化學發光法與酶聯免疫吸附法進行HIV抗體檢測效果分析

陳錦男

（哈爾濱醫科大學大慶校區，黑龍江 大慶 163319）

0 引言

HIV感染是導致患者發生艾滋病的最為主要的因素，在社會公共衛生領域，控制HIV的傳播已經成為一個十分重要的研究課題。艾滋病，臨床上也將其稱為免疫缺乏綜合征，患者在感染HIV之后，自身的免疫系統會受到嚴重損害，最終患者會因為免疫功能完全喪失而死亡。HIV的傳播主要包含以下三個方面的途徑，即性傳播、母嬰傳播以及血液傳播。從現階段的情況來看，HIV病毒主要就是通過性來傳播的。要想有效改善艾滋病患者的治療效果，早期發現HIV是前提條件，現階段臨床上在針對HIV病毒感染患者進行篩查的過程中，最常用的方式就是實驗室HIV抗體檢查，本次研究就針對HIV病毒檢測最常用的兩種方法，酶聯免疫吸附法以及化學發光法的臨床應用價值進行了探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選擇2019年6月至2020年2月在哈爾濱醫科大學附屬第一醫院接受HIV抗體檢測的患者680例為研究對象，男341例，女339例，年齡18～62歲，平均（39.1±6.9）歲。參與研究的所有患者均需要同時接受化學發光法以及酶聯免疫吸附法檢測，在獲取患者的血液標本之后，不對血液標本進行溶血以及清亮處理，需要在6℃左右的恒溫狀態下儲存血液標本。

1.2 方法。做好前期的準備工作，首先，將試劑盒放入室內并使其平衡至室溫，再對將濃縮的洗滌液用離子水或蒸餾水進行1∶20的稀釋。其次，將已經加入的50μL的陰性和陽性待測樣本對照反應孔，置于設定37℃的溫箱孵育60 min[1]。再次，清除孔內的液體，將已經配置好的工作濃度洗滌液住滿每個孔，并靜止30～60 s后清除孔內的洗液，重復6次操作后拍干。再將待測的陰性和陽性樣本的孔中加入50μL的酶結合物。置于設定37℃的溫箱孵育60 min。再次，清除孔內的液體，將已經配置好的工作濃度洗滌液住滿每個孔，并靜止30～60 s后清除孔內的洗液，重復6次操作后拍干。每個孔內加入底物緩沖劑以及底物液各50μL，置于設定37℃的溫箱孵育30 min。最后，用酶標儀讀數，數值取波長450 nm，參考波長630 nm，用空白孔校對到零，再讀取每個孔的OD值[2]。患者在接受化學發光法檢測的過程中，所使用的工具為化學發光法分析儀，儀器的型號為雅培I2000，首先要進行免疫分析，之后進行抗原的制作，在完成標記的過程中，需要充分結合辣根過氧化氫物酶，在對試劑盒進行清洗之后，將需要檢測的標本加入到試劑盒中，之后在試劑盒中加入吖嘧碇底物，對標本實施檢測。

1.3 臨床觀察指標。參與研究的所有患者均需要接受化學發光法檢測以及酶聯免疫吸附法檢測，首先對比兩種檢測方法的疾病檢出率，之后對比兩種檢測方法的確診率以及誤診率[3]。在確定患者確診率以及誤診率的過程中，需要對比免疫印跡試驗結果，并將此試驗結果作為金標準，對檢測過程中的誤診率以及確診率進行判斷。

1.4 統計學分析。采用SPSS 25.0軟件分析數據，計量資料采用均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗。計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對比兩種不同檢測方式下受檢者的確診率。兩組檢測結果在確診率方面存在較大的差異性，化學發光法的確診率相對較高（P＜0.05），詳見表1。

表1 對比兩種不同檢測方式下受檢者的確診率[n（%）]

2.2 對比兩種不同檢測方式下受檢者的誤診率以及漏診率。在漏診率以及誤診率方面，化學發光法檢測均相對較低（P＜0.05），詳見表2。

表2 對比兩種不同檢測方式下受檢者的誤診率以及漏診率[n（%）]

3 討論

患者在出現HIV病毒感染的問題之后，通常疾病的發展會存在三個分期，第一個分期是急診期，第二個分期是無癥狀期，第三個分期是艾滋病期，患者所處的疾病分期階段不同，其所表現出來的臨床癥狀也會存在較大的差異[4]。從現階段的情況來看，臨床上在對患者實施HIV病毒檢查的過程中，實驗室抗原檢查是最為主要的手段，除此之外，也會通過機體免疫功能檢查的方式來判斷患者的病情，另外，在針對疑似HIV病毒感染患者進行檢查的過程中，病原體檢查以及致病性感染檢查也是最為常用的手段，但是相比于這兩種檢測方式來說，HIV抗體檢測的臨床結果往往具有更高的可信度[5]。HIV抗體檢測大體可以分成兩個類型，即本文在研究中所提到的酶聯免疫吸附法以及化學發光法，但是從現階段的情況來看，臨床上在對患者實施HIV檢測的過程中往往有著較多的干擾因素，上述兩種方法的臨床檢測結果可信度依然無法確定。而患者在接受檢測的過程中，為了確定檢測方法可靠度，最為重要的依據就是相關檢測方法的敏感度以及特異度。

從研究情況來看，通過采用化學發光法對患者進行檢測，總確診率整體高于酶聯免疫吸附法，另外通過對比免疫印跡試驗結果發現，化學發光法的誤診率以及漏診率的整體低于酶聯免疫吸附法。由此能夠說明，在實際落實HIV抗體檢測相關工作的過程中，與酶聯免疫吸附法相比，化學發光法的檢測結果有著更高的可信度。國內臨床上在針對疑似HIV感染患者進行檢測的過程中，通常情況下采用的標準都是血清病毒抗體檢測結果，在判斷患者是否感染HIV的過程中，最為直接的依據就是抗HIV抗體，而檢測相關抗原以及病毒只是作為臨床診斷過程中的輔助手段，之所以如此，主要就在于患者一旦感染HIV，病毒將終身難以被有效清除，換句話說，患者將始終處于持續感染的狀態中，因此通過對患者的體內抗體進行檢測，便能夠判斷患者是否存在HIV病毒感染的問題。以往在實際檢測的過程中，多數情況下選擇的方法都是膠體金法，這種檢測方法的檢測成本相對較低，檢測過程中不需要使用較多的儀器設備，而且檢測過程具有快速簡單的優勢，但是這種方法也有其自身的缺陷，主要包括無法進行實驗室質控、敏感性低、沒有統一的檢測標準等，因此漏診以及誤診的概率相對較高，不適合在小型實驗室中使用。另外，使用酶聯免疫吸附法對患者進行檢測的過程中主要存在以下幾方面的優勢，首先，檢測過程中可以結合抗原以及抗體，對于抗原以及抗體的免疫活性能夠給予最大限度的保留。其次，檢測過程中能夠形成酶標記抗原以及抗體，使其免疫活性能夠得以充分保留，對于酶活性的保留也有著十分重要的意義。另外，依據標準的測定流程在固相載體上放置受檢樣本以及酶標記抗原抗體，對于免疫復合物的形成能夠起到一定的促進作用。最后，在洗滌的作用之下，能夠對于免疫復合物進行分離處理，在固相載體上的物質到達一定比例之后，在其中加入吖嘧碇底物，則能夠有效促進有色產物的生成，能夠方便檢測者判斷待檢物質的水平。但是從另外的一個角度來講，由于酶聯免疫吸附法需要對結合態以及游離態的抗原/抗體進行分離，因此在實際檢測的過程中，需要反復進行洗板以及加樣操作，進而增加了檢測過程中誤差問題的發生概率，除此之外，操作的繁瑣度相對較高，數據檢測結果的時間相對較長，因此有著較高的判斷難度。而化學發光法則主要是應用了電化學發光技術、磁性微珠包被技術以及生物素親和技術，檢測過程中靈敏度相對較高，不僅能夠有效減少批內誤差以及檢測時間，同時所獲取的臨床結果也有著較高的準確率，另外，由于在檢測的過程中檢測標本主要是在封閉以及流動的系統中運轉，能夠有效減少檢測過程中交叉感染問題的發生概率，加上試劑方面自身有著較高的穩定度，檢測結果的可靠性也相對較高。尤其需要關注的是，通過采用化學發光法，不需要較長的檢驗結果分析時間，臨床檢驗結果的出具只需要30 min左右，由于檢測效率相對較高，非常適合批量化進行分析，使得診斷的窗口期得到有效縮短，但是由于此種檢測方法有著較高的成本，在基層醫院推廣的難度相對較高。

綜上所述，在對患者實施HIV檢測的過程中，通過采用酶聯免疫吸附法檢測以及化學發光法檢測，兩組檢測結果存在著十分明顯的差異，而相比于酶聯免疫吸附法來說，由于化學發光法檢測結果的漏診率以及誤診率相對更低，因此檢測結果的可信度相對更高，但是從實際應用的角度來進行分析，在進行室間質控檢測的過程中，則不適合采用化學發光法進行操作。