ESAT-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ在結核性腦膜炎輔助診斷中的意義

周靜，肖立新

（1.江西省贛州市第五人民醫院結核科，江西贛州 341000；2.興國縣結核病防治所結核科，江西贛州 342400）

結核病具有傳染性的特點，主要是因人體免疫功能減弱而感染結核分枝桿菌所致，一旦侵入人體腦膜組織，則會誘發結核性腦膜炎，嚴重影響人們的身體健康[1]。腦脊液留取具有一定的難度且細胞偏少，不利于臨床早期診斷結核性腦膜炎。因此，探尋一種快捷、方便、準確輔助診斷結核性腦膜炎的方式，為臨床及時有效治療結核性腦膜炎患者具有重要意義[2]。結核性腦膜炎與免疫應答相關，機體易在結核分枝桿菌刺激情況下釋放ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ等免疫應答因子[3]。基于此，本研究探究結核性腦膜炎患者腦脊液細胞因子檢測情況，旨在為臨床輔助診斷結核性腦膜炎提供參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2018年12月至2020年6月本院接收的114疑似顱神經疾病患者作為研究對象，根據臨床診斷結果分為研究組（結核性腦膜炎患者，n=57）和常規組（非結核性腦膜炎患者，n=57）。研究組男30例，女27例；年齡21～69歲，平均（39.6±10.8）歲。常規組男31例，女26例；年齡21～70歲，平均（39.9±11.3）歲。兩組患者臨床資料比較差異無統計學意義，具有可比性。所有患者均對本研究知情同意，并自愿簽署知情同意書。本研究已通過醫院倫理委員會審核批準。

1.2 方法將保存于-80℃環境下的腦脊液標本取出，復溫，采用ELISA酶聯免疫吸附試驗檢測腦脊液細胞因子水平，包括ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ。取100μL待測樣本加入試劑盒的微孔中，在水浴箱中進行孵育，溫度為36℃，時間為90 min，棄上清后清洗5次。再選取100μL生物素化抗體工作液（已經提前稀釋配置好），在水浴箱中進行孵育，溫度為36℃，時間為60 min，清潔板5次；加入100μL酶濃縮工作液，在36℃環境下進行30 min孵育，清潔板5次后再添加TMB顯色進行15 min孵育，最后給予終止液，在波長450 nm下，通過酶標儀測定A值（吸光度），以S（樣本A值）/N（陰性對照A值），其中＞2.0為陽性，同時，詳細記錄各項檢測指標水平。

1.3 觀察指標比較兩組腦脊液細胞因子（ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ）水平。

1.4 統計學方法采用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析，計量資料以“±s”表示，比較采用t檢驗，計數資料組間率（%）比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Pearson相關性分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組腦脊液細胞因子水平比較研究組ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平均明顯高于常規組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組腦脊液細胞因子水平比較（±s，pg/mL）Table 1 Comparison of cerebrospinal fluid cytokine levels between the two groups(±s,pg/mL)

表1 兩組腦脊液細胞因子水平比較（±s，pg/mL）Table 1 Comparison of cerebrospinal fluid cytokine levels between the two groups(±s,pg/mL)

注：ESAT-6，早期分泌靶抗原6；IL-10，白細胞介素-10；TNF-α，腫瘤壞死因子-α；IFN-γ，干擾素-γ

組別研究組常規組t值P值病例57 57 ESAT-6 266.6±34.5 7.7±1.5 22.450＜0.05 IL-10 17.7±8.6 14.6±7.9 16.785＜0.05 TNF-α 90.3±44.6 11.3±5.1 20.638＜0.05 IFN-γ 100.3±49.6 33.2±16.6 23.977＜0.05

2.2 觀察組患者腦脊液細胞因子相關性分析相關性分析顯示，IFN-γ與ESAT-6呈正相關（r=0.96，P＜0.05）。IL-10與ESAT-6、TNF-α、IFN-γ無明顯相關性；TNF-α與ESAT-6、IFN-γ無明顯相關性；ESAT-6與TNF-α明顯無明顯相關性。

2.3 單一指標檢測與聯合檢測診斷效能比較4項指標聯合檢測敏感度、陰性預測值、陽性預測值均高于單一指標檢測（P＜0.05）；單一指標檢測與聯合檢測特異度比較差異無統計學意義，見表2。

表2 單一指標檢測與聯合檢測診斷效能比較（%）Table 2 Comparison of diagnostic efficiency between single index detection and combined detection(%)

3 討論

結核性腦膜炎發生后，會激活CD4+、巨噬細胞、星形細胞而分泌出大量的細胞因子，如干擾素、白介素等[4]。早期感染結核分枝桿菌后，會刺激人體產生高度特異性的ESAT-6，而ESAT-6僅分布于致病性結核桿菌中，因此，避免了卡介苗、非致病性結核桿菌檢測結果的影響。有研究發現，結核分枝桿菌在羅氏培養基上分泌的ESAT-6水平偏低，但結核分枝桿菌被巨噬細胞吞噬后，ESAT-6水平呈升高趨勢。說明腦脊液細胞因子ESAT-6過高時，細胞已被結核分枝桿菌入侵且已形成致病性較高的狀態[5]。在結核性腦膜炎患者群體中，腦脊液中存在較少的結核分枝桿菌，鑒于ESAT-6指標特殊性，有望成為臨床輔助診斷結核性腦膜炎患者最重要、最主要的檢測指標。本研究結果表明，研究組ESAT-6為（266.6±34.5）pg/mL，明顯高于常規組的（7.7±1.5）pg/mL（P＜0.05）。表明臨床輔助診斷結核性腦膜炎過程中ESAT-6具有較高的應用價值。

IL-10因子能在抗結核過程中抑制巨噬細胞的表達，并抑制刺激因子，一定程度上降低細胞免疫功能，進而延緩結核性腦膜炎病理變化。趙玉等[6]研究表明，結核性腦膜炎患者ESAT-6、IL-10水平明顯高于健康體檢者。本研究結果表明，研究組腦脊液細胞因子IL-10水平顯著高于常規組（P＜0.05）。提示IL-10因子在結核性腦膜炎患者機體中呈高表達狀態。人體感染結核分枝桿菌后，會對巨噬細胞產生刺激，進而釋放TNF-α因子，增強巨噬細胞殺傷結核分枝桿菌的能力[7]。在免疫應答反應過程中，IFN-γ具有雙重作用，不僅可促使免疫應答，且還能充分發揮調節免疫作用。IFN-γ在結核性腦膜炎患者呈高表達，提示腦膜巨噬細胞對結核分枝桿菌清除能力增強[8]。本研究結果表明，研究組TNF-α、IFN-γ明顯高于常規組（P＜0.05）。表明結核性腦膜炎患者具有較高的TNF-α、IFN-γ水平，臨床可考慮將其作為早期診斷結核性腦膜炎患者感染的主要指標。相關性分析表明，僅有IFN-γ與ESAT-6呈正相關（P＜0.05），其他指標無明顯相關性，分析原因為，作為T淋巴細胞的ESAT-6靶抗原，可在一定程度上誘導巨噬細胞并刺激生成干擾素γ[9]。此外，本研究中4種檢測指標聯合檢測敏感度、陰性陽性預測值、陽性預測值均高于單一指標檢測（P＜0.05）。說明聯合檢測對于臨床早期輔助確診結核性腦膜炎的應用價值更高。

結核性腦膜炎患者腦脊液細胞因子表達水平較高，ESAT-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ聯合檢測具有敏感度較高，有助于臨床輔助診斷，值得臨床推廣運用。