益生菌發酵飼料對仔豬生長性能、血清免疫指標及腸道菌群的影響

吳 東，計 徐，周 芬，楊家軍，吳義景，夏倫志，朱洪龍，陳麗園，于 政，汪興生，謝繼奎

(1.安徽省農業科學院畜牧獸醫研究所，畜禽產品安全工程安徽省重點實驗室，安徽 合肥 230031；2.申亞生物科技股份有限公司，安徽 阜陽 236065)

益生菌發酵飼料是飼料原料接種益生菌菌種進行發酵后獲得包含飼料原料、菌體及其代謝產物的混合物。發酵飼料不僅提高了飼料的營養質量和利用率，還為動物提供了益生元、健康的微生物及代謝產物，發揮了促進生長的作用[1]。Yuan等(2017)[2]研究發現，發酵豆粕對哺乳仔豬的營養物質消化率和糞便微生物群有積極作用。Zhu等(2018)[3]發現斷奶仔豬飼喂發酵豆粕可改善腸道菌群，進而提升動物機體的整體免疫水平和健康狀態。藍海恩等(2020)[4]研究表明，復合益生菌發酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的生長性能、腸道微生物菌群、血清生化指標、血清免疫指標。益生菌發酵飼料具有豐富的脂肪酶、蛋白酶，同時能產生其特有的發酵酸香味以改善動物對飼料的適口性，增加采食量，并提高飼料的消化率和增加動物對飼料的消化能力，進而提高動物的生長性能[5-6]。本試驗研究益生菌發酵飼料對仔豬生長性能、血清免疫指標及腸道菌群的影響，為選擇適宜的飼用抗生素替代飼料提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

益生菌發酵飼料：安徽省重點研究和開發計劃項目“生豬無抗生素生態養殖技術集成與示范”項目組研制。

1.2 試驗動物與分組

試驗于2020年7—8月在安徽省阜陽市某豬場進行。選擇體重15 kg左右、日齡相近的健康杜長大三元雜種仔豬80頭(公母比1∶1)，隨機分為抗生素組和益生菌發酵飼料組，每組設4個重復，每個重復10頭，公母各半，單圈飼養。預試期6 d，正試期33 d。抗生素組在基礎飼糧中添加15%金霉素500 g/t、20%土霉素鈣預混1 000 g/t，益生菌發酵飼料組是90%基礎飼糧+10%益生菌發酵飼料。

1.3 試驗飼糧及飼養管理

試驗基礎飼糧組成及營養水平見表1。試驗期間所有豬自由采食和飲水，每天清掃圈舍，以保持圈內清潔，采取自由通風，所有圈舍定期消毒，免疫消毒程序按照豬場常規方法進行。

注：仔豬預混料可為每千克飼料提供維生素A 9 800 IU，維生素D3 2 500 IU，維生素E 35.0 IU，維生素K3 3.0 IU，煙酸60 mg，泛酸30.0 mg，吡哆醇 3.5 mg，核黃素4.5 mg，生物素0.08 mg，葉酸1.0 mg，硫胺素3.0 mg，鈷胺素0.05 mg，銅25 mg，鐵100 mg，錳40 mg，鋅80 mg，硒0.35 mg，碘0.6 mg。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生長性能指標測定 試驗開始和結束時，試驗豬禁食(自由飲水)12 h后稱重，以重復為單位記錄始重和末重，統計耗料量，并計算各組的日增重、日采食量和料重比。

1.4.2 血清生化指標和總抗氧化能力測定 試驗結束時，禁食12 h，每個重復隨機選取1頭豬進行頸下靜脈采血，每頭采血10 mL，3 000 r/min離心15 min，于-20 ℃保存，待測；測定血糖(GLU)、總蛋白(TP)、尿素氮(UREA)含量，谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)活性，血清中總抗氧化能力(T-AOC)。采用南京建成公司試劑盒在酶標儀上進行分析檢測。

1.4.3 血清免疫指標測定 試驗結束時，禁食12 h，每個重復隨機選取1頭豬進行頸下靜脈采血，每頭采血10 mL，3 000 r/min離心15 min，于-20 ℃保存，待測。測定血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量。采用南京建成公司試劑盒在紫外可見分光光度計上進行分析檢測。

1.4.4 腸道菌群的測定 盲腸糞便采集與處理：每個重復選取1頭豬，早晨飼喂1 h后，現場及時采集直腸糞便，直接在肛門采集(用已滅菌的棉簽伸入肛門取樣，無菌采集直腸末端新鮮糞球2～5 g滅菌離心管封裝，置于冰盒，直到完成整個采樣過程，整個過程保證在1 h以內完成。低溫條件下帶回實驗室檢測。無菌操作臺中取盲腸糞便0.5 g于10 mL的滅菌離心管中，加入無菌生理鹽水4.5 mL，用漩渦混合儀混勻后進行10-5～10-9倍比稀釋，每個稀釋度3個重復，乳酸菌和大腸桿菌分別在MRS瓊脂培養基和麥康凱瓊脂培養基上培養。細菌計數采用平板計數法進行統計，最終以每克腸道內容物中細菌個數的對數lg(CFU/g)表示。

1.5 數據分析處理

試驗數據均采用t檢驗統計分析。

2 結果與分析

2.1 益生菌發酵飼料對仔豬生長性能的影響

由表2可知，抗生素組和益生菌發酵飼料組仔豬始重差異不顯著(P>0.05)；與抗生素組相比，益生菌發酵飼料組末重提高8.98%(P<0.01)，平均日增重提高18.20%(P<0.01)，平均日采食量提高0.88%(P>0.05)，料重比下降14.89%(P<0.01)。

表2 益生菌發酵飼料對仔豬生長性能的影響

2.2 益生菌發酵飼料對仔豬血清生化指標和總抗氧化能力的影響

由表3可知，與抗生素組相比，益生菌發酵飼料組中總抗氧化能力提高141.44%(P<0.01)；血糖下降10.47%(P>0.05)，總蛋白提高6.38%(P>0.05)，尿素氮提高2.23%(P>0.05)，谷草轉氨酶下降27.08%(P>0.05)，谷丙轉氨酶下降37.34%(P<0.05)。

表3 益生菌發酵飼料對仔豬血清生化指標和總抗氧化能力的影響

2.3 益生菌發酵飼料對仔豬血清免疫指標的影響

由表4可知，與抗生素組相比，益生菌發酵飼料組中IgA提高118.28%(P<0.01)，IgG下降35.60%(P>0.05)，免疫球蛋白M(IgM)提高37.31%(P>0.05)。

表4 益生菌發酵飼料對仔豬血清免疫指標的影響

2.4 益生菌發酵飼料對仔豬腸道菌群的影響

由表5可知，與抗生素組相比，益生菌發酵飼料組中乳酸菌含量提高5.13%(P>0.05)，大腸桿菌含量下降15.48%(P<0.05)。

表5 益生菌發酵飼料對仔豬腸道菌群的影響

3 討論

3.1 益生菌發酵飼料對仔豬生長性能的影響

藍海恩等(2020)[4]研究表明，復合益生菌發酵飼料組與對照組相比較，日均采食量提高0.66%(P＜0.05)，日均增重提高1.19%(P＜0.05)，說明復合益生菌發酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的生長性能。李志云等(2014)[7]用發酵配合飼料飼喂仔豬，同比用常規飼料飼喂，仔豬平均日增重增加18.06%。李泳寧等(2015)[8]研究了微生物發酵飼料對斷奶仔豬生長性能的影響，發現分別添加0.5%、1.0%微生物發酵飼料的試驗組日增重分別比對照組顯著提高13.32%、15.69%；1.0%微生物發酵飼料的料重比最低，比對照組顯著降低了12.89%。胡新旭等(2013)[9]發現斷奶仔豬20%無抗發酵飼料組平均日增重提高了6.37%，料重比降低了5.54%。本試驗結果與上述報道基本一致，益生菌發酵飼料組平均日增重極顯著提高，料重比極顯著下降。

3.2 益生菌發酵飼料對仔豬血清生化指標和總抗氧化能力的影響

藍海恩等(2020)[4]研究表明，復合益生菌發酵飼料組與對照組相比較，血清中總蛋白含量和白蛋白含量分別提高7.44%(P＜0.05)和7.61%(P＜0.05)，血清中堿性磷酸酶含量降低5.75%(P＜0.05)。說明復合益生菌發酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的血清生化指標。本試驗中與抗生素組相比，益生菌發酵飼料組中總抗氧化能力提高141.44%(P<0.01)，谷丙轉氨酶下降37.34%(P<0.05)；血糖、總蛋白、尿素氮、谷草轉氨酶兩組差異都不顯著(P>0.05)；本試驗中益生菌發酵飼料組中總抗氧化能力和谷丙轉氨酶指標極顯著改善，益生菌發酵飼料導致仔豬總抗氧化能力提升少見相關報道，谷丙轉氨酶參與氨基酸的轉氨基作用，谷丙轉氨酶主要存在于肝細胞漿內，當肝細胞膜損傷時谷丙轉氨酶釋放到血液中(李忠榮等，2013)[10]；但總蛋白等指標差異都不顯著，與上述報道不太一致，這其中的機理還需進一步研究。

3.3 益生菌發酵飼料對仔豬血清免疫指標的影響

藍海恩等(2020)[4]研究表明，復合益生菌發酵飼料組與對照組相比較，血清中IgG、IgA、IgM含量分別提高18.90%(P＜0.05)、9.89%(P＜0.05)、1.19%(P＞0.05)，說明復合益生菌發酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的血清免疫指標。Jiang等[11]對早期斷奶仔豬膳食補充活酵母(LY)或超細粉體酵母(SFY)，可提高飼料轉化率，增加仔豬十二指腸和仔豬空腸絨毛高度，提高了斷奶豬的免疫力。本試驗中益生菌發酵飼料組中IgA極顯著提高，改善了仔豬血清免疫指標，與上述報道的結果一致。

3.4 益生菌發酵飼料對仔豬腸道菌群的影響

藍海恩等(2020)[4]研究表明，復合益生菌發酵飼料組與對照組相比較，盲腸、結腸、直腸中的大腸桿菌數分別降低2.39%(P＜0.05)、2.01%(P＜0.05)、1.64%(P＜0.05)，盲腸、結腸、直腸中的雙歧桿菌數分別提高1.20%(P＜0.05)、1.34%(P＜0.05)、1.20%(P＜0.05)，盲腸、結腸、直腸中的乳酸桿菌數分別提高2.14%(P＜0.05)、1.66%(P＜0.05)、2.05%(P＜0.05)，說明復合益生菌發酵飼料可顯著改善斷奶仔豬的腸道微生物菌群。Yuan等(2017)[2]研究發現，發酵豆粕對哺乳仔豬的糞便微生物群有積極作用。本試驗中益生菌發酵飼料組中大腸桿菌含量顯著下降，乳酸菌含量有一定程度的提高，這與上述報道的結果一致。

4 結論

綜上所述，在仔豬飼糧中添加益生菌發酵飼料替代抗生素，豬的生長性能、總抗氧化能力及免疫指標顯著提高，腸道菌群結構顯著改善。