鹽酸氨溴索注射液與3種支氣管擴張劑配伍穩定性考察*

曹榮娟，李祥勝，李 琪，孟祥云△

（1.安徽省合肥市第二人民醫院，安徽 合肥230001；2.安徽省食品藥品檢驗研究院，安徽 合肥230051）

氨溴索屬黏液溶解劑，可與支氣管擴張劑聯合霧化吸入治療慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）、慢性支氣管炎急性發作、難治性肺炎等呼吸系統疾病，且具有協同作用［1－5］。我院常用霧化吸入用支氣管擴張劑包括硫酸特布他林霧化液、吸入用硫酸沙丁胺醇溶液及吸入用異丙托溴銨溶液，臨床常選擇其中之一與鹽酸氨溴索注射液聯合溶于少量0.9%氯化鈉注射液中霧化使用，但該類配伍為臨床經驗性用藥，國內外文獻鮮有報道其穩定性，缺乏安全性依據。本研究中模擬臨床用藥，考察相關配伍的穩定性，為臨床合理用藥提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

M20型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；XPE205型電子分析天平、SevenMulti型pH計（瑞士Mettler Toledo公司）；GWF－5J型微粒分析儀（天津天河醫療儀器有限公司）。

1.2 試藥

異丙托溴銨對照品（批號為100522－200601，含量100.0%），沙丁胺醇對照品（批號為100204－200702，含量99.5%），硫酸特布他林對照品（批號為100273－201202，含量100.0%）；鹽酸氨溴索對照品（批號為100599－200502，含量100.0%），均購自中國食品藥品檢定研究院；吸入用異丙托溴銨溶液（勃林格殷格翰醫藥有限公司，批號為7982008，規格為每支2 mL∶500 μg）；吸入用硫酸沙丁胺醇溶液（葛蘭素史克有限公司，批號為FW0374，規格為每支2.5 mL∶5 mg）；硫酸特布他林霧化液（阿斯利康制藥有限公司，批號為BBHT，規格為每支2 mL∶5 mg）；鹽酸氨溴索注射液（勃林格殷格翰醫藥有限公司，批號為628096，規格為每支2 mL∶15 mg）；0.9%氯化鈉注射液（NS，華潤雙鶴藥業股份有限公司，批號為1705193E，規格為每瓶250 mL）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 配伍溶液中異丙托溴銨及鹽酸氨溴索含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：ShiseidoCAPCELLPAKC18MGⅡ柱（250mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.01 mol／L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，用磷酸調pH至5）－乙腈（20∶80，V／V）；流速：1.0 mL／min；檢測波長：210 nm（異丙托溴銨）、245 nm（鹽酸氨溴索）；柱溫：35℃；進樣量：20 μL。

2.1.2 溶液制備

取異丙托溴銨對照品11.76 mg、鹽酸氨溴索對照品13.59 mg，精密稱定，制成含異丙托溴銨1.176，2.352，5.888，11.760，23.520 μg／mL和含鹽酸氨溴索6.795，13.590，33.975，67.950，135.900 μg／mL的系列混合對照品溶液。模擬臨床用藥配比（5 mL NS＋1支異丙托溴銨＋2支氨溴索）制備配伍溶液，精密量取1.0 mL，分別置10 mL和50 mL容量瓶中，用10%乙腈水溶液定容，搖勻，分別作為異丙托溴銨、鹽酸氨溴索供試品溶液。模擬該臨床用藥配比，以水分別替代鹽酸氨溴索和異丙托溴銨，同供試品溶液制備方法分別制備缺鹽酸氨溴索和異丙托溴銨的陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學考察

專屬性試驗：取2.1.2項下混合對照品溶液及陰性對照品溶液各適量，按2.1.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（見圖1）。結果2種陰性對照品溶液色譜中，在與混合對照品溶液色譜相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。

圖1 異丙托溴銨與鹽酸氨溴索高效液相色譜圖1.ipratropium bromide 2.ambroxolA，A′.Mixed reference solution B.Negative reference solution without ipratropium bromide C.Negative reference solution without ambroxol hydrochlorideFig.1 HPLC chromatogram of ipratropium bromide and ambroxol hydrochloride

線性關系考察：精密量取2.1.2項下系列混合對照品溶液，按2.1.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以進樣質量（X，ng）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程，異丙托溴銨為Y1＝875.51X1－1 336.78（r＝0.999 9，n＝5），鹽酸氨溴索為Y2＝1 311.10X2－1 955.21（r＝0.999 9，n＝5）。結果表明，異丙托溴銨、氨溴索進樣量分別在23.5～470.4 ng和135.9～2718.0ng范圍內與其相應峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密量取混合對照品溶液（含異丙托溴銨11.76 μg／mL、含鹽 酸氨溴索67.950 μg／mL）20 μL，按2.1.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果異丙托溴銨峰面積的RSD為0.54%（n＝6），鹽酸氨溴索峰面積的RSD為0.09%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：按2.1.2項下方法分別制備異丙托溴銨、鹽酸氨溴索的供試品溶液。室溫下放置0，1，2，3，5，8，12 h時，按2.1.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果異丙托溴銨含量的RSD為0.68%（n＝7），鹽酸氨溴索含量的RSD為0.07%（n＝7），表明室溫下供試品溶液中2種組分在12 h內穩定性良好。

重復性試驗：按2.1.2項下方法制備供試品溶液，平行6份，按2.1.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果異丙托溴銨含量的RSD為1.23%（n＝6），鹽酸氨 溴索含量的RSD為0.66%（n＝6），表明方法重復性良好。

回收試驗：精密量取配伍溶液0.5 mL、混合對照品溶 液（含 異 丙 托 溴 銨23.52 μg／mL、鹽 酸 氨 溴 索135.900 μg／mL）1.0 mL，置同一10 mL容量瓶中，加10%乙腈水溶液定容，搖勻，得異丙托溴銨供試品溶液。精密量取配伍溶液0.5 mL、混合對照品溶液（含異丙托溴銨23.52 μg／mL、鹽酸氨溴索135.900 μg／mL）10.0 mL，置同一50 mL容量瓶中，加10%乙腈水溶液定容，搖勻，得鹽酸氨溴索供試品溶液。按2.1.1項下色譜條件，記錄峰面積，計算回收率。結果見表1。

表1 異丙托溴銨和鹽酸氨溴索的回收試驗結果（n＝6）Tab.1 Results of the recovery tests of ipratropium bromide and ambroxol hydrochloride（n＝6）

2.2 配伍溶液中沙丁胺醇及氨溴索含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱、流速、柱溫、進樣量同2.1.1項；流動相：0.01 mol／L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，用磷酸調pH至5）－乙腈，梯度洗脫，乙腈以10%比例保持至4.5 min，至5.5 min時升至25%；檢測波長：223 nm（沙丁胺醇）、245 nm（鹽酸氨溴索）。

2.2.2 溶液制備

取沙丁胺醇對照品11.01 mg、鹽酸氨溴索對照品13.37 mg，精密稱定，制成含沙丁胺醇1.095，2.191，5.477，10.955，21.910 μg／mL和鹽酸氨溴索6.685，13.370，33.425，66.850，133.700 μg／mL的系列混合對照品溶液。模擬臨床用藥配比（5 mL NS＋1支沙丁胺醇＋2支氨溴索）制備配伍溶液，精密量取1.0 mL，置50 mL容量瓶中，用10%乙腈水溶液定容，搖勻，作為沙丁胺醇、鹽酸氨溴索供試品溶液。模擬該臨床用藥配比，以水替代鹽酸氨溴索和沙丁胺醇，同供試品溶液制備方法分別制備缺鹽酸氨溴索和沙丁胺醇的陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

專屬性試驗：取2.2.2項下混合對照品溶液及陰性對照品溶液各適量，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（見圖2）。結果2種陰性對照品溶液色譜中，在與混合對照品溶液色譜相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。

圖2 沙丁胺醇與鹽酸氨溴索配伍溶液高效液相色譜圖1.salbutamol 2.ambroxolA，A′.Mixed reference solution B.Negative reference solution without salbutamol C.Negative reference solution without ambroxol hydrochlorideFig.2 HPLC chromatogram of salbutamol and ambroxol hydrochloride

線性關系考察：精密量取2.2.2項下系列混合對照品溶液，按2.2.1項下色譜條件進樣，記錄峰面積，以進樣質量（X，ng）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程，沙丁胺醇為Y1＝1 704.71X1＋304.12（r＝0.9999，n＝5），鹽酸氨溴索為Y2＝1 281.58X2－529.05（r＝0.999 9，n＝5）。結果表明，沙丁胺醇、鹽酸氨溴索進樣量在21.9～438.2 ng和133.7～2 674.0 ng范圍內與其相應峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密量取混合對照品溶液（含沙丁胺醇10.955 μg／mL、含 鹽 酸 氨 溴 索66.850 μg／mL），按2.2.1項下色譜條件進樣測定，連續進樣6次，記錄峰面積。結果沙丁胺醇峰面積的RSD為0.17%（n＝6），鹽酸氨溴索峰面積的RSD為0.02%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：按2.2.2項下方法制備沙丁胺醇、鹽酸氨溴索的供試品溶液。室溫下放置0，1，2，3，5，8，12 h時按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果沙丁胺醇含量的RSD為0.19%（n＝7），鹽酸氨溴索含量的RSD為0.04%（n＝7），表明室溫下供試品溶液中2種組分在12 h內穩定性良好。

重復性試驗：按2.2.2項下方法制備供試品溶液，平行6份，按擬訂色譜條件進樣，記錄峰面積，并計算含量。結果沙丁胺醇含量的RSD為0.21%（n＝6），鹽酸氨溴索含量的RSD為0.24%（n＝6），表明方法重復性良好。

回收試驗：精密量取配伍溶液0.5mL、混合對照品溶液（含沙丁胺醇21.910μg／mL、鹽酸氨溴索133.700μg／mL）1.0 mL，置同一50 mL容量瓶中，加10%乙腈水溶液定容，搖勻，得沙丁胺醇和鹽酸氨溴索的配伍溶液。按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表2。

表2 沙丁胺醇和鹽酸氨溴索回收試驗結果（n＝6）Tab.2 Results of the recovery tests of salbutamol and ambroxol hydrochloride（n＝6）

2.3 配伍溶液中特布他林及鹽酸氨溴索含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱、流動相、流速、柱溫、進樣量同2.2.1項下；檢測波長：215 nm（特布他林）、245 nm（鹽酸氨溴索）；進樣量：20 μL。

2.3.2 溶液制備

取特布他林對照品11.80 mg、鹽酸氨溴索對照品13.51 mg，精密稱定，制成含異丙托溴銨1.178，2.355，5.888，11.776，23.553 μg／mL，含鹽酸氨溴索6.755，13.510，33.775，67.550，135.100 μg／mL的系列混合對照品溶液。模擬臨床用藥配比（5 mL NS＋1支特布他林＋2支氨溴索）制備配伍溶液，精密量取1.0 mL，置50 mL容量瓶中，用10%乙腈水溶液定容，搖勻，作為特布他林、鹽酸氨溴索的供試品溶液。模擬該臨床用藥配比，以水替代鹽酸氨溴索和特布他林，同供試品溶液制備方法分別制備缺鹽酸氨溴索和特布他林的陰性對照品溶液。

2.3.3 方法學考察

專屬性試驗：取2.3.2項下混合對照品溶液及陰性對照品溶液各適量，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（見圖3）。結果2種陰性對照品溶液色譜中，在與混合對照品溶液色譜相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。

圖3 特布他林與鹽酸氨溴索高效液相色譜圖1.terbutaline 2.ambroxolA，A′.Mixed reference solution B.Negative reference solution without terbutaline C.Negative reference solution without ambroxol hydrochlorideFig.3 HPLC chromatogram of terbutaline and ambroxol hydrochloride

線性關系考察：精密量取2.3.2項下系列混合對照品溶液20 μL，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以進樣量（X，ng）為橫坐標、峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，得回歸方程，特布他林為Y1＝1 762.26X1＋5 931.90（r＝0.999 9，n＝5），鹽酸氨溴索為Y2＝1 290.43X2－1 626.35（r＝0.999 9，n＝5）。結果表明，特布他林和鹽酸氨溴索進樣質量分別在23.6～471.1 ng和135.1～2702.0ng范圍內與其相應峰面積線性關系好。

精密度試驗：精密量取混合對照品溶液（含特布他林11.776 μg／mL、含鹽酸氨溴索67.550 μg／mL）20 μL，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，連續進樣6次，記錄峰面積。結果特布他林峰面積的RSD為0.23%（n＝6），鹽酸氨溴索峰面積的RSD為0.10%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：按2.3.2項下方法分別制備特布他林、鹽酸氨溴索的供試品溶液。室溫下放置0，1，2，3，5，8，12 h時按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果特布他林含量的RSD為0.58%（n＝7），鹽酸氨溴索含量的RSD為0.19%（n＝7），表明室溫下供試品溶液中2種組分在12 h內穩定性良好。

重復性試驗：按2.3.2項下方法制備供試品溶液，各6份，按2.3.1項下色譜進樣測定，記錄峰面積。結果特布他林含量的RSD為0.58%（n＝6）、鹽酸氨溴索含量的RSD為0.58%（n＝6），表明方法重復性良好。

回收試驗：精密量取配伍溶液0.5 mL、混合對照品 溶 液（含特布他林23.553 μg／mL、含鹽酸氨溴索135.100 μg／mL）1.0 mL，置同一50 mL容量瓶中，加10%乙腈水溶液定容，搖勻，分別得沙丁胺醇和鹽酸氨溴索的供試品溶液。按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果見表3。

表3 特布他林和鹽酸氨溴索回收試驗結果（n＝6）Tab.3 Results of the recovery tests of terbutaline and ambroxol hydrochloride（n＝6）

2.4 配伍溶液其他項檢查

2.4.1 外觀及pH檢查

取3種配伍溶液，分別于0，1，2，4，6，8 h時觀察其外觀變化，測定pH。結果8 h內配伍溶液外觀均澄清透明，無色變，無氣體、沉淀、渾濁產生，且pH穩定。詳見表4。

表4 3種配伍溶液8 h內pH變化情況Tab.4 pH changes of three compatible solutions within 8 h

2.4.2 不溶性微粒

取3種配伍溶液，以2020年版《中國藥典》微粒光阻法測定其不溶性微粒數。結果見表5。

表5 3種配伍溶液的不溶性微粒變化（≥10 μm／25 μm，粒）Tab.5 Changes of insoluble particles in three compatible solutions（≥10 μm／25 μm，grain）

2.4.3 配伍溶液穩定性考察精密量取分別放置0，1，2，4，6，8 h后的3種配伍溶液1.0 mL，依法分別制備供試品溶液。按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算各組分含量。結果表明，3種配伍溶液中各組分在8 h內穩定性良好。結果見表6。

表6 3種配伍溶液放置不同時間后各組分的含量測定結果Tab.6 Results of content determination of each component in three compatible solutions after placing for different time

3 討論

預試驗中，異丙托溴銨與鹽酸氨溴索混合時，在200～400 nm波長范圍內掃描。結果顯示，異丙托溴銨無特征吸收峰，故選擇靠近末端吸收的210 nm為檢測波長；鹽酸氨溴索在245 nm波長處有最大吸收，確定其檢測波長為245 nm。沙丁胺醇與鹽酸氨溴索混合同時，在200～400 nm波長范圍進行掃描。結果顯示，沙丁胺醇和鹽酸氨溴索分別在223 nm和245 nm波長處有最大吸收，故分別作為兩者的檢測波長。特布他林與鹽酸氨溴索混合時，在200～400 nm波長范圍進行掃描。結果顯示，特布他林和鹽酸氨溴索分別在215 nm和245 nm波長處有最大吸收，故分別作為兩者的檢測波長。

鹽酸氨溴索注射液藥品說明書中僅推薦了靜脈使用，未推薦霧化吸入，但該類藥物目前在國外已有霧化吸入劑型。藥物霧化后轉化成細小霧粒，更易到達支氣管終末端和肺泡，同時避免了肝臟的“首過效應”，藥物起效的速度及程度均優于靜脈給藥［6－7］。國內也有較多關于在常見呼吸道疾病中霧化吸入使用鹽酸氨溴索進行化痰、排痰治療的經驗報道，且取得了較好療效［8－10］。

我院臨床常將鹽酸氨溴索注射液與前述3種霧化吸入型支氣管擴張劑聯合霧化使用，用于治療AECOPD及支氣管哮喘等呼吸系系統疾病，收效良好。但近年來的臨床應用發現，關于氨溴索注射劑配伍禁忌的報道很多，存在用藥風險；同時有關霧化吸入藥物配伍的信息也非常有限，臨床藥劑學數據庫收錄的《Trissel混合組分的穩定性》和Trissel［http：／／trissels2.rcl.com／tsweb／（accessed 2007 Dec1）］提供了多種霧化吸入藥物配伍的相關數據，其中也包括2種及其以上藥物在同一霧化器中配伍使用的相容性和穩定性數據。數據庫資料顯示，氨溴索注射液與上述3種支氣管擴張劑的相容性評價無足夠證據。因此，明確其在臨床常用溶劑NS中的配伍穩定性，對于確保患者的用藥安全具有十分重要的意義。

本研究中分別考察了3種支氣管擴張劑溶液與鹽酸氨溴索注射液在NS中配伍的穩定性，并建立了在同一色譜條件下（雙波長高效液相色譜法）同時測定特布他林、沙丁胺醇、異丙托溴銨分別與鹽酸氨溴索配伍含量的高效液相色譜法，結果表明，該方法操作簡便，回收率高，重復性好。另參照2020年版《中國藥典》微粒光阻法測定供試品溶液中不溶性微粒的數量，結果顯示，供試品溶液8 h內的不溶性微粒檢出數量符合標準，且配伍溶液8 h內的外觀、pH、不溶性微粒、各主藥含量均無明顯變化。表明上述3種支氣管擴張劑分別與鹽酸氨溴索注射液在NS中配伍具有良好的穩定性，均符合臨床用藥要求。