多發性硬化患者幽門螺桿菌感染情況分析*

王玉飛，白 真，朱曉雯，劉淑靜，周 金，谷愉愉，司學眾，張國軍△

1.首都醫科大學附屬北京天壇醫院檢驗科/國家藥監局體外診斷試劑質量控制重點實驗室/北京市免疫試劑臨床工程技術研究中心，北京 100070；2.首都醫科大學臨床檢驗診斷學系，北京 100070

多發性硬化(MS)是一種以中樞神經系統炎性脫髓鞘病變為主要特點的免疫介導性疾病，好發于20～40歲正值工作巔峰狀態的青壯年，女性多于男性。MS是中青年神經源性殘疾最常見的原因之一，全球約有兩百多萬人受累[1-2]，其發病機制復雜，為環境和遺傳因素共同作用所致，具體病因尚不明確[3]。幽門螺桿菌(Hp)是人體腸道內的一種革蘭陰性微需氧菌，相比于發達國家，發展中國家Hp的陽性率更高[4]。近年來，有研究認為Hp感染與腸外疾病(如冠心病、阿爾茲海默癥及一些自身免疫疾病等)相關[5]。且有研究發現，Hp的感染與MS存在關聯[6-8]，但并無一致結論。不同種族人群中MS發病率有較大差異，目前關于我國MS人群Hp陽性率的研究較少。本研究旨在通過分析相關臨床資料和實驗室數據，比較Hp陽性MS患者和Hp陰性MS患者在淋巴細胞亞群、補體、細胞因子等指標方面是否存在差異，以期為MS治療及后期藥物靶點開發提供一定的理論依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年8月至2021年5月就診于首都醫科大學附屬北京天壇醫院的94例MS患者作為MS組，MS的診斷根據2017年McDonald診斷標準[9]。排除標準：(1)合并嚴重心、腦血管疾病，肝腎功能不全；(2)急、慢性感染；(3)合并腫瘤。 選取同時期來院的健康體檢者282例作為對照組,其中男78例，女204例。

1.2儀器與試劑 淋巴細胞亞群(相對計數)采用免疫熒光FACSC CantoⅡ流式細胞儀(BD公司)，試劑為配套的MultitestUIMK kit。細胞因子采用西門子IMMULITE 1000全自動分析儀及配套試劑盒。補體采用BN ⅡSystem全自動蛋白分析儀及配套試劑盒。Hp檢測采用Hp IgG抗體檢測試劑盒(MP Biomedicals公司)。

1.3患者標本收集 采集患者空腹時肘靜脈血5 mL(黃帽管，共3管)，3 500 r/min離心10 min后獲得血清，血清標本用來檢測Hp、細胞因子6項及補體2項。全血樣本采用EDTA抗凝的紫帽管收集，用于淋巴細胞亞群的相對計數。所有標本均在2 h內完成檢測。

1.4觀察指標 收集MS患者年齡、性別、MS分型等基本臨床信息，以及Hp陽性情況、淋巴細胞亞群相對計數、6項細胞因子和補體(C3和C4)的水平。收集對照組年齡、性別及Hp陽性情況。淋巴細胞亞群計數包括：輔助性T細胞(Th，CD3+CD4+)、抑制性T細胞(Ts，CD3+CD8+)、輔助性與抑制性T細胞比值(Th/Ts)、B細胞(B，CD3-CD19+)和自然殺傷細胞(NK，CD3-CD16+CD56+)。細胞因子6項包括：腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-1β、IL-2R。

2 結 果

2.1MS患者一般情況 MS患者共94例，年齡16～27歲，中位年齡33歲。MS中男女比例為1.0∶2.6。MS患者中復發緩解型75例，繼發進展型6例，原發進展型1例，剩余12例分型信息不明確。

2.2MS組和對照組Hp陽性結果比較 94例MS患者中Hp陽性35例，陽性率為37.23%；282例對照組中Hp陽性127例，陽性率為45.04%。兩組Hp陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。MS患者中復發緩解型Hp陽性率為34.67%(26/75)，繼發進展型Hp陽性率為50.00%(3/6)，兩種型別間Hp陽性率差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 MS組和對照組Hp陽性結果比較

2.3不同性別Hp陽性率比較 女性MS組共68例，Hp陽性21例，陽性率為30.88%；女性對照組共204例，Hp陽性92例，陽性率為45.10%。女性MS組Hp陽性率低于對照組，差異有統計學意義(P=0.037)。男性MS組Hp陽性率為53.85%，與男性對照組的44.87%比較，差異無統計學意義(P=0.427)。女性MS組Hp陽性率低于男性MS組，差異有統計學意義(P=0.039)。見表1。

2.4淋巴細胞亞群、細胞因子和補體在MS患者中的差異 經過數據篩選，只有43例MS患者有完整的細胞因子數據，將這43例患者分為Hp陽性MS患者和Hp陰性MS患者，結果顯示Hp陽性MS患者Th、Th/Ts和補體C3高于Hp陰性MS患者，在兩組間的差異有統計學意義(P<0.05)，其他淋巴細胞亞群、補體、細胞因子比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 淋巴細胞亞群、細胞因子和補體在MS患者中的差異

3 討 論

Hp感染是世界上最常見的慢性感染之一,在全球范圍內廣泛流行。我國Hp的陽性率約為56.0%[10]，遠遠高于發達國家(瑞士和澳大利亞，其為18.9%和15.1%)[4,11]。研究發現，Hp感染在某些神經系統疾病的發生、發展及轉歸中可能發揮著非常重要的作用[12]。MS是最常見的中樞神經系統炎性疾病之一。目前對于Hp感染與MS的關系尚有較大爭議。MS的動物模型，即實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)大鼠模型試驗發現，Hp感染可減輕大鼠的肢體癱瘓程度，提示Hp可減輕EAE的嚴重程度[7]。JARUVONGVANICH等[13]及YAO等[5]的Meta分析均表明Hp感染與MS呈負相關。RANJBAR等[14]對伊朗國家的人群(387例MS患者和420例健康對照者)研究發現，Hp感染可能是MS的保護性因素，這可能與一種“衛生理論”假說有關，該假說認為早期感染對自身免疫有至關重要的作用，機體感染病原體后可打破細胞因子間的平衡，使機體趨于低變應性狀態，因而可減少后期的過敏及自身免疫反應[11]。

然而也有研究得出相反的結論，GAVALAS等[8]研究發現，MS組Hp陽性率明顯高于對照組，Hp感染可引起體液及細胞免疫反應，加重神經損傷。此外，國內LONG等[15]的研究表明，Hp感染與MS并無任何關聯?？梢?，Hp感染與MS間的關系并無一致結論，不同地區和國家的數據與結論存在一定的差異。Hp具有明顯的遺傳多態性，不同亞型的Hp在細胞形態、激活免疫反應等方面存在差異[16]，Hp感染患者可攜帶不同組合的Hp亞型，這種個體差異也可能是上述研究結論不一致的原因之一。

本研究納入了94例MS患者，但并未發現MS組的Hp陽性率與對照組有明顯差別?？紤]到MS患者的性別差異較大，本研究分析了不同性別MS患者Hp陽性率與相應的對照組是否存在差異，發現女性MS患者的Hp陽性率明顯低于健康女性，這一差異在男性MS患者中并未發現，這與澳大利亞1項更大人群(550例MS患者和299例對照)的研究結論相似[11]。LONG等[15]在國內開展的針對視神經脊髓炎(NMO)和MS患者Hp陽性率的研究發現，NMO患者Hp的陽性率更高，Hp感染可能是NMO的危險因素，而Hp感染與MS并無相關性。這項研究只納入了42例MS患者，且未分析不同性別MS患者之間Hp陽性率的差異，這可能是與本研究結論不同的原因所在。

MS發病機制并不明確，其為多基因遺傳與環境因素共同作用所致。不同亞型的T細胞在MS的發病及進程中有不同作用。Th細胞和Ts細胞數量、比值等異常時，T細胞調節失衡，可誘發機體發病[17]。本研究發現，Hp陽性的MS患者中Th細胞明顯高于Hp陰性的MS患者。有研究通過檢測Th1和Th2型細胞因子發現，MS組γ干擾素(IFN-γ)水平均明顯高于正常組，IL-10和IL-4則明顯降低，推測通過調節Th1/Th2型細胞因子的平衡也是減輕MS免疫損傷的重要機制之一[18]。RANJBAR等[14]的研究發現，相比于Hp陰性MS患者，Hp陽性MS患者中促炎性細胞因子(IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α)水平均明顯降低，而抑炎性細胞因子(IL-4、IL-10)水平則明顯升高。本研究并未發現Hp陽性與Hp陰性MS患者在相關細胞因子水平上有明顯差異，可能與樣本量較少有關。補體系統是參與免疫調節的重要機制，在識別和清除微生物方面有重要作用。本研究發現，Hp陽性MS患者中C3水平明顯高于Hp陰性MS患者，提示Hp可能通過固有免疫途徑參與相關炎性反應。

本文的局限性在于本研究為單中心，MS病例較少，相關結論還需要更大樣本量的驗證。本研究中淋巴細胞亞群的檢測并不能進一步區分Th1和Th2細胞因子，這是下一步的研究中需要改進的地方。綜上所述，女性MS患者Hp的陽性率明顯低于健康女性，提示Hp感染可能與女性MS有關。