LC-MS/MS法快速檢測(cè)白酒中10種甜味劑

勇艷華，劉 楊，邊海濤，李 莉

(大連市檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證技術(shù)服務(wù)中心 大連市食品檢驗(yàn)檢測(cè)院， 遼寧 大連 116630)

甜味劑賦予食品甜味，對(duì)于食品工業(yè)而言是一類重要的食品添加劑，尤其是安全性高、無(wú)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、無(wú)熱量或極低熱量的高倍甜味劑更是被廣泛使用。根據(jù)中國(guó)現(xiàn)行GB 2760-2014《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定，發(fā)酵酒中可以限量使用紐甜(葡萄酒除外)和三氯蔗糖，配制酒中甜蜜素、三氯蔗糖和糖精可以限量使用。合理合法正常使用甜味劑是安全的，但近年仍有超范圍、超限量使用甜味劑的不合格酒出現(xiàn)。甜蜜素、糖精、安賽蜜這三種非能量型甜味劑過(guò)量都會(huì)對(duì)人體器官造成損傷[1]。

目前，甜味劑的檢測(cè)方法有液相色譜法[2-3]，離子色譜法[4-5]，氣相色譜法[6-7]，氣相色譜—質(zhì)譜法[8-9]，液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法[10-14]，但是檢測(cè)酒中甜味劑常用液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法，檢測(cè)項(xiàng)目集中在安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、紐甜、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、甜菊糖苷，沒(méi)有同時(shí)檢測(cè)安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、紐甜、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、甜菊糖苷、甜菊雙糖苷、愛(ài)德萬(wàn)甜的報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(1290/Agilent 6490，美國(guó)Agilent公司)，渦旋混合器，Milli-QDirecet 8 全自動(dòng)超純水機(jī)(美國(guó)Millipore公司)，Poroshell 120 EC-C18 4.6 mm×100 mm，2.7μm，美國(guó)Agilent公司)。

實(shí)驗(yàn)所用試劑：乙腈(色譜純)、甲酸(色譜純)。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素(99.9%)、紐甜(98%)、三氯蔗糖(99.8%)、阿斯巴甜(99.0%)、阿力甜(98%)、甜菊糖苷(99.86%)、甜菊雙糖苷(98.55%)、愛(ài)德萬(wàn)甜標(biāo)準(zhǔn)品(純度均≥97%)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別稱取0.01g左右(精確至0.000 1g)標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶解并定容至100 ml，-18 ℃冷凍保存。準(zhǔn)確吸取上述各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1 ml于100 ml容量瓶中，用甲醇釋至刻度配制成濃度100 μg·ml-1的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 ℃冷藏保存。用20%甲醇溶液將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋至100 μg·L-1、80 μg·L-1、60 μg·L-1、40 μg·L-1、20 μg·L-1和10 μg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 樣品前處理

將白酒試樣混合均勻直接過(guò)0.2 μm微孔有機(jī)濾膜，待測(cè)定。如陽(yáng)性，則根據(jù)實(shí)際濃度用純水適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi)，過(guò)0.2 μm微孔有機(jī)濾膜，待測(cè)定。

1.2.3 添加回收實(shí)驗(yàn)

以空白酒基質(zhì)為代表，添加100 μg·ml-1的10種甜味劑混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，靜置1 h，按1.2.2節(jié)所述方法進(jìn)行前處理。

1.2.4 色譜條件

色譜柱：Poroshell 120EC-C18；柱溫：室溫；流動(dòng)相：A為甲醇，B為水(含0.1%甲酸)；梯度洗脫程序：0～0.5min，15%A；0.5～10 min，15%～95%A；10～11 min，95%A；11.5 min，15%A；11.5～13 min，15%A。流速：0.3 ml·min-1；進(jìn)樣體積：2μl。

1.2.5 質(zhì)譜參數(shù)

電噴霧離子源(ESI)；掃描方式：正負(fù)同時(shí)掃描；毛細(xì)管電壓：3500 kV；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；離子源溫度：200 ℃；去溶劑氣溫度：300 ℃；去溶劑氣：氮?dú)?0 L·h-1；錐孔氣：氮?dú)?0 L·h-1。其他參數(shù)詳見(jiàn)表1。

表1 10種甜味劑的質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)及液相保留時(shí)間

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的選擇

考察了是否蒸發(fā)酒精對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的影響，直接過(guò)濾上機(jī)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性沒(méi)有影響，蒸發(fā)去除酒精需要時(shí)間故選擇直接過(guò)濾上機(jī)進(jìn)行篩查，能夠快速地對(duì)樣品定性。如果篩查結(jié)果為陽(yáng)性，再跟據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行稀釋檢測(cè)。

2.2 液相條件的選擇

10種甜味劑的結(jié)構(gòu)決定了這類物質(zhì)可以在反相色譜上獲得分離，采用C18色譜柱，最終確定1.2.4節(jié)所述梯度洗脫下，在13 min內(nèi)可獲得10種甜味劑最佳峰形和良好分離，達(dá)到快速分析。10種甜味劑提取離子MRM譜圖如圖1。

圖1 10種甜味劑提取離子MRM譜圖

2.3 線性范圍及檢出限

10種甜味劑標(biāo)準(zhǔn)溶液線性范圍為10～100 μg·L-1，在該范圍內(nèi)其濃度與峰面積成線性相關(guān)。10種甜味劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。利用低濃度添加回收確定本方法檢出限10種甜味劑均為10 μg·kg-1。此方法的檢出限低于GB 5009.97-2016中甜蜜素的檢出限0.03 mg·kg-1，也低于SN/T 3538-2013中甜蜜素、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜、阿力甜和紐甜六種甜味劑的測(cè)定低限1.0 mg·kg-1。

表2 10種甜味劑線性方程和相關(guān)系數(shù)

2.4 回收率和精密度

用不含有10種甜味劑的空白白酒做基質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，分別添加10 μg·kg-1、30 μg·kg-1和90μg·kg-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法計(jì)算測(cè)定結(jié)果，回收率以測(cè)出量對(duì)理論添加量的百分比值計(jì)。每個(gè)水平進(jìn)行6次平行實(shí)驗(yàn)，以測(cè)出量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD表示方法精密度，結(jié)果見(jiàn)表3。3個(gè)水平的添加回收實(shí)驗(yàn)，均獲得好的回收率。

表3 10種甜味劑的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

2.5 實(shí)際樣品分析

利用本方法對(duì)疫情后復(fù)產(chǎn)的小作坊84份白酒進(jìn)行檢測(cè)，2份白酒中共檢出甜蜜素。

3 結(jié) 論

本文建立了同時(shí)白酒中10種甜味劑的超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜方法，能夠快速、高效、準(zhǔn)確地檢測(cè)白酒中含有的甜味劑，滿足日常檢測(cè)和市場(chǎng)監(jiān)測(cè)，為企業(yè)和監(jiān)管部門提供強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。