PD-L1在肺癌組織學分類中的表達情況及與臨床病理特征的關系

朱燕燕，蔣艷，楊小苗，曹明，懷建國

（蕪湖市第一人民醫院 病理科，安徽 蕪湖 241000）

0 引言

肺癌是目前世界范圍內最常見的惡性腫瘤之一，死亡率非常高[1]。靶向治療可以明顯改善肺癌患者的生存時間，但是要求患者要有靶向藥物的驅動基因突變，因此仍然有很大一部分患者沒有靶向治療的機會。尤其是SCLC的患者，其很少有靶向藥物基因的突變。目前肺癌的治療已經由靶向治療發展到了免疫治療時代，其已經成為晚期肺癌治療中的重要手段。PD-1/PD-L1免疫抑制劑藥物自面世以來就備受關注，在 Keynote-3475-042 試驗中，PD-L1 TPS≥1%的患者總生存期高于傳統化療的總生存期，而且療效與腫瘤細胞PD-L1表達呈正相關，所以進行PD-L1檢測對指導臨床免疫治療有重要的參考價值[2]。本研究主要通過檢測肺癌腫瘤細胞中PD-L1的表達情況，探討PD-L1在腺癌、SCC、SCLC三種組織學分類中的表達特點及PD-L1陽性表達與臨床病理特征之間的關系，為臨床治療提供一定的參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料。收集近5年內蕪湖市第一人民醫院病理科的肺癌標本，包括手術標本和活檢標本共98例，排除腫瘤細胞量不足（≤100個）及經過化療的標本。其中腺癌36例，SCC 39例，SCLC 23例。其中男79例，女19例，年齡25～88歲，平均70歲。活檢標本71例，手術標本27例。有吸煙史60例；腫瘤大小＞5 cm 48例；臨床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分別為22例、14例、28例、34例。

1.2 組織學分類。由兩名資深病理醫師閱片，按WHO（2015）肺腫瘤組織學分類標準明確診斷及分類。所有標本均行免疫組織化學標記 （TTF-1、Napsin-A、P40、P63、CgA、Syn、CD56、Ki-67）輔助肺癌的組織學分類。

1.3 免疫組化法檢測肺癌腫瘤細胞內PD-L1。PD-L1一抗使用Roche公司克隆號SP263，其他試劑如二抗、DAB染色液、返藍染色液及蘇木素染色液等均為Roche全自動免疫組化儀相配套的產品。全自動免疫組化儀為Roche公司Ventana（BENCHMARK-XT）。通過電腦輸入一抗名稱并打印標簽貼于玻片上。蠟塊3 um厚切，每一張玻片上均有腫瘤組織和作為陽性對照的胎盤組織。將切片上機后按照電腦設置好的染色方案運行儀器。染色完成后取出玻片，洗去緩沖液，經95%乙醇和二甲苯脫水、透明、封片。

1.4 判讀標準及陽性結果設定。①腫瘤細胞PD-L1的判讀為：任何強度PD-L1膜染色的腫瘤細胞在所有腫瘤細胞中占的百分比。本研究依據肺癌中腫瘤細胞PD-L1表達的不同百分比值分為三組：陰性組（PD-L1＜1%），低表達組（1%≤P D-L 1＜5 0%）及高表達組（P DL1≥50%）；并把PD-L1≥1%設定為陽性表達。②腫瘤相關免疫細胞PD-L1的判讀為：任何強度PD-L1染色的免疫細胞占總免疫細胞的百分比，并把腫瘤相關免疫細胞PDL1≥10%設定為陽性表達。

1.5 統計學分析。本文應用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析，對計數資料采用χ2檢驗進行比較；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PD-L1在肺癌組織學分類的腫瘤細胞中表達情況。98例肺癌中PD-L1陽性75例，陽性率76.5%（75/98）。其中腺癌、SCC及SCLC陽性率依次為77.8%（28/36）、82.1%（32/39）、65.2%（15/23）。SCC中PD-L1陽性率最高，在高表達組所占比例也最高61.9%（13/21）。腺癌中PD-L1陽性率次之，在低表達組所占比例略高37.0%（20/54）。SCLC中PD-L1陽性率最低，且高表達組為0%。PD-L1在三種肺癌組織學分類之間的表達差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 PD-L1在肺癌組織學分類的腫瘤細胞中的表達情況（例）

2.2 SCC與腺癌中腫瘤細胞PD-L1陽性表達與臨床病理特征之間的關系。SCC和腺癌這兩種組織學分類的腫瘤細胞中的PD-L1的陽性表達在患者年齡、性別、有無吸煙史、腫瘤大小及臨床分期上均差異有統計學意義（P＜0.05）。在SCC中PD-L1陽性患者男性占96.9%、年齡≥65歲的占84.4%、吸煙患者的占84.4%，均高于腺癌中所占的比例。在腫瘤大小和臨床分期方面，SCC中PD-L1陽性患者腫瘤大小＞5 cm的占59.4%、臨床分期在Ⅲ+Ⅳ期占78.1%，同樣高于腺癌。SCC在腫瘤相關免疫細胞PD-L1陽性率上差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 SCC與腺癌中腫之瘤間細的胞關PD系-（L1例陽）性表達與臨床病理特征

3 討論

近年來免疫治療成為了肺癌治療的重要新興手段。代表藥物為PD-1/PD-L1抑制劑，PD-L1也稱B7-H1，是B7超家族成員，是Ⅰ型跨膜糖蛋白，廣泛表達于多種免疫細胞表面，在免疫調節中發揮重要作用[3]。而當腫瘤細胞高表達PD-L1與免疫細胞上的PD-1結合時，可以幫助腫瘤細胞逃避人體的免疫監控和殺傷。PD-1/PD-L1抑制劑可以阻斷負向調控信號，恢復T細胞活性，對抗免疫逃逸，從而抑制和殺滅腫瘤細胞，而非簡單的針對腫瘤細胞的殺傷，使患者獲得一個更持久的療效。不管是免疫抑制劑用于肺癌治療的優勢人群的選擇還是對免疫抑制劑療效的評估都需要了解患者腫瘤細胞的PD-L1表達水平。PD-L1在不同檢測平臺和評分標準也有差異[4-5]。

本研究使用的是Roche公司PD-L1 SP263克隆號作為檢測PD-L1的一抗。本研究發現PD-L1在肺癌腫瘤細胞中陽性率為76.5%，略高于國內一些研究結果。還發現PD-L1的表達與肺癌的組織學分類有關，差異有統計學意義（P＜0.05），PD-L1在SCC中表達陽性率最高。本研究還發現PD-L1在SCC中高表達組（PD-L1≥50%）所占的比例也高于腺癌和SCLC。PD-L1在SCLC中的陽性率最低，而且PD-L1表達的也多集中在低表達組，并無一例PD-L1表達≥50%，這一結果和多數研究顯示的PD-L1在SCLC中陽性率低相符。雖然PD-L1在SCLC中的表達水平較低，但是仍然有一半的SCLC表達PD-L1（即PD-L1＞1%），而Keynote158研究證實Pembrolizumab對PD-L1＞1%的陽性患者有療效。這說明有部分SCLC患者仍然擁有選擇免疫抑制劑治療的機會。

綜上所述，本研究使用Roche公司PD-L1克隆號SP263做為一抗，研究結果顯示PD-L1在SCC中腫瘤細胞陽性率最高，腺癌次之，SCLC陽性率最低。在SCC和腺癌中PD-L1陽性表達和臨床病理特征上有關，在SCLC中PD-L1陽性表達和這些臨床病理特征相關性不大。