老年非小細胞肺癌組織Cx37、GPR120蛋白表達及其臨床意義

夏申宏 李子廣 邵璐 生海燕

(蚌埠醫學院第二附屬醫院呼吸內科，安徽 蚌埠 233000)

由于環境污染等因素，肺癌在世界范圍內的發病率均較高，嚴重威脅公眾的生命安全〔1〕。非小細胞肺癌(NSCLC)是最常見的肺癌類型之一，約占肺癌患者的80%〔2〕。臨床顯示，多數NSCLC患者前往醫院就診時，疾病已進展為中晚期階段，據統計，該病的5年生存率極低，僅有20%左右，死亡患者中以老年人口為主〔3，4〕。目前，盡管臨床可通過手術、放化療等手段來對老年NSCLC患者進行治療，以期達到清除病灶、延緩患者生命周期的目的，但部分患者接受手術、放化療等治療后仍可能會出現復發、轉移，預后效果并不理想〔5，6〕。隨著分子遺傳學、分子生物學的深入研究，國內外學者對肺癌的病因及發生機制也逐步有了更深入的認識，許多致癌因素均可通過失活抑癌基因或激活原癌基因而使細胞發生轉化和癌變。現今，積極尋找有效的分子標記物對早期診斷、靶向治療及判斷預后具有十分積極的意義。文獻報道〔7～9〕，縫隙連接蛋白(Cx)37是縫隙連接蛋白中的一種，具有調節細胞增殖、遷移、凋亡的能力；G蛋白耦聯受體(GPR)120則是機體中十分重要的一種G蛋白耦聯受體(GPCRs)，近年來被發現可在乳腺癌等惡性腫瘤組織中異常表達，二者與腫瘤的發生發展、侵襲轉移可能有密切關系。然而，對于Cx37、GPR120蛋白在NSCLC中的表達及在NSCLC進展中作用的研究較少見。本研究觀察Cx37、GPR120蛋白在老年NSCLC患者癌及癌旁組織中表達，并分析其與老年NSCLC患者各臨床病理因素及生存預后間的關系，為老年NSCLC患者的個體化靶向治療提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1一般資料 蚌埠醫學院第二附屬醫院2017年1月至2018年9月確診為NSCLC老年患者的癌組織、同例患者的癌旁5 cm新鮮組織對應蠟塊86例。納入標準：①均經病理證實為NSCLC，年齡不低于60歲；②術后石蠟標準保存完好；③術前未行放、化療等抗腫瘤治療；④臨床資料、隨訪資料完整。排除標準：①伴其他惡性腫瘤；②伴心、肝、腎等重要臟器嚴重損害者；③伴自身免疫性疾病者；④伴精神疾病者。其中，男55例，女31例；年齡60～79歲，中位年齡66歲；病理類型：腺癌51例，鱗癌25例，其他10例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期51例，Ⅲ期35例。本研究經醫院道德倫理委員會批準。

1.2檢測試劑 鼠抗人Cx37單克隆抗體(MAB466Hu21)購自武漢云克隆科技股份有限公司，Anti-GPCR GPR120兔抗人多克隆抗體(ab230869)購自美國Abcam生物公司，DAB、SP檢測試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3檢測方法 采用切片機將石蠟標本4 μm厚切片，經脫蠟、脫苯、水化后采用免疫組化SP法檢測Cx37、GPR120蛋白表達，一抗Cx37、GPR120的稀釋比均為1∶100。Cx37蛋白主要定位于細胞質中，呈棕黃色；GPR120蛋白則主要定位于細胞膜、細胞質中，呈棕黃色或黃色。免疫組化結果判定〔10〕：①陽性細胞染色強度評分：未著色計0分，淡黃色計1分，黃色計2分，棕黃色計3分；②陽性細胞占比：隨機選擇5個400倍視野，陽性細胞占比在0～10%計0分，11%～30%計1分，31%～60%計2分，61%～100%計3分。兩項評分結果相乘>3分認定為陽性表達。操作均由同一位病理科醫師完成。

1.4隨訪 以查閱患者復查資料、電話、郵件、上門等形式進行隨訪，隨訪期為2年，每3個月隨訪1次，記錄患者生存情況。

1.5統計學方法 采用SPSS22.0軟件，計數資料采用χ2檢驗；生存過程描述采用Kaplan-Meimer生存曲線法，采用Log-rank法對比生存率。

2 結 果

2.1Cx37、GPR120蛋白表達 Cx37在老年NSCLC患者癌組織中的陽性表達率(31.40%)明顯低于癌旁組織(68.60%，χ2=23.814，P<0.001)；GPR120蛋白在老年NSCLC患者癌組織中陽性表達率(59.30%)明顯高于癌旁組織(22.09%，χ2=24.668,P<0.001)。

2.2Cx37、GPR蛋白表達與NSCLC臨床特征的關系 在不同性別、年齡、吸煙、病理類型及腫瘤直徑的NSCLC患者中，Cx37、GPR蛋白在NSCLC癌組織中表達差異均無統計學意義(P>0.05)。當患者TNM分期較高、有淋巴結轉移、腫瘤分化程度較低時，Cx37蛋白陽性表達率明顯降低(P<0.05)。當患者TNM分期較高、有淋巴結轉移時，GPR120蛋白陽性表達率明顯增高(P<0.05)。見表1。

2.3Cx37、GPR120蛋白表達與老年NSCLC患者預后的關系 27例死亡，2年存活率為68.60%。采用Log-rank檢驗顯示，Cx37蛋白表達陽性患者組存活率顯著高于陰性患者組(85.19% vs 61.02%;χ2=5.019,P=0.025)，GPR120蛋白表達陽性患者組存活率均顯著低于陰性患者組(58.86% vs 85.71%;χ2=8.463,P=0.003)。見圖1。

表1 Cx37、GPR蛋白陽性表達與NSCLC臨床特征的關系(n)

圖1 Cx37、GPR120蛋白表達與NSCLC患者預后的關系

3 討 論

縫隙連接是除了骨骼肌細胞和血細胞間之外，廣泛存在于其他組織細胞間的一種細胞連接形式。對于腫瘤的生長而言，維持腫瘤微環境情況良好至關重要，而腫瘤細胞間正是通過細胞間縫隙連接來實現各腫瘤細胞間的直接信息傳遞。縫隙連接是由膜上的連接子結構單元所構成的，這種特殊的通道蛋白被稱為連接蛋白，其不僅可以參與細胞間物質交換的過程中，起到維持細胞間的信息傳遞，調控細胞分化、增殖，保障組織內環境穩態性的作用，還可參與腫瘤細胞間上皮間質轉化〔11，12〕。有文獻報道〔13〕，腫瘤細胞中Cx會缺失或降低，但在其周旁正常細胞的Cx則功能正常，改善Cx功能或是上調Cx表達對于抑制腫瘤的發生發展具有積極意義。研究顯示〔14〕，在肺組織中主要存在由Cx32、Cx37、Cx43等組成的縫隙連接。目前有關Cx43與腫瘤間關系的研究較多，周愛軍等〔15〕指出，甲狀腺癌組織中Cx43蛋白陽性表達率明顯低于正常組和良性組，且與患者的包膜侵犯、淋巴結轉移、TNM分期、腫瘤大小有關；李國等〔16〕研究顯示，在肺腺癌組織中無論Cx43蛋白或mRNA，其陽性表達率均明顯低于正常肺組織中，且Cx43蛋白表達以胞質為主，推測Cx43蛋白及mRNA陽性表達率降低是肺腺癌發生的原因之一。本研究結果提示Cx37在NSCLC發生、發展中可能起到抑癌作用。目前對于Cx37蛋白如何調控癌細胞侵襲和轉移的潛在機制尚未明確，推測其可能是通過介導細胞縫隙連接通訊對腫瘤細胞產生抑制作用，同時降低腫瘤細胞遷徙及侵襲力〔17〕。

近些年，GPR120作為GPRS家族的重要成員之一正逐漸受到研究人員的重視，其被認為不僅可參與調節激素分泌、脂質生成等一系列脂質代謝平衡過程，還與細胞增殖、遷移等能力關系密切，在腫瘤的發生、轉移中起至關重要的作用〔18～20〕。研究顯示〔21，22〕，GPR120在胰腺癌、結直腸癌等消化系統腫瘤中的表達水平明顯提升，且能上調腫瘤細胞的增殖及遷移能力，可能是一種促腫瘤受體，對于促進腫瘤的惡性發展具有重要意義。孟府陶等〔23〕研究結果表明，GPR120在膽管癌組織中的表達水平較癌旁正常膽管黏膜上皮組織中差異明顯，且其水平與膽管癌患者的TNM分期、腫瘤組織分化程度、神經侵犯、淋巴轉移等多種臨床病理因素具有一定聯系，推測GPR120蛋白在膽管癌的發生、發展及生物學行為中均起到一定的正性上調作用。目前對于GPR120在NSCLC中的具體作用及參與機制尚不清楚，但在多項基礎研究中顯示〔24，25〕，GPR120信號可通過誘導分泌白細胞介素-8、血管內皮生長因子(VEGF)及前列腺素E2等促血管生成因子來發揮促進瘤內血管形成的作用，且此環節主要通過GPR120活化的PI3K/Akt-NF-κB信號通路的開放來實現，推測在NSCLC中GPR20蛋白高表達可促使VEGF表達上調，使NSCLC 腫瘤細胞的生長、遷移及侵襲能力有所增強，癌血管生成加速，最終導致腫瘤組織向更深、更遠處浸潤轉移。

本研究結果表明Cx37、GPR120蛋白表達水平與老年NSCLC患者生存期密切相關，均可能有預測NSCLC預后的潛力。

綜上，Cx37蛋白在老年NSCLC患者癌組織中低表達，而GPR120蛋白則在癌組織中高表達，且二者表達水平均與淋巴結轉移情況、臨床TNM分期及2年存活率密切相關，二者的表達可能與NSCLC的發生及其惡性轉化和侵襲轉移之間存在重要的因果聯系，Cx37可能起到抑癌作用，而GPR120可能起到促癌作用，二者均有希望成為老年NSCLC患者臨床藥物研發治療的新靶點及預后判斷的一項分子標志物。