢健康者50名作為正常對照組，其中男42名、女8名，年齡21～79歲；均無肝功能不全、腎功能不全、關節疼痛及慢性病史等。GA組與正常對照組之間年齡和性別差異均無統計學意義（P>0.05）。本研究經上海市光華中西醫結合醫院倫理委員會批準（倫理審查受理號：2020-K-17）。

1.2 方法

收集所有患者的臨床資料，包括基本信息、主要病史等。采集所有患者用藥前、正常對照者體檢當日的空腹靜脈血。HLA-B*5801基因型檢測試劑盒購自北京華夏時代基因科技發展有限公司，檢測儀器為TL998A基因擴增熒光檢測儀（西安天隆科技有限公司）。UA、ALT、ALP試劑盒購自浙江伊利康生物技術有限公司，檢測儀器為AU680全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司），計算ALT/ALP比值。C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）采用PA-990全自動特定蛋白分析儀（深圳普門公司）及配套試劑檢測。中性粒細胞百分比、淋巴細胞百分比、嗜酸性粒細胞百分比（the percentage of eosinophil，EO%）、平均血小板體積（mean platelet volume，MPV）采用XT-4000i全自動血液分析儀（日本Sysmex公司）及配套試劑檢測，計算中性粒細胞/淋巴細胞比值（neutrophil/lymphocyte ratio，NLR）。紅細胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）采用SD-1000動態血沉壓積測試儀（北京賽科希德公司）檢測。

1.3 統計學方法

采用SPSS 21.0軟件和Excel 2007軟件進行統計分析。呈正態分布的計量數據以±s表示，2個組之間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析。計數資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗。偏態分布的數據用中位數（M）[四分位數（P25～P75）]表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗。采用Excel 2007軟件中的Correl函數分析各項目之間的相關性。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 GA患者HLA-B*5801基因型的分布

120例GA患者中有35例（29.2%）攜帶HLA-B*5801基因型（攜帶組）、85例（70.8%）未攜帶HLA-B*5801基因型（未攜帶組）。男、女性之間HLA-B*5801基因型攜帶率差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 GA患者HLA-B＊5801基因型的分布 例

2.2 GA組與正常對照組各項指標的比較

GA組UA、NLR、EO%、CRP、ESR、ALT/ALP比值均高于正常對照組（P<0.05），MPV低于正常對照組（P<0.05）。見表2。

表2 GA組與正常對照組各項指標的比較

2.3 HLA-B*5801基因型攜帶組與未攜帶組各項指標的比較

HLA-B*5801基因型攜帶組EO%、MPV高于未攜帶組（P<0.05），UA低于未攜帶組（P<0.05）。2個組之間NLR、CRP、ESR、ALT/ALP比值差異均無統計學意義（P>0.05）。見表3。

表3 HLA-B＊5801基因型攜帶組與未攜帶組各項指標的比較

2.4 不同UA水平各組各項指標的比較

除中水平UA組EO%和低水平UA組MPV與正常對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）外，其他各項指標不同UA水平各組與正常對照組比較差異均有統計學意義（P<0.05）。低水平UA組、中水平UA組、高水平UA組ALT/ALP比值依次升高（P<0.05）。高水平UA組EO%高于中水平UA組（P<0.05），NLR和ESR高于中水平UA組和低水平UA組（P<0.05）。3組之間MPV、CRP差異均無統計學意義（P>0.05）。見表4。

表4 不同UA水平各組與正常對照組各項指標的比較

2.5 NLR、EO%、MPV、CRP、ESR、ALT/ALP比值與UA的相關性分析

NLR、ESR、ALT/ALP比值與UA均呈正相關（r值分別為 0.959、0.953、0.994，P<0.05），MPV與UA呈負相關（r=-0.998，P<0.05），EO%、CRP與UA均無相關性（r值分別為0.648、0.091，P>0.05）。

3 討論

GA是臨床的常見病，目前尚不能完全治愈，臨床治療方案以抑制UA生成為主。別嘌呤醇是GA的常用治療藥物，但該藥物易引起不良反應。HLA-B*5801基因型與別嘌呤醇代謝有關，我國漢族健康人群HLA-B*5801基因型攜帶率約為10%[5]。云雄等[6]的研究結果顯示，在海南省漢族人群中，使用別嘌呤醇治療的GA患者的HLA-B*5801基因型攜帶率為25.50%。本研究120例GA患者中，HLA-B*5801基因型的攜帶率為29.2%。攜帶HLA-B*5801基因型的GA患者使用別嘌呤類藥物后引起藥物不良反應的機制較為復雜。隨著對HLA-B基因多態性與藥物關系研究的深入，學者們認為在治療GA的過程中，別嘌呤類藥物在機體代謝作用的影響下，形成了類似于修飾抗原的藥物分子，可與主要組織相容性復合物（major histocompatibility complex，MHC）、T細胞（抗原）受體（T cell receptor，TCR）相互作用，形成可與人類白細胞抗原B（human leukocyte antigen B，HLA-B）分子結合的藥物-肽復合物，激活效應T細胞釋放免疫介質，導致嚴重的適應性免疫反應[7]。有研究結果顯示，攜帶HLA-B*5801基因型的GA患者使用別嘌呤醇治療時，易發生嚴重的史蒂文斯-約翰遜綜合征（Stevens-Johnson syndrome，SJS）和中毒性表皮壞死松解癥（toxic epidermal necrolysis，TEN）[8-9]。因此，建議臨床在使用別嘌呤醇治療前，應先檢測GA患者HLA-B*5801基因型的攜帶情況，以降低藥物不良反應的發生風險。

GA患者血液UA長期處于高水平狀態，嘌呤代謝紊亂，UA生成過多、排泄減少，導致血中UA水平升高，尿酸鹽沉積于關節、腎臟、血管壁，會引發全身性病變；高水平UA還會影響或伴隨其他代謝性疾病的發生，易導致患者自身免疫紊亂[10]。本研究結果顯示，GA組UA和NLR均明顯高于正常對照組（P<0.05），且UA與NLR呈正相關（r=0.959，P<0.05）。原因可能是UA形成鈉鹽結晶體后沉積在血管、軟骨、關節滑膜中，誘導免疫細胞、單核/巨噬細胞活化，并使大量中性粒細胞聚集，導致炎性反應的發生[11]。高水平UA作為內源性危險信號分子，可被炎癥小體核苷酸結合寡聚化結構域樣受體3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）識別，激活半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶1，引導白細胞介素（interleukin，IL）1β、IL-18轉錄加工，促使IL-1β被釋放到胞外，誘導局部組織炎癥及細胞凋亡[12-13]。另外，GA患者成纖維細胞分泌的腫瘤壞死因子α、IL-1β等炎癥因子作用于滑膜細胞、軟骨細胞及巨噬細胞，引發細胞炎性病變，造成滑膜、關節炎癥，長期炎性病變可損傷軟骨[14]，進一步加重GA患者的關節損傷。

本研究結果顯示，GA組EO%明顯高于正常對照組（P<0.05），且HLA-B*5801基因型攜帶組EO%高于未攜帶組（P<0.05）。嗜酸性粒細胞可在藥物及相關協同作用下分泌粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、IL-3、IL-5等炎癥因子，并趨化聚集到效應部位，釋放炎性顆粒蛋白和促纖維化炎癥遞質，啟動由T細胞、B細胞共同參與的繼發性免疫反應，引起免疫性病理損傷[15]。因此，高UA血癥、攜帶HLA-B*5801基因型可能會激發嗜酸性粒細胞誘導的免疫反應，導致患者局部炎性病變的發生、發展。本研究結果顯示，GA組ESR、CRP明顯高于正常對照組（P<0.05），且ESR與UA呈正相關（r=0.953，P<0.05）。ESR、CRP是常用的炎癥監測指標，與骨組織損傷及破壞程度密切相關。在骨組織破壞的活動期，ESR、CRP均明顯升高，因此這2項指標可用于評估GA患者的骨組織損傷程度及療效，還可作為GA的輔助診斷指標[16]。

本研究結果顯示，GA組MPV明顯低于正常對照組（P<0.05），且與UA呈負相關（r=-0.998，P<0.05）。有研究結果顯示，過多的炎癥介質可抑制巨核細胞生成，限制大體積血小板的形成，從骨髓中生成更多小體積血小板；在關節軟組織的微循環中，大體積血小板易形成血栓，導致更多的關節積液產生，這些因素均可導致MPV下降[17]。

肝臟在藥物的生物轉化過程中尤為重要。若肝功能受損，藥物代謝產生的有毒代謝物將不能被有效清除，進而加重藥物的毒副作用，最終可能會導致免疫功能紊亂。本研究結果顯示，GA組ALT/ALP比值明顯高于正常對照組（P<0.05），且與UA呈正相關（r=0.994，P<0.05）。這說明GA患者的肝功能已受損，可能會影響藥物代謝產生的有毒代謝物的清除，導致有害物質在機體內積聚，從而加重關節組織損傷。

綜上所述，GA患者HLA-B*5801基因型攜帶率較高，檢測HLA-B*5801基因型及相關實驗室指標（UA、NLR、EO%、CRP、ESR、ALT/ALP比值、MPV）有助于監測及綜合評估GA患者的疾病狀態。