細(xì)針穿刺細(xì)胞塊石蠟包埋切片技術(shù)聯(lián)合CK19、CD56、Galectin-3、HBME-1檢測(cè)在甲狀腺結(jié)節(jié)診斷中的臨床意義*

周 寧，許婷婷，王帆榮，胡書婭，李 韜

四川綿陽(yáng)四○四醫(yī)院病理科，四川綿陽(yáng) 621000

甲狀腺結(jié)節(jié)十分常見，在一般人群中甲狀腺結(jié)節(jié)的檢出率為20%。臨床上甲狀腺癌的發(fā)病率較高，尤其是甲狀腺乳頭狀癌，約占全身惡性腫瘤的4%，早期準(zhǔn)確診斷對(duì)改善患者預(yù)后有十分重要的意義[1]。目前，在超聲引導(dǎo)下對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)行細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查是早期診斷甲狀腺疾病的重要方法。傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)檢查是將標(biāo)本直接涂片并染色觀察，由于涂片厚、重疊、結(jié)構(gòu)不清等因素導(dǎo)致細(xì)胞學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性率和靈敏度均不高，而細(xì)胞塊石蠟包埋切片技術(shù)能夠提高細(xì)胞學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性率及準(zhǔn)確率。本研究對(duì)細(xì)針穿刺細(xì)胞塊石蠟包埋切片技術(shù)聯(lián)合人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物-1(HBME-1)、細(xì)胞角蛋白19(CK19)、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、CD56檢測(cè)在甲狀腺結(jié)節(jié)診斷中的臨床價(jià)值進(jìn)行了分析，以期為臨床診斷提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年7月至2020年5月于本院進(jìn)行甲狀腺結(jié)節(jié)細(xì)針穿刺病理檢查的196例患者為研究對(duì)象，對(duì)其病理檢查結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。根據(jù)制片方法不同分為細(xì)胞涂片組98例，細(xì)胞塊石蠟包埋切片組98例。細(xì)胞涂片組男45例，女53例；年齡23～57歲，中位年齡51.3歲。細(xì)胞塊石蠟包埋切片組男43例，女55例；年齡26～51歲，中位年齡48.6歲。兩組患者性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞涂片組 應(yīng)用傳統(tǒng)細(xì)胞涂片法進(jìn)行制片。細(xì)針穿刺后抽吸，抽吸結(jié)束后將針管中抽吸物滴于距離標(biāo)簽一側(cè)玻片邊緣2～3 cm處，位于玻片兩側(cè)的中央，標(biāo)本滴的最大徑不超過3 mm。涂片時(shí)，一手握持標(biāo)本玻片，拇指位于標(biāo)簽表面，其余四指并排位于標(biāo)本玻片背面以支撐整個(gè)玻片；另一手推展開玻片，展開玻片下邊緣中央位于標(biāo)本滴上方，展開玻片以垂直于標(biāo)本玻片的角度緩緩向下接近標(biāo)本玻片，當(dāng)展開玻片接觸到標(biāo)本滴時(shí)，標(biāo)本滴在展開玻片下方散開，只需要施加輕微壓力即可。然后將展開玻片沿遠(yuǎn)離標(biāo)簽側(cè)的方向呈直線拉開，使標(biāo)本滴呈卵圓形分布。最后，將制作好的細(xì)胞涂片放入95%酒精溶液中濕固定30 min，常規(guī)HE染色，閱片。

1.2.2細(xì)胞塊石蠟包埋切片組 采用細(xì)胞塊石蠟包埋切片制作方法。(1)細(xì)針穿刺后抽吸，抽吸結(jié)束后將針管中抽吸物注入含有生理鹽水的10 mL離心管內(nèi)，以 2 500 r/min離心10 min,棄上清液。(2)將所得沉淀與4%甲醛溶液1∶1混勻，室溫下靜置20 min后以2 000 r/min離心5 min，棄上清液后取離心管底部沉淀待用。(3)在賽默飛世爾冰凍切片機(jī)內(nèi)制作膠水標(biāo)本托，取市場(chǎng)所售普通膠水適量均勻平鋪于冰凍切片機(jī)標(biāo)本托上冷凍2 min，制作成直徑1.5～2.0 cm，厚4 mm的膠水標(biāo)本托。(4)用吸管將離心管底部的沉淀轉(zhuǎn)移到膠水標(biāo)本托中心，放入-20 ℃冰凍切片機(jī)冷凍臺(tái)上冷凍約1 min，在其表面滴加0.5 mL膠水覆蓋細(xì)胞團(tuán)，待膠水凝固后迅速取出，此時(shí)細(xì)胞團(tuán)與膠水標(biāo)本托凝固成冰塊，將細(xì)胞團(tuán)與標(biāo)本托分離，以伊紅染液點(diǎn)染并用拭鏡紙封包，然后放入脫水機(jī)內(nèi)進(jìn)行脫水。(5)脫水處理后常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色、閱片。當(dāng)細(xì)胞塊石蠟包埋切片標(biāo)本病理檢查結(jié)果判定為惡性病變及疑難病例時(shí)，取切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色進(jìn)一步判斷，采用DAKO LINK48全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色機(jī)染色，所用一抗(HBME-1、CK19、Galectin-3、CD56)均購(gòu)于北京中杉金橋生物有限公司。

1.2.3病理診斷標(biāo)準(zhǔn) 選取患者合格的病理標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察，合格標(biāo)本是指涂片上至少有 6個(gè)濾泡細(xì)胞團(tuán)，且每個(gè)細(xì)胞團(tuán)的濾泡上皮細(xì)胞需在10個(gè)以上。病理診斷應(yīng)用Bethesda報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)行鑒別分析，分為6類標(biāo)本：良性、惡性、可疑惡性、可疑濾泡性腫瘤或?yàn)V泡性腫瘤、意義不明確的濾泡性病變及無(wú)法診斷的標(biāo)本。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1細(xì)胞涂片檢測(cè)結(jié)果 制作的細(xì)胞涂片中可見細(xì)胞分布不均，排列較分散，細(xì)胞呈單個(gè)或片狀分布，細(xì)胞重疊排列，可見一些不典型的乳頭樣、濾泡樣結(jié)構(gòu)等。檢出60例良性,10例惡性,6例可疑惡性,2例可疑濾泡性腫瘤或?yàn)V泡性腫瘤，2例意義不明確的濾泡性病變，共80例，占81.63%，見表1。

2.2細(xì)胞塊石蠟包埋切片檢測(cè)結(jié)果 制作的細(xì)胞塊石蠟包埋切片中可清楚觀察到細(xì)胞排列方式及組織結(jié)構(gòu)，染色鮮艷、定位準(zhǔn)確、背景清晰。細(xì)胞塊石蠟包埋切片組共檢出94例異常標(biāo)本，占95.92%，其中良性74例，惡性20例，見表1。有26例細(xì)胞塊石蠟包埋切片標(biāo)本進(jìn)行了多種抗體免疫組織化學(xué)染色，染色效果較好，定位清晰，因紅細(xì)胞等背景已被處理，因此非特異性染色較少。經(jīng)細(xì)胞塊石蠟包埋切片及免疫組織化學(xué)染色診斷為惡性的20例標(biāo)本中，16例為乳頭狀癌，2例為低分化癌,1例為髓樣癌，1例為未分化癌，免疫組織化學(xué)染色HBME-1、CK19、Galectin-3、CD56陽(yáng)性率見表2。

表1 細(xì)胞涂片組及細(xì)胞塊石蠟包埋切片組診斷結(jié)果[n(%)]

表2 免疫組織化學(xué)染色各抗體陽(yáng)性率分布[n(%)]

2.3兩組檢測(cè)準(zhǔn)確率、良性符合率及惡性符合率比較 根據(jù)術(shù)后病理檢查結(jié)果，196例受檢者均為甲狀腺結(jié)節(jié)患者，其中細(xì)胞涂片組中術(shù)后病理檢查結(jié)果為良性的有72例，占73.47%，惡性有26例，占26.53%；細(xì)胞塊石蠟包埋切片組中術(shù)后病理檢查結(jié)果為良性的有74例，占75.51%，惡性有24例，占24.49%。以術(shù)后病理檢查結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，則細(xì)胞涂片組的檢測(cè)準(zhǔn)確率為71.43%，低于細(xì)胞塊石蠟包埋切片組的95.92%，且良性符合率和惡性符合率也均低于細(xì)胞塊石蠟包埋切片組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組檢測(cè)準(zhǔn)確率、良性符合率及惡性符合率比較[%(n/n)]

3 討 論

女性甲狀腺結(jié)節(jié)發(fā)病率高于男性，且多發(fā)性結(jié)節(jié)較單發(fā)性結(jié)節(jié)更常見[1]。甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺惡性腫瘤最常見的病理類型，占80%～90%[2-3]。臨床上甲狀腺乳頭狀癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高，僅在中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移率就高達(dá)24%～64%，并有較高的復(fù)發(fā)率和病死率[4-5]。細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查可以早期有效地對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性進(jìn)行鑒別診斷，從而早期指導(dǎo)臨床治療。傳統(tǒng)的甲狀腺細(xì)針穿刺后細(xì)胞涂片由于涂片質(zhì)量欠佳，細(xì)胞分散或重疊，以及受到血液等因素的干擾，導(dǎo)致診斷準(zhǔn)確率不高。采用細(xì)胞塊石蠟包埋切片技術(shù)制作的標(biāo)本質(zhì)量相對(duì)較好，細(xì)胞集中，切片厚薄均勻，能在一定程度上保留原腫瘤形態(tài)及組織結(jié)構(gòu)，提供更多的診斷信息。同時(shí)，細(xì)胞塊可以反復(fù)連續(xù)切片，且對(duì)切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色不僅可以定性診斷，還可以明確腫瘤類型，對(duì)于疑難病例可以進(jìn)一步行相關(guān)分子檢測(cè)獲得準(zhǔn)確的診斷結(jié)果。

CK19是腺體組織表達(dá)的一種角蛋白微絲，在80%以上的甲狀腺乳頭狀癌中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),劉翠云等[6]對(duì)105例甲狀腺標(biāo)本的研究發(fā)現(xiàn)，CK19在甲狀腺乳頭狀癌、乳頭狀增生、癌旁組織中的陽(yáng)性率分別為100.0%、25.0%、10.0%，且有研究認(rèn)為，CK19是輔助診斷甲狀腺乳頭狀癌的有效指標(biāo)[7-8]。HBME-1是一種單克隆抗體，在惡性腫瘤中具有顯著特異性。OHTA等[9]研究發(fā)現(xiàn)，HBME1-1在甲狀腺良、惡性腫瘤鑒別診斷中的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和準(zhǔn)確度分別為80.0%、96.0%、96.7%和86.4%。本研究16例甲狀腺乳頭狀癌中有15例為HBME-1陽(yáng)性，陽(yáng)性率為93.75%，而6例良性病變(濾泡性腺瘤)均未表達(dá)HBME-1，與文獻(xiàn)報(bào)道較一致[9]。Galectin-3是半乳糖凝集素家族中的一員。有研究顯示，Galectin-3鑒別良、惡性甲狀腺濾泡性腫瘤的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為84.7%、91.2%、87.5%[10]。還有研究發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測(cè)HBME-1、CK19 和Galectin-3診斷甲狀腺乳頭狀癌的靈敏度達(dá) 99.9%，特異度達(dá)95.4%，提示多種分子標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)具有更高的診斷價(jià)值[10]。CD56是神經(jīng)細(xì)胞黏附分子，其在甲狀腺腫瘤診斷中有重要的應(yīng)用價(jià)值[11]，特別是在鑒別濾泡型甲狀腺乳頭狀癌和其他甲狀腺濾泡性腫瘤時(shí)具有較高的效能。SCARPINO等[12]報(bào)道了61例甲狀腺乳頭狀癌中有18例CD56呈陰性，另外43例呈陽(yáng)性，且CD56陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞位于腫瘤浸潤(rùn)的邊緣，提示CD56的表達(dá)可能與腫瘤侵襲能力有關(guān)。而本研究中CD56在甲狀腺乳頭狀癌中的陽(yáng)性率較低，僅為37.50%(6/16)，而6例良性病變(濾泡性腺瘤)均表達(dá)CD56，提示CD56可能在甲狀腺乳頭狀癌的診斷中具有一定價(jià)值。

本研究中，細(xì)胞塊石蠟包埋切片技術(shù)切片厚薄均勻，細(xì)胞集中，保留了病變的組織結(jié)構(gòu)，能清楚觀察到細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)。細(xì)胞塊石蠟包埋切片組的檢測(cè)準(zhǔn)確率(95.92%)明顯高于細(xì)胞涂片組(71.43%)。細(xì)胞塊還可以反復(fù)連續(xù)切片，進(jìn)行相關(guān)免疫組織化學(xué)染色，可對(duì)病變進(jìn)一步準(zhǔn)確診斷及分型。此外，由于細(xì)胞塊具有可重復(fù)利用的優(yōu)勢(shì)，臨床常用其進(jìn)行相關(guān)基因檢測(cè)來進(jìn)一步輔助診斷及指導(dǎo)治療[13]。