ELISA 法在艾滋病HIV 抗體篩查中的應(yīng)用價值

馬 丹

（無錫市疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗科，江蘇 無錫 214000）

艾滋病（acquired immune deficiency syndrome）是臨床中危害性極大的傳染病之一，主要是由于感染人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）導(dǎo)致的[1]。HIV 會對機體的免疫系統(tǒng)造成攻擊，破壞淋巴細胞，導(dǎo)致患者喪失免疫功能，增加了其他疾病的感染率，致死率極高[2]。AIDS 具有傳播速度快、潛伏期長、危害范圍廣等特點，及時、有效的診斷及監(jiān)測是控制HIV病毒傳播的主要措施，對臨床治療及患者預(yù)后也有重要的意義[3]。HIV 抗體檢測是臨床判斷HIV感染的重要指標，雖然檢測方法較多，但對于HIV 抗體的初篩，仍面臨著種種困難，不同方法的檢驗結(jié)果存在一定的差異[4]。本研究主要分析AIDS 檢驗中HIV 抗體酶聯(lián)免疫吸附劑測定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）的篩查價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年12 月-2020 年12 月無錫市疾病預(yù)防控制中心共359 例疑似AIDS 患者作為研究對象，其中男性324 例，女性35 例，年齡19～60 歲，平均年齡（35.16±6.11）歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫印跡法檢測 嚴格遵照試劑盒說明書進行判斷。HIV-1 抗體陽性：檢測出2 條env 帶（gp160/gp41 和gp120）以及gag（p17、p24、p55）或pol（p31、p51、p66）帶；HIV 抗體陰性：無病毒特異性皮帶或僅檢出p17 抗體無其他條帶。HIV 抗體不確定性：有任何病毒特意條帶，但不足以評價為陽性；HIV-2 抗體陽性：HIV-1 陽性或不確定基礎(chǔ)上有HIV-2 清晰條帶。

1.2.2 膠體金快速法 首先制備待標記蛋白溶液，將pH 7.0 的氯化鈉溶液與待標記蛋白透析，當多余鹽離子去除后，進行10000 g 4 ℃離心處理，持續(xù)1 h，保證聚合物徹底清除。隨后準備待標膠體金溶液，先用0.1 mol/L 氯化氫調(diào)節(jié)膠體金液pH 值，根據(jù)待標記蛋白需求的不同，對膠體金的pH 值調(diào)節(jié)后分別裝入不同試管，每個試管1 ml。

1.2.3 ELISA 法 將待檢血液以3000 r/min 的速率離心，分離血清，根據(jù)HIV 抗體檢測試劑盒說明進行ELISA 法檢測，具體步驟如下：先取出酶標板，分別設(shè)置3 孔陽性對照、2 孔陰性對照、1 孔空白對照、1孔樣品。除空白孔外，其余分別對應(yīng)陽性、陰性對照組以及樣品各100 μl。經(jīng)孵育30 min、洗板6 次后拍干。除空白孔外，每孔均加入酶標記抗原100 μl，再次孵育20 min、洗板6 次后拍干。增加底物液，避光反應(yīng)15 min 后再加入終止液。通過酶標儀讀取不同孔的吸光度（OD）值。

1.3 觀察指標 以免疫印跡法檢測結(jié)果作為金標準，分析ELISA、膠體金法檢測陽性率、靈敏度、特異度、檢測時間及成本，并分析ELISA 篩查結(jié)果的影響因素。靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異度=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 通過SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以（）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以（n）表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膠體金法和ELISA 法檢測陽性率、靈敏度、特異度比較 359 例疑似AIDS 患者中，免疫印跡法檢測顯示HIV 抗體陽性337 例，陽性率為93.87%。ELISA 法檢測HIV 抗體陽性率為93.04%（334/359），高于膠體金法的87.74%（315/359），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。ELISA 法靈敏度為97.95%（334/341）、特異度為83.33%（15/18），高于膠體金法的95.17%（315/331）、21.43%（6/28），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 膠體金法和ELISA 法檢測結(jié)果比較（n）

2.2 膠體金法和ELISA 法檢測時間及成本比較ELISA 法檢測時間長于膠體金法，但檢測成本低于膠體金法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 膠體金法和ELISA 法檢測時間及成本比較（）

表2 膠體金法和ELISA 法檢測時間及成本比較（）

2.3 ELISA 法篩查結(jié)果影響因素 ELISA 法檢測HIV 抗體共出現(xiàn)7 例假陽性，其中2 例因血液標本未妥善處理、2 例血液標本污染、3 例血液標本溶血。

3 討論

HIV 病毒是一種攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒，也是AIDS 發(fā)病的主要原因[5]。當患者感染HIV 病毒后，機體內(nèi)的CD4+T 細胞會受到嚴重損傷，使得免疫功能逐漸失調(diào)，導(dǎo)致其他細菌、病毒的入侵，對患者的生命安全造成了嚴重的影響[6]。AIDS 的潛伏期較長，未發(fā)病前患者不會表現(xiàn)出任何癥狀，但此時仍可以通過血液、體液進行傳播，危害嚴重[7]。近年來，全球AIDS 的發(fā)病率逐年上升，已經(jīng)成為全球性的公共衛(wèi)生問題，受到了社會的廣泛關(guān)注。

定期進行AIDS 檢驗，及時發(fā)現(xiàn)HIV 病毒，早診斷、早治療是預(yù)防AIDS 的重要措施之一。目前臨床中檢測HIV 病毒的方法較多，如免疫印跡法、膠體金法、ELISA 法等[8]。免疫印跡法是臨床檢測HIV 的“金標準”，由于檢驗步驟較為復(fù)雜，因此多用于確診試驗，靈敏度與特異度較高。膠體金法主要通過膠體金進行檢測，由于膠體金的外觀為紅色，因此檢測過程中安全性較高，且標記物穩(wěn)定性強，檢測過程簡單，反應(yīng)時間一般在30 min 內(nèi)，但該方法診斷陽性率較低，HIV 病毒敏感性相對較差，因此其結(jié)果準確性不高[9]。ELISA 法的檢測原理是當抗體與酶結(jié)合后，不會導(dǎo)致抗體免疫性反應(yīng)的特異性變化，對酶活性也無明顯影響，補充底物后能夠使基質(zhì)水解呈色，能夠改變還原性氫體的顏色，并通過呈色發(fā)現(xiàn)酶，從而在細胞水平上顯示抗體的部位，具有較高的特異性、敏感性[10]。本研究結(jié)果顯示，359 例疑似AIDS 患者中免疫印跡法檢測顯示HIV 抗體陽性337 例，陽性率93.87%。ELISA 法和膠體金法檢測HIV 抗體陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。ELISA 法檢測HIV 抗體陽性率、靈敏度、特異度高于膠體金法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；且ELISA 法檢測時間長于膠體金法，但檢測成本低于膠體金法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。由此可以看出，膠體金法和ELISA 法均是檢驗HIV 抗體的有效方式，但相比之下，ELISA 法的陽性準確率更高。同時，ELISA 法雖然時間較長，但檢測成本較低，患者接受能力強，可作為臨床首選的檢測方式。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，ELISA 法檢測HIV 抗體共出現(xiàn)7 例假陽性，其中2 例因血液標本未妥善處理、2 例血液標本污染、3 例血液標本溶血。因此，在對HIV 抗體進行ELISA 法檢測時，應(yīng)注意以下幾方面：①血液標本是臨床檢測的主體，一旦標本發(fā)生異常，會嚴重影響檢測結(jié)果的準確性，導(dǎo)致假陰性、假陽性等情況，根據(jù)血液標本的影響因素，包括內(nèi)源性干擾和外源性干擾[11]；②合理選擇試劑，臨床中選用的試劑必須經(jīng)注冊批準且檢驗通過，根據(jù)臨床評估結(jié)果、鑒定報告內(nèi)容選擇特異度、靈敏度較高的試劑盒[12]，因此檢測前，應(yīng)對試劑進行全面的預(yù)處理；③標本質(zhì)量是影響臨床檢測結(jié)果的另一個重要因素[13-15]，血清分離時應(yīng)保證完全徹底分泌，避免發(fā)生纖維蛋白混入血清樣本導(dǎo)致的假陽性；血清在保存時應(yīng)冷凍保存，避免反復(fù)凍融對蛋白分子造成破壞，導(dǎo)致假陰性結(jié)果；此外，臨床檢測時，應(yīng)在試驗前至少進行2 次洗板機沖洗，保證清除游離血紅蛋白，從而減少對檢測結(jié)果的不良影響[16]；④HIV 抗體檢測需嚴格遵守《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》流程[17]。

綜上所述，ELISA 法與膠體金法檢測HIV 抗體均具有一定的臨床價值，相比之下ELISA 法敏感度、特異度更高，可作為臨床首選方式。但ELISA 法檢測過程中應(yīng)注意檢測的規(guī)范性，對標本、試劑、溫度、操作流程等各方面進行干預(yù)，從而避免假陰性、假陽性的出現(xiàn)，進一步提高臨床檢測的準確性。