海南省漢族人群2型糖尿病與甲狀腺腺瘤相關基因THADA單核苷酸多態性的關聯

孫軍萍 黎宗保 韓耀光

(海南省三亞中心醫院 海南省第三人民醫院內分泌科，海南 三亞 572000)

我國2型糖尿病(T2DM)發病人數呈逐年上升的趨勢〔1〕。目前發現與T2DM發病相關的多個基因位點〔2〕，越來越多的易感基因也逐漸被人們挖掘。在目前被發現的18個與T2DM相關的基因(區)中，甲狀腺腺瘤相關基因(THADA)最早是被全基因組關聯研究(GWAS)發現的與歐洲人T2DM相關的易感基因之一，長度約365 kb，具有38個外顯子，位于人類染色體2p21〔3〕。海南為移民島，生活習慣和工作均有其特殊性，與福建省等緯度接近的省份比，其T2DM發病率較高，海南四季天氣嚴酷，長期室外勞作，體力消耗大和部分居民缺乏鍛煉，T2DM早期診斷和控制效果均較差〔4〕。本研究利用HapMap數據庫，并另外選擇5個位點研究THADA單核苷酸多態性(SNP)與海南省漢族人群T2DM的關聯。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年6月至2017年6月海南省三亞中心醫院T2DM患者124例和糖耐量正常者(NGT組)120例。納入標準〔5〕：①所有患者符合WTO1990中關于T2DM的診斷；②個體間無血緣關系。排除標準：①具有潛在特殊類型糖尿病者如1型糖尿病(T1DM)及成年型糖尿病(MODY)；②合并甲狀腺疾病、腫瘤疾病、風濕、類風濕疾病及糖皮質激素治療者。NGT者入選標準：①口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)、空腹血糖(FPG)和餐后2 h血糖(2 hPG)正常；②無T2DM家族史。兩組男女比例及男性腰圍無差異(P>0.05)，與NGT組比較，T2DM組年齡較高、男性和女性的糖化血紅蛋白(HbA1c)、空腹胰島素(Fins)、FPG、2 hPG和腰臀比(WHR)較高，體重指數(BMI)較低(P<0.05，P<0.001)，見表1。

表1 兩組臨床特征比較

1.2方法 詢問受試者病史及家族史，空腹10 h后測量體重、身高、腰圍、計算BMI及測量右上臂血壓。均行75 g OGTT，取OGTT 2 h胰島素及血糖、Fins及FPG。胰島素抵抗評價采用胰島素抵抗指數(HOMA-IR，FPG×Fins/22.5)，胰島細胞功能評價采用胰島β細胞功能指數(HOMA-β，20×Fins/22.5)。采用葡萄糖氧化法測定血糖，化學發光免疫法測定胰島素。基因分型：采用鹽析法提取外周血白細胞DNA。在HapMap數據庫基礎上，增加THADA區域前后5 kb和10 kb的序列信息，條件：r2>0.8、MAF>0.1并選擇tag單核苷酸多態性(SNP)。單堿基延伸的引物和聚合酶鏈式反應(PCR)多重反應采用Iplex Gold技術設計，基因分型采用質譜技術，各位點重復分型對10%的樣本量進行檢測，計算各位點基因分型結果符合率使分型質量得已驗證。

1.3統計學方法 采用Plin1.06軟件、SAS軟件、Qvanto軟件進行χ2檢驗、線性回歸分析、效力檢驗。

2 結 果

2.1海南省漢族人群T2DM與THADA基因SNP的關聯 120例NGT人群和124例T2DM患者成功分型了THADA基因區域的5個位點：rs13026309、rs6739828、rs4952986、rs13022691和rs13029250。分型成功率>94%，重復10%樣本量的分型結果一致率>96%。NGT組中THADA基因區域的5個位點均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。HapMap中國漢族人群數據庫的數據與次要等位基因頻率數據相同。相加遺傳模式中未發現T2DM與THADA基因區域的5個位點相關。經年齡、性別及BMI調整得P值。顯性和隱性遺傳模式中也未發現T2DM與5個位點相關。見表2。

表2 海南省漢族人群T2DM與THADA基因SNP的關聯

2.2不同性別THADA基因rs4952986、rs6739828、rs13022691、rs13029250、rs13026309位點與T2DM的相關性 經調整BMI和年齡后多重檢驗發現女性組在相加遺傳模式下的rs4952986位點與HOMA-β(P=0.008 9)、HOMA-IR(P=0.012 2)及Fins(P=0.009 5)相關。3種基因分型中的水平為CC

表3 不同性別THADA基因rs4952986位點與T2DM的相關性

表4 不同性別THADA基因rs6739828位點與T2DM的相關性

表5 不同性別THADA基因rs13022691位點與T2DM的相關性

續表5 不同性別THADA基因rs13022691位點與T2DM的相關性

表6 不同性別THADA基因rs13029250位點與T2DM的相關性

表7 不同性別THADA基因rs13026309位點與T2DM的相關性

3 討 論

THADA是甲狀腺腺瘤靶向基因，是最早發現與甲狀腺腺瘤相關的基因之一。此后有學者指出在T2DM患者中THADA有異常表達〔6〕。研究顯示〔7〕，德國萊比錫人群中T2DM被發現與THADA基因存在相關聯的傾向，此外該基因還與0.5 Fins及FPG具有密切聯系。在此基礎上有國外研究報道〔8～10〕T2DM在丹麥錫克族、印度、芬蘭、意大利人群中未見與THADA基因相關傾向。

本研究選取的人群及THADA基因位點與其他研究小組具有一定差別，報道顯示〔11〕，THADA基因與T2DM表型相關的位點在歐洲人群HapMap數據庫中基因頻率為0.917∶0.083，但在中國漢族人群中該比例為1∶0。本研究結果顯示，與T2DM表型相關的rs4952986位點在歐洲人群HapMap數據庫中基因頻率為1∶0，但是在中國漢族中基因頻率為0.6∶0.4，因此在歐洲人群中該位點不存在多態性，研究顯示〔12，13〕該位點是亞洲人群獨特位點，因此研究該位點對了解中國T2DM患者中相關表型具有一定意義。本研究結果顯示，在NGT人群中HOMA-IR、HOMA-β及Fins水平與rs4952986位點T等位基因表達水平呈現明顯正相關。研究顯示〔14，15〕在機體附帶胰島素抵抗狀態下，NGT人群中攜帶該位點的患者，血液生化檢測可見胰島素水平增加，胰腺β細胞功能亢進，進而能夠維持機體血糖水平處于正常水平。本研究在男性患者中未見HOMA-IR、HOMA-β及Fins水平與rs4952986位點T等位基因表達水平相關，但是在所有女性患者中存在明顯上述關聯。主要原因：①入組男性患者中按照國際糖尿病協會對中國向心性肥胖患者制定標準，在本研究中的男性患者腰圍低于國際糖尿病協會制定的肥胖切點，而女性患者腰圍滿足上述標準；②本研究中入組男性患者樣本量較少，而女性樣本量較大，因此在男性患者中易出現假陰性，進而導致結果誤差。此外本研究發現女性與男性胰島素抵抗能力方面背景具有差異，本研究認為與HOMA-IR、HOMA-β及Fins水平與rs4952986位點未在本研究男性患者中觀察到有關。rs4952986不編碼蛋白，其位于THADA基因內含子區，研究顯示，rs4952986位點上攜帶T等位基因數量與Fins水平及胰島素抵抗能力、胰島細胞分泌功能亢進呈正相關，本研究認為與rs4952986位點參與THADA基因表達調控相關。