上消化道疾病患兒胃組織Hp感染與Sox2、CyclinD1表達的相關性分析

馬建平 李文 柳玉強

(寶雞市中醫醫院消化內科，陜西 寶雞 721000)

幽門螺旋桿菌(Hp)感染是慢性胃炎、胃潰瘍、胃癌等疾病的主要危險因素[1]。干細胞轉錄調控因子Sox2在維持與調節腫瘤干細胞的增殖能力、自我更新等方面發揮重要作用，可能參與胃癌的發生[2]。細胞周期蛋白D1(CyclinD1)是一種細胞周期正向轉換因子，在細胞G1期增殖過程中發揮調節作用，其過度表達可促進細胞異常增殖，導致腫瘤發生[3]。但目前Hp感染，Sox2、CyclinD1蛋白表達在上消化道疾病發生、發展中的作用及相關性尚不明確。本文主要探討上消化道疾病患兒胃組織中Hp感染與Sox2及CyclinD1表達的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年2月我院收治的上消化道疾病患兒151例，采用胃鏡及病理學方法進行診斷，并將其分為慢性淺表性胃炎組(A組，n=35)、慢性萎縮性胃炎組(B組，n=33)、十二指腸球部潰瘍組(C組，n=29)、胃潰瘍組(D組，n=30)及胃癌組(E組，n=24)。所有患兒經胃鏡檢查確診，初次發病，病例資料完整，患兒監護人對本研究內容均知情同意，且既往未接受過Hp清除治療或手術治療；排除深度昏迷或意識不清楚不能配合研究的患兒；合并重要臟器疾病者；入組前2周使用過抗菌藥物等。其中男89例，女62例；年齡2～12歲，平均(6.48±2.56)歲；病程4～18個月，平均(5.42±1.21)個月。五組患兒一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2主要試劑及儀器 Sox2、CyclinD1多克隆抗體(英國Abcam公司)、免疫組化試劑盒(上海瓦蘭生物科技有限公司)、CUT4062型石蠟切片機(德國SLEE公司)、YD-A型生物組織攤片機(德國Lecia公司)等。

1.3方法13C呼氣試驗：患者空腹狀態下口服13C-尿素，到100 mL后測氣，連接檢測儀后進行檢測，DOB值>2.5時為陽性。改良Giemsa染色：在胃鏡直視下取胃竇大彎側近幽門2～3 cm處黏膜2塊，胃體小彎側近胃角2～3 cm處黏膜2塊，4%多聚甲醛固定組織標本，進行Giemsa染色。Giemsa染色和13C呼氣試驗同為陽性者則判定為Hp感染陽性。通過免疫組化法檢測胃組織中Sox2及CyclinD1蛋白的表達情況。取各組石蠟組織切片進行免疫組化染色檢測。60℃條件下烤片約80 min，常規脫蠟、水化，高溫高壓條件下進行抗原修復，選擇3%過氧化氫封閉，阻斷內源性過氧化物酶。分別滴加20 μL兔抗人Sox2、CyclinD1多克隆抗體(濃度1∶200，4℃孵育、過夜)，滴加生物素化的IgG50 μL，37℃孵育、30 min，滴加抗生物素-過氧化物酶溶液50 μL，37℃孵育、30 min。DAB染色，同時在顯微鏡下觀察、控制顯色反應時間；蘇木素復染2 min，分化、脫水，最后中性樹膠封片。光學顯微鏡下使用Image-pro plus軟件分析各組織標本中Sox2、CyclinD1蛋白表達情況。Sox2、CyclinD1蛋白陽性著色均以細胞核中出現棕黃色或棕褐色為準，參照相關文獻[4]，以半定量積分法判定染色結果。比較胃組織Hp感染與Sox2及CyclinD1蛋白表達之間的關系。

1.4觀察指標 對不同類型上消化道疾病Hp陽性率、Sox2蛋白陽性率、CyclinD蛋白陽性率進行比較；分析Hp與Sox2、CyclinD蛋白表達的相關性。

1.5統計學方法 采用SPSS21.0軟件對數據進行分析，計數資料以n，%表示，行χ2檢驗，相關性分析采用Spearman相關檢驗P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1胃組織Hp陽性率及Sox2蛋白陽性率的比較 E組患兒胃組織Hp陽性率及Sox2蛋白陽性率均顯著高于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍及胃潰瘍組(χ2=7.008、19.654，P均<0.05)，其余組間比較無差異(P>0.05)。見表1。

表1 Hp陽性率及Sox2蛋白陽性率的比較[n(%)]

2.2CyclinD1蛋白陽性率的比較 E組患兒胃體CyclinD1蛋白陽性率顯著高于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍及胃潰瘍組(χ2=14.010，P<0.05)，其余組間比較無差異(P>0.05)；同時，胃癌組胃竇CyclinD1蛋白陽性率顯著高于慢性淺表性胃炎組(χ2=12.740，P<0.05)，其余組間均無統計學差異(P>0.05)。見表2。

表2 CyclinD1蛋白陽性率比較[n(%)]

2.3相關性分析 結果顯示，Hp與Sox2蛋白表達呈明顯負相關(r=-0.413，P<0.01)、與CyclinD1蛋白表達呈正相關(r=0.251，P<0.01)。

3 討 論

Hp感染多在兒童時期獲得，具有遷延不愈的特點。本文結果顯示，上消化道疾病患兒具有較高的Hp感染率(60.26%)，提示上消化道疾病的發生、發展可能與Hp感染有關。研究[5-6]發現，Hp感染可使細胞增殖與凋亡紊亂，胃癌相關基因突變、引起端粒酶活性增加，促進胃癌的發生，但清除Hp可控制萎縮性胃炎患兒的胃黏膜發生進一步萎縮。本文結果顯示，不同類型上消化道疾病患兒Hp陽性率不同，胃癌組Hp陽性率顯著高于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍和胃潰瘍組，提示Hp感染參與上消化道疾病的發展。

Sox2是具有代表性的干細胞轉錄因子，且已被證實其突變和異常表達與多種惡性腫瘤有關[7]。研究[8]發現，Hp通過抑制Sox2蛋白的表達，導致胃黏膜萎縮和腸化生，進而增加胃癌發生風險。還有研究[9]發現，Hp感染可促進大量細胞因子產生，誘導Sox2甲基化，使Sox2蛋白表達減少，進而出現胃組織不典型增生。本研究結果顯示，胃癌組Sox2蛋白陽性率顯著低于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍和胃潰瘍組，說明Hp感染與Sox2蛋白表達呈負相關，提示Hp感染可能通過下調Sox2蛋白的表達參與上消化道疾病的病變。

CyclinD1是一種細胞周期正向轉換因子，正常組織中表達很低，過度表達后可促進細胞周期G1-S期轉換，加速細胞周期，使細胞異常增殖，導致腫瘤發生。研究[10]發現Hp自身及其代謝產物有潛在的致癌活性，可導致CyclinD1基因突變、擴增，增加胃癌發生風險。本文結果顯示，胃癌組CyclinD1蛋白陽性率顯著高于慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、十二指腸球部潰瘍和胃潰瘍組，說明Hp感染與CyclinD1蛋白表達呈正相關，提示Hp感染可能通過上調CyclinD1蛋白的表達參與上消化道疾病的發生。