血清炎癥因子在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎進(jìn)展中的價(jià)值

任云麗 張小麗

(南通市第一人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，江蘇 南通 226001)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種異質(zhì)性和全身性的自身免疫性疾病，主要病理特征為滑膜細(xì)胞炎癥，由大量的炎癥細(xì)胞如淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜增生增厚，新生血管形成，滑膜液分泌過多造成〔1～3〕。與早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者相比，晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者會(huì)從一些緩慢進(jìn)行性的消長(zhǎng)癥狀到伴有結(jié)節(jié)階段，再到甚至全身炎癥的嚴(yán)重破壞性的階段，導(dǎo)致晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的預(yù)期壽命顯著降低。而且，由于晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的免疫系統(tǒng)長(zhǎng)期處于獲得性缺陷，非特異性抵抗力顯著下降，導(dǎo)致晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者感染、患心血管疾病和腎臟疾病的概率也顯著增高，也成為提升晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者死亡率的主要原因之一〔4，5〕。女性發(fā)病率高達(dá)男性的2～3倍，且女性在絕經(jīng)前后類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情活動(dòng)度也存在明顯變化〔6〕。此外，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎還是一種具有大量遺傳成分的多基因疾病，遺傳力大約為60%。白細(xì)胞介素(IL)-2、腫瘤壞死因子(TNF)-α等是參與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中的重要的血清炎癥因子。IL-2是一種活化并維持T細(xì)胞分化和增殖的炎癥因子，IL-2在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中起到調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的作用，當(dāng)血清中IL-2的分泌量增多時(shí)，發(fā)生一系列與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有關(guān)的炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步造成免疫調(diào)節(jié)功能發(fā)生紊亂〔7〕。TNF-α的主要功能是作用于巨噬細(xì)胞，其吞噬作用會(huì)得到增強(qiáng)，還可進(jìn)一步促進(jìn)產(chǎn)生其他的炎癥細(xì)胞因子。TNF-α還可誘導(dǎo)成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)的增殖，導(dǎo)致血管翳的形成．同時(shí)還可以上調(diào)膠原酶和基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)水平，導(dǎo)致軟骨損傷的發(fā)生〔8，9〕。本研究旨在對(duì)早期和晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中炎癥因子IL-2 、TNF-α的水平及與疾病進(jìn)展相關(guān)性進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1對(duì)象與分組 招募2019年1月至2020年1月在南通市第一人民醫(yī)院治療的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎早期患者與晚期患者，各40例，年齡60～75歲。根據(jù)2010年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟(ACR/EULAR)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)選取病例，并且滿足以下條件：患者28個(gè)關(guān)節(jié)的疾病活動(dòng)度評(píng)分(DAS28)>2.6分；排除有冠心病、高血壓、血栓病史及腫瘤、感染、近期手術(shù)外傷史。本研究中，根據(jù)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎X線分期，X線1期和2期判定為早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(早期組)，X線3期和4期判定為晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(晚期組)。早期組男22例，女18例，平均年齡(63.14±2.18)歲，晚期組男23例，女17例，平均年齡(63.25±2.26)歲，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2炎癥因子的檢測(cè) 空腹下采集患者靜脈血，4℃至自然凝固，3 000 r/min 離心5 min，分離上層血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(購自中國(guó)上海酶聯(lián)生物科技有限公司的試劑盒)及 MultiskanTMFC酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司)檢測(cè)血清中IL-2、TNF-α水平，每個(gè)樣本做3個(gè)復(fù)孔，并計(jì)算平均值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS26.0 及 GraphPad Prism6.0 軟件，計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)后使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較兩組間差異，方差不齊時(shí)使用t′檢驗(yàn)比較兩組間差異，采用二分類Logistic回歸對(duì)候選診斷標(biāo)志物構(gòu)建回歸模型及綜合評(píng)分。

通過受試者工作特征(ROC)曲線進(jìn)行診斷效能的分析。使用STRING11.0進(jìn)行蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析。

2 結(jié) 果

2.1早、晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清炎癥因子分泌水平比較 與早期組相比，晚期組血清中炎癥因子IL-2〔(38.94±5.3)ng/L vs (60.19±8.54)ng/L〕與TNF-α水平〔(21.15±2.09)ng/L vs (29.55±3.14)ng/L〕均顯著增高(P<0.001)。

2.2早、晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清炎癥因子主成分分析 早期組和晚期組呈分散分布，無顯著交叉。IL-2和TNF-α血清水平可以區(qū)分早期和晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。見圖1。

圖1 基于血清IL-2和TNF-α水平早、晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎主成分分析

2.3IL-2和TNF-α診斷早、晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的效能評(píng)價(jià) 由圖2可知，IL-2和TNF-α診斷早、晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎R(shí)OC曲線下的面積分別為0.674和0.949(P<0.001)，診斷效能較好，可較好地作為早、晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者診斷依據(jù)。

圖2 IL-2和TNF-α診斷早期和晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎R(shí)OC曲線

2.4血清炎癥因子IL-2和TNF-α的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析 由圖3可知，IL-2和TNF-α主要與 Rbck1、環(huán)指蛋白(Rnf)31、Shaprin、Otulin、蛋白激酶(Ripk)1、核因子-κB基本調(diào)節(jié)劑(Ikbkg)、TAB2之間存在一定的互作用關(guān)系。

圖3 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)

3 討 論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者還會(huì)遭受進(jìn)行性殘疾和主要的系統(tǒng)性并發(fā)癥，甚至死亡的發(fā)展階段。常見表現(xiàn)包括滑膜組織炎癥和增生、自身抗體產(chǎn)生、軟骨和骨破壞，并伴有包括肺部和心血管并發(fā)癥在內(nèi)的系統(tǒng)性特征。目前臨床主要采用類風(fēng)濕因子(RF)、瓜氨酸相關(guān)自身抗體系統(tǒng)中的抗抗角質(zhì)蛋白抗體(AKA)抗體和抗抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體用于對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的診斷，但仍存在一定的限制，如不易檢出早、晚類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的差異等，易錯(cuò)過最佳診治時(shí)間。

IL-2對(duì)于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的功能、擴(kuò)展和存活至關(guān)重要，體內(nèi)Tregs和效應(yīng)T細(xì)胞(Teffs)之間的功能平衡對(duì)維持免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要，有報(bào)道顯示Tregs彌漫性存在于增生的滑膜襯里和上皮組織中，它們的數(shù)量隨著炎癥惡化而增加〔10～12〕。

TNF-α對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的刺激和關(guān)節(jié)損傷起控制作用，是重要的促炎因子〔13～15〕。TNF-α及其受體廣泛分布于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血清和滑膜液中，TNF-α可抑制炎癥信號(hào)通路中的重要蛋白，表現(xiàn)為促進(jìn)炎癥反應(yīng)，并且臨床也在應(yīng)用TNF-α抑制劑治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎〔16，17〕。本研究結(jié)果表明，IL-2和TNF-α可以區(qū)分早期和晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，表征疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)。

后續(xù)本文還對(duì)IL-2和TNF-α進(jìn)行了蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析，結(jié)果顯示，IL-2和TNF-α主要與TRAF、TAB、MAPK蛋白家族具有一定相關(guān)性，可通過不同途徑有效的影響類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生和發(fā)展。有研究表明TRAF可激活TNF受體、TRAF6還可調(diào)節(jié)IL-1、CD40和LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，引起炎癥因子的合成和釋放，從而可能導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)發(fā)生〔18〕。有研究發(fā)現(xiàn)TAB2-TAK1能夠相結(jié)合，能調(diào)控免疫系統(tǒng)重要NF-κB信號(hào)通路〔19，20〕。IL-2和TNF-α可能與MAPK信號(hào)通路的級(jí)聯(lián)的激活相關(guān)，激活后可介導(dǎo)了多種炎癥反應(yīng)的發(fā)展。

綜上，血清炎癥因子IL-2與TNF-α可有效作為診斷早、晚期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的指標(biāo)，具有較高的診斷效能，對(duì)評(píng)估類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的發(fā)展階段、治療及預(yù)后效果具有重要臨床意義。