亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與血栓彈力圖在胎兒不良妊娠結(jié)局中的應(yīng)用價(jià)值*

倫瑞花，喬 靜，張 欣，張曉科，田 軍，王仁存，龐新豐

河南省焦作市婦幼保健院：1.檢驗(yàn)科；2.兒科一區(qū)；3.醫(yī)學(xué)遺傳與產(chǎn)前診斷科；4.產(chǎn)科一區(qū)；5.輸血科，河南焦作 454000

胎兒不良妊娠結(jié)局主要包括流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、低出生體質(zhì)量?jī)骸⒕薮髢?、新生兒先天性異常及死亡等。?dǎo)致胎兒不良妊娠結(jié)局的原因包括父母雙方或一方外周血染色體異常，孕產(chǎn)婦生殖系統(tǒng)或功能異常，妊娠期高血壓、糖尿病、甲狀腺功能異常等妊娠期合并癥，以及孕婦血液高凝狀態(tài)等[1]。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是人體內(nèi)葉酸代謝和同型半胱氨酸代謝作用酶，與脫氧核糖核酸甲基化關(guān)系緊密[2]。MTHFR基因多態(tài)性可使MTHFR的生理活性減低，發(fā)生同型半胱氨酸代謝異常[3]，引起體內(nèi)葉酸水平減少，并發(fā)生高同型半胱氨酸血癥，高凝狀態(tài)下，引起微血管栓塞、胎兒發(fā)育受限，誘發(fā)不良妊娠結(jié)局[4]。目前，關(guān)于MTHFR基因多態(tài)性與高凝狀態(tài)導(dǎo)致胎兒不良妊娠結(jié)局的相關(guān)研究甚少。本研究對(duì)發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的孕產(chǎn)婦進(jìn)行MTHFR基因多態(tài)性與血栓彈力圖指標(biāo)檢測(cè)，并分析其臨床意義，以期為臨床診治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年5月至2020年10月于本院就診的發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的孕產(chǎn)婦100例作為研究組，年齡22～35歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)近親結(jié)婚；外周血染色體核型正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：孕產(chǎn)婦生殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)或功能異常；合并妊娠期高血壓、糖尿病、甲狀腺功能異常等妊娠期合并癥。選取同期本院60例健康體檢育齡期女性(有正常妊娠史)作為對(duì)照組，年齡21～35歲。

1.2方法

1.2.1MTHFR C677T、A1298C基因多態(tài)性檢測(cè) 采用熒光定量PCR檢測(cè)MTHFR C677T、A1298C基因單核苷酸多態(tài)性。反應(yīng)體系為10 μL，包含1 μL基因組DNA(20 ng/μL)，5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB探針，3.5 μL去離子水。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，92 ℃變性15 s，60 ℃延伸1 min，20個(gè)循環(huán)；89 ℃變性15 s，60 ℃延伸90 s，30個(gè)循環(huán)。反應(yīng)完成后，在ABI 7900熒光定量PCR 儀上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光，利用分析軟件確定基因分型結(jié)果。

1.2.2血栓彈力圖檢測(cè) 采集外周靜脈血1.8 mL，加入含3.2%枸櫞酸鈉抗凝劑0.2 mL的真空管中，輕柔混勻后送檢，檢測(cè)在2 h內(nèi)完成。檢測(cè)方法為粘度測(cè)定法，采用寶銳生物BVCA-1型血栓彈力圖儀及配套的試劑及質(zhì)控品，模式設(shè)置為普通杯檢測(cè)，按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。血栓彈力圖參數(shù)包括反應(yīng)時(shí)間(R)、凝固時(shí)間(K)、凝固角(α角)、血凝塊形成的最大振幅(MA)。

1.2.3常規(guī)凝血指標(biāo)檢測(cè) 采用希森美康CS5100全自動(dòng)凝血檢測(cè)儀及配套試劑檢測(cè)常規(guī)凝血指標(biāo)[凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)]，檢測(cè)前進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，檢測(cè)過(guò)程按試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1兩組MTHFR C677T、A1298C基因型分布情況比較 納入研究對(duì)象的基因型、等位基因頻數(shù)分布符合哈迪-溫伯格平衡定律。研究組與對(duì)照組C677T基因型中TT型所占比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而CC、CT型比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。A1298C基因型中AA、AC、CC型所占比例比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組MTHFR C677T、A1298C基因型分布情況比較[n(%)]

2.2兩組MTHFR C677T、A1298C等位基因分布情況比較 研究組與對(duì)照組C677T T、C等位基因所占比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；研究組與對(duì)照組A1298C A、C等位基因所占比例比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組MTHFR C677T、A1298C等位基因分布情況比較[n(%)]

2.3研究組MTHFR C677T基因型與胎兒不良妊娠結(jié)局的關(guān)系 C677T基因型中，TT型與CC+CT型攜帶者出現(xiàn)低出生體質(zhì)量?jī)?、早產(chǎn)的比例比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；發(fā)生流產(chǎn)、死胎、新生兒先天性異常的比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TT型攜帶者的胎兒不良妊娠結(jié)局發(fā)生率明顯高于CC+CT型攜帶者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 研究組MTHFR C677T基因型與胎兒不良妊娠結(jié)局的關(guān)系[n(%)]

2.4研究組MTHFR C677T基因型與血栓彈力圖及常規(guī)凝血指標(biāo)的關(guān)系 C677T基因型中，TT型與CC+CT型攜帶者PT、APTT、FIB水平及R比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，K、α角、MA比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 研究組MTHFR C677T基因型與血栓彈力圖及常規(guī)凝血指標(biāo)的關(guān)系

2.5血栓彈力圖各參數(shù)診斷MTHFR C677T基因TT型攜帶者發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，MA診斷MTHFR C677T基因TT型攜帶者發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的曲線下面積(AUC)為0.856，高于R、K及α角的AUC，具有較高的診斷效能。見表5。

表5 血栓彈力圖各參數(shù)診斷MTHFR C677T基因TT型攜帶者發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的效能

3 討 論

C677T突變是MTHFR基因最常見的錯(cuò)義突變[5]，其能使MTHFR活性降低，導(dǎo)致葉酸代謝受到影響。有研究發(fā)現(xiàn)，MTHFR基因多態(tài)性與妊娠10周后的胎兒不良妊娠結(jié)局有關(guān)，特別是與妊娠20 周后的非復(fù)發(fā)性流產(chǎn)之間存在相關(guān)性[6]。高同型半胱氨酸血癥增加了妊娠期胎盤微血管血栓的形成風(fēng)險(xiǎn)。通常認(rèn)為血液流速低容易造成母胎連接處血栓形成，引起胎盤出現(xiàn)相應(yīng)改變，常見的不良妊娠結(jié)局有早產(chǎn)、流產(chǎn)、妊娠期高血壓合并子癇前期、胎兒生長(zhǎng)受限及胎盤早剝等[7]。本研究結(jié)果顯示，研究組與對(duì)照組C677T基因型中TT型所占比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明TT型與胎兒不良妊娠結(jié)局有關(guān)；進(jìn)一步分析兩組等位基因分布情況發(fā)現(xiàn)，研究組與對(duì)照組C677T T、C等位基因所占比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究顯示，攜帶T等位基因可能是導(dǎo)致胎兒不良妊娠結(jié)局的原因[8]。進(jìn)一步分析C677T基因多態(tài)性與胎兒不良妊娠結(jié)局間的關(guān)系，結(jié)果顯示，TT型攜帶者發(fā)生流產(chǎn)、死胎、新生兒先天性異常的比例高于CC+CT型攜帶者；TT型攜帶者的胎兒不良妊娠結(jié)局發(fā)生率明顯高于CC+CT型攜帶者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示C677T基因TT型可能是導(dǎo)致胎兒不良妊娠結(jié)局的重要因素。

發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的孕產(chǎn)婦血液通常為高凝狀態(tài)，容易形成血管微血栓，導(dǎo)致胎盤血液循環(huán)異常，造成早產(chǎn)、胎盤發(fā)育停止、胎盤早剝、胎死宮內(nèi)等情況[9]。孕產(chǎn)婦血液高凝狀態(tài)的程度與胎兒不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率呈正相關(guān)[10]。在發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的孕產(chǎn)婦中，MTHFR C677T基因TT型與CC+CT型攜帶者PT、APTT、FIB水平及R比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而K、α角、MA比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明常規(guī)凝血指標(biāo)水平與發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局孕產(chǎn)婦的MTHFR C677T基因多態(tài)性無(wú)明顯關(guān)系;而血栓彈力圖參數(shù)更能有效反映孕產(chǎn)婦因MTHFR C677T基因多態(tài)性而引起的凝血功能異常[11]。采用ROC曲線分析血栓彈力圖各參數(shù)診斷MTHFR C677T基因TT型攜帶者發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的價(jià)值，結(jié)果顯示，MA診斷MTHFR C677T基因TT型攜帶者發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的AUC為0.856，高于R、K及α角的AUC，具有較高的診斷效能。MA是反映血小板聚集功能的指標(biāo)，血小板功能或數(shù)量異常都有可能造成MA水平異常。血栓彈力圖比常規(guī)凝血指標(biāo)能更早地檢測(cè)出機(jī)體病理性高凝狀態(tài)及血栓形成傾向[12]，因此，對(duì)于MTHFR C677T基因TT型攜帶者臨床上可考慮結(jié)合血栓彈力圖檢測(cè)，提高對(duì)孕產(chǎn)婦發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)能力[13]。

綜上所述，MTHFR C677T基因TT型與孕產(chǎn)婦發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局有關(guān)，血栓彈力圖相關(guān)參數(shù)中MA診斷MTHFR C677T基因TT型攜帶者發(fā)生胎兒不良妊娠結(jié)局的價(jià)值較高。