葛根提取物對CCl4致小鼠急性肝損傷的保護作用

陳苑紅 陳國權(quán)

廣東省佛山市順德區(qū)第三人民醫(yī)院(北滘醫(yī)院)，廣東 佛山 528000

急性肝損傷是臨床上常見的肝臟疾病，許多因素如化學物質(zhì)、感染、缺血、藥物及酒精等均會造成急性肝臟損傷，引發(fā)肝功能的不全[1]。臨床上，急性肝損傷患者有著血清轉(zhuǎn)氨酶的升高、膽紅素升高等表現(xiàn)。長期肝損傷則會導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化、肝癌甚至肝衰竭，嚴重危害人類的身體健康。目前臨床上主要使用核苷類似物、維生素類以及保肝降酶等藥物進行對癥治療，可供選著的針對性藥物較少，并且在治療過程往往伴隨著一定的不良反應(yīng)的發(fā)生[2]。因此，目前仍需尋找安全有效的治療藥物。

葛根是豆科植物野葛或甘葛藤干燥的根，具有透疹、解肌退熱、升陽止瀉、生津止渴等功效。臨床上主要用于陰虛消渴、麻疹不透、脾虛泄瀉等疾病的治療。現(xiàn)代研究[3-4]發(fā)現(xiàn)，葛根具有降血壓、降血糖、保護心肌缺血再灌注損傷、抗腫瘤、抗脂質(zhì)過氧化等藥理作用，并在保護肝臟方面也具有一定作用。為了進一步研究葛根的肝臟保護作用，研究采用CCl4誘導(dǎo)急性肝損傷模型，探討葛根對化學毒性物誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護研究。

1 材料

1.1 實驗動物 昆明小鼠60只，雄性，SPF級，體質(zhì)量18～22 g，購自廣東省醫(yī)學動物實驗中心，許可證號：SCXK(粵)2013-0002。

1.2 藥品與試劑 葛根提取物(葛根總黃酮≥60%，批號20180412，西安賽邦生物技術(shù)有限公司)，聯(lián)苯雙酯滴丸(批號：17070103，北京協(xié)和藥廠)，分析純四氯化碳(批號：201407，天津市富宇細化工有限公司)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒(ALT，批號：20180506)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒(AST，批號：20180516)，總膽汁酸試劑盒(TBA，批號：20180412)、總膽紅素試劑盒(TBIL，批號：20180604)、堿性磷酸酶試劑盒(ALP，批號：20180203)，γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶試劑盒(γ-GT，批號：20180405)、總超氧化物歧化酶試劑盒(SOD，批號：20180522)、丙二醛試劑盒(MDA，批號：20180325)、總抗氧化能力試劑盒(T-AOC，批號：20180221)、谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒子(GSH-Px，批號：20180425)等均購自南京建成生物工程研究所。白介素-1β(IL-1β，批號：EK0394)、白介素-6(IL-6，批號：EK0411)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β，批號：EK0515)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α，批號：EK0527)檢測試劑盒等均購自博士德生物工程有限公司。

1.3 儀器 全波長酶標儀(Thermo Fisher Scientific公司)，紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)，HH-S8數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)，臺式高速離心機(長沙湘智離心機儀器有限公司)。

2 方法

2.1 分組、給藥及模型制備 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進行實驗，隨機分成正常對照組、模型組、葛根提取物高、中、低劑量組、聯(lián)苯雙酯組，每組10只。采取灌胃給藥，正常對照組和模型組灌胃等體積的生理鹽水。參考文獻劑量[5-6]，葛根提取物高、中、低劑量組給藥劑量為400、200、100 mg/kg，聯(lián)苯雙酯組給藥劑量為100 mg/kg。每天一次，連續(xù)進行14 d。末次給藥2 h后，除正常對照組外，其余各組小鼠按10 mL/kg的劑量腹腔注射0.2% CCl4橄欖油溶液，正常對照組注射等體積橄欖油。造模24 h后，小鼠后眼眶靜脈叢取血，頸椎脫臼處死，剝離肝臟。

2.2 指標檢測 血液室溫靜置1 h后，3000 r/min離心10 min，分離血清，按試劑盒檢測方法分別檢測血清中ALT、AST、TBA、TBIL、ALP、γ-GT的含量；取同部位肝組織，加入預(yù)冷后的生理鹽水，冰上進行勻漿，3500r/min離心10 min，吸取上清液，按試劑盒的檢測方法分別檢測肝組織中的SOD、MDA、T-AOC、GSH-Px、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α的含量。

3 結(jié)果

3.1 各給藥組小鼠血清中ALT、AST含量變化 與正常對照組比較，造模后，模型組小鼠血清中ALT、AST含量顯著性增高(P<0.01)；與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠血清中ALT、AST含量顯著性降低(P<0.05或0.01)。結(jié)果見表1。

表1 各給藥組小鼠血清中ALT、AST含量變化

3.2 各給藥組小鼠血清中TBA、TBIL含量變化 與正常對照組比較，模型組小鼠血清中TBA、TBIL含量顯著性增高(P<0.01)；與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠血清中TBA、TBIL含量顯著性降低(P<0.05或0.01)。結(jié)果見表2。

表2 各給藥組小鼠血清中TBA、TBIL含量變

3.3 各給藥組小鼠血清中ALP、γ-GT含量變化 與正常對照組比較，模型組小鼠血清中ALP、γ-GT含量顯著性增高(P<0.01)；與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠血清中ALP、γ-GT含量顯著性降低(P<0.05或0.01)。結(jié)果見表3。

表3 各給藥組小鼠血清中ALP、γ-GT含量變化

3.4 各給藥組小鼠肝組織中SOD、MDA含量變化 與正常對照組比較，模型組小鼠肝組織中SOD含量顯著性降低(P<0.01)，MDA含量顯著性增高(P<0.01)；與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中SOD含量顯著性升高(P<0.05或0.01)，MDA含量顯著性降低(P<0.05或0.01)。結(jié)果見表4。

表4 各給藥組小鼠肝組織中SOD、MDA含量變化

3.5 各給藥組小鼠肝組織中T-AOC、GSH-Px含量變化 與正常對照組比較，模型組小鼠肝組織中T-AOC和GSH-Px顯著性減低(P<0.01)；與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中T-AOC和GSH-Px顯著性升高(P<0.05或0.01)。結(jié)果見表5。

表5 各給藥組小鼠肝組織中T-AOC、GSH-Px含量變化

3.6 各給藥組小鼠肝組織中IL-1β、IL-6含量變化 與正常對照組比較，模型組小鼠肝組織中IL-1β和IL-6含量顯著性升高(P<0.01)；與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中IL-1β和IL-6含量顯著性降低(P<0.05)。結(jié)果見表6。

表6 各給藥組小鼠肝組織中IL-1β、IL-6含量變化

3.7 各給藥組小鼠肝組織TGF-β、TNF-α含量變化 與正常對照組比較，模型組小鼠肝組織中TGF-β和TNF-α含量顯著性升高(P<0.01)；與模型組比較，葛根提取物高、中、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠肝組織中TGF-β和TNF-α含量顯著性降低(P<0.05或0.01)。結(jié)果見表7。

表7 各給藥組小鼠肝組織TGF-β、TNF-α含量變化

4 討論

正常情況下，ALT和AST主要存在肝細胞當中，當肝細胞受損或者發(fā)生變性壞死時，二者就會釋放入血，引起血液中含量升高。此外，當肝臟發(fā)生損傷或者病變時，血液中TBA、TBIL、ALP、γ-GT含量也會顯著升高。因此，ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT均是反映肝細胞損傷程度，評價肝功能的重要指標[7-8]。實驗結(jié)果顯示，葛根提取物能夠降低血清中升高的ALT、AST、TBA、TBIL、ALP和γ-GT的含量。提示葛根提取物具有保肝作用。

脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、炎癥反應(yīng)是急性肝損傷發(fā)生的重要機制之一[9-10]。抗脂質(zhì)過氧化，減輕炎癥反應(yīng)能有效的緩解肝損傷。SOD和GSH-Px是體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)中重要的兩種抗氧化酶，起到保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用，其含量的多少反映了體內(nèi)抗氧化能力的高低。MDA作為脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物之一，容易導(dǎo)致細胞的變性壞死，其含量高低可以反映體內(nèi)過氧化損傷程度。實驗結(jié)果顯示，葛根提取物能提高肝組織中T-AOC、SOD、GSH-Px含量，降低MDA含量，提示葛根提取物具有較好的抗脂質(zhì)過氧化作用。IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β是體內(nèi)重要的細胞因子，正常情況下，其含量處于較低水平。當體內(nèi)受到危險因素攻擊時，其表達升高，則會引發(fā)炎癥反應(yīng)，引起肝細胞的壞死，誘導(dǎo)肝實質(zhì)細胞凋亡。實驗結(jié)果顯示，葛根提取物能降低肝組織升高的IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α含量，提示葛根提取物具有抗炎作用。

綜上，葛根提取物對CCl4致小鼠急性肝損傷具有較好的保護作用，其機制可能與抗脂質(zhì)過氧化、抗炎相關(guān)。