鐵皮石斛多糖軟膏制備工藝及其質量標準研究

朱朋艷 喬 妙 劉海楊 張瑩霜 朱強強 袁文娟1,* 王宣軍1,

1.云南農業(yè)大學 普洱茶學教育部重點實驗室，昆明 云南 650201；2.云南農業(yè)大學理學院，昆明 云南 650201；3.云南農業(yè)大學食品科學技術學院，昆明 云南 650201

鐵皮石斛是蘭科草本植物，集藥用、食用、美容于一身的名貴中藥材，可單方和配伍使用，與“雪蓮、人參、首烏、茯苓、野靈芝、珍珠、冬蟲夏草、蓯蓉”并稱為中華九大仙草[1]，主要分布在我國安徽、浙江、福建、云南等地[2]。目前，鐵皮石斛收載于《中國藥典》2020年版一部，具有益胃生津，滋陰清熱之功效。用于熱病津傷，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨痿軟[4-5]。文獻[3]報道其主要成分包括多糖、生物堿、聯(lián)芐類、菲類化合物、黃酮類物質、氨基酸及微量元素等，其中鐵皮石斛多糖類物質占41.1%[6]，除了增強免疫力和抗腫瘤作用外[7-8]，還具有清除自由基和抗脂質過氧化作用[9]、保濕[10]以及抑菌消炎等護膚功效[11]，可用于化妝品的開發(fā)[12-14]。

軟膏劑是皮膚科常用制劑之一，具有良好的附著性、涂展性，使用方便，安全可靠[15]。本文利用鐵皮石斛多糖為原料，以PEG400和PEG3350為基質，制備含鐵皮石斛多糖的軟膏，建立其質量控制方法，并對藥物的穩(wěn)定性進行了考察，為鐵皮石斛多糖應用于化妝品提供前期基礎。

1 儀器與材料

1.1 材料 鐵皮石斛多糖(批號20190427，實驗室自制)、PEG400(山東優(yōu)索化工科技有限公司)、PEG3350(北京索萊寶科技有限公司)、硬脂醇(化妝品級)、甘油(北京索萊寶科技有限公司)、無水葡萄糖(分析純)、苯酚(分析純)、濃硫酸(分析純 重慶川東化工有限公司)、三乙醇胺(分析純)、苯氧乙醇(日化級)、薄荷油(日化級)；其他輔料均為藥用規(guī)格或分析純。

1.2 儀器 HITACHI/U-2910紫外分光光度計(天美中國科學儀器有限公司)，PHS-2F型pH計(上海力辰儀器科技有限公司)，HH-ZK4恒溫水浴鍋(鞏義市予華儀器有限責任公司)，BSA224S-CW電子天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司)，SIGR/3-18KS離心機(北京科譽興業(yè)科技發(fā)展有限公司)，KBF-P240恒溫恒濕箱(德國BINDER)。

2 方法與結果

2.1 軟膏劑所用基質配比的研究

2.1.1 外觀性狀檢測標準 軟膏劑應均勻，細膩，具有適當的黏稠性，宜涂布于皮膚上或黏膜上并且無刺激性。均勻性是指取軟膏約 1 g，置于表面光潔的玻璃板中間，小心再蓋上同樣大小的玻璃板，夾緊四周，對著日光觀察，應無顆粒狀，色澤均勻、細膩。

2.1.2 pH值測定 將1 g軟膏稀釋至10 mL去離子水中，用PHS-2F型pH計測量pH值。根據中國藥典二部附錄ⅥH規(guī)定的乳劑型基質pH要求，W/O型乳劑基質pH應小于8.5，由于此次配制的鐵皮石斛軟膏劑用于體表的涂抹，其基質pH值應與人體組織液pH值(7.0～7.4)相符合，故進行軟膏劑配方篩選pH值應控制在7.0 ～ 7.4內。

2.1.3 黏度測定 使用NDJ-1型旋轉黏度計，檢測軟膏劑的黏度。鐵皮石斛多糖軟膏用體表的涂抹，適宜黏度控制在102～105 mpas范圍內。

2.1.4 軟膏基質配比 選擇改變PEG400和PEG3350的配比，按“2.2”項下軟膏劑的制備方法制備。按上述檢測方法檢測軟膏劑的各項指標。由表1所給出各組軟膏劑各項指標結果，可知當兩者比例為2∶1時，軟膏黏度適宜，易于涂抹，因此確定該比例用于軟膏的制備。

表1 軟膏制備各項指標

2.2 軟膏的制作 主藥：鐵皮石斛多糖濃縮粉；油相：PEG3350、PEG400、硬脂醇；水相：甘油、0.1%苯氧乙醇、0.02%三乙醇胺、0.5%薄荷腦、純化水(自制)。在70 ℃恒溫水浴條件下，將油相緩慢的加入水相中，以乳化機均質乳化1 h后，以少量多次的方式加入鐵皮石斛多糖濃縮粉，攪拌至多糖完全溶解，充分攪拌均勻，紫外滅菌2h分裝，即得，成品如圖1所示。所得多糖軟膏，質地細膩，涂展性好，稠度適宜，氣味清香。

圖1 鐵皮石斛多糖軟膏成品圖

2.3 軟膏多糖含量的測定

2.3.1 葡萄糖標準曲線的繪制 精密稱取105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖0.0010 g至10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，制成100 μg/mL溶液儲備液。分別精密量取對照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于具塞試管中，各自加水補至 1 mL，精密加入1 mL 5%苯酚(現配現用)，搖勻，再精密加入5 mL濃硫酸，搖勻，置沸水浴 30 min，取出放至室溫，于488 nm波長測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得標準曲線方程為：y=0.0101x+0.0971，r2=0.9997。如圖2所示測定的吸光度與葡萄糖濃度呈良好的線性關系。

圖2 葡萄糖標準曲線

2.3.2 穩(wěn)定性試驗 取本品約1g(批號：20201223)，精密稱定，于25 mL量瓶中，分別加乙醇20 mL，使完全溶解，加水定容至刻度，冷藏30 min 后，全部置于離心管中，10000 rpm離心 20 min，小心棄去上清液，沉淀加水溶解后，少量多次轉移至100 mL容量瓶加水定容至刻度，搖勻；精密量取1 mL置于具塞試管中，精密加入1 mL 5%苯酚(現配現用)，搖勻，再精密加入5 mL濃硫酸，搖勻，置沸水浴30 min，取出，放冷至室溫，置紫外分光光度計488 nm 波長測定吸光度值。結果RSD為3.4%，表明樣品溶液在24 h內穩(wěn)定。結果見表2。

表2 穩(wěn)定性試驗

2.3.3 重復性試驗 分別同一批號軟膏樣品(批號20201223)約1.000 g，6份，精密稱定，置 25 mL 容量瓶中，分別加乙醇20 mL，使完全溶解，其余操作同“2.3.2”項下，置紫外分光光度計488 nm波長測定吸光度值；計算DOP多糖含量平均值為4.7 mg/g；RSD為4.37%(n=6)，重復性實驗符合要求。結果見表3。

表3 重復性試驗 (n=6)

2.3.4 回收率試驗 取同一批號軟膏樣品(批號：20201223)約0.500 g，6份，精密稱定，置25 mL容量瓶中，精密加入1 mg/mL葡萄糖對照品溶液(2.5 mL)，氮氣流下吹干，加20 mL乙醇，使完全溶解，其余操作同“2.3.2”項下，置紫外分光光度計488 nm 波長測定吸光度值；測得DOP多糖平均含量為107.8%，RSD為2.09%(n=6)表明該法回收率較好，符合要求。其結果見表4。

表4 回收率試驗 (n=6)

2.4 軟膏的穩(wěn)定性考察

2.4.1 加速試驗 取3批鐵皮石斛多糖軟膏樣品(批號：20201103、20201107、20201113)置于恒溫恒濕加速箱中，分別進行高溫(60±2℃)、高濕(相對濕度90%±5%)和強光照射試驗(人工光源；強度：4500±500lx)，于0 d、5 d、10 d取樣進行測定DOP多糖含量測定。如圖3所示，測定結果表明在高溫、強光、高濕條件下，鐵皮石斛多糖軟膏中的含量無明顯差異，表明該軟膏具有較好的穩(wěn)定性。

圖3 不同條件下鐵皮石斛軟膏中多糖的穩(wěn)定性

2.4.2 長期試驗穩(wěn)定實驗 制備3批鐵皮石斛多糖軟膏(批號：20201103、20201107、20201113)置于恒溫恒濕箱中進行加速試驗，溫度為30 ±2 ℃、相對濕度為65%±5%放置3個月，于0 d、30 d、60 d取樣測定DOP含量，結果表明在該實驗條件下，含量測定結果無明顯差異，表明軟膏該較穩(wěn)定。其結果如圖4所示。

圖4 高溫高濕下鐵皮石斛軟膏中多糖的穩(wěn)定性

3 討論

本研究以制劑外觀性狀、穩(wěn)定性、pH、黏度及有效成分含量等作為考察指標，對制劑工藝的輔料等進行篩選，得到DOP軟膏的最佳制備工藝條件；繼而采用加速實驗及穩(wěn)定性實驗考察制備所得軟膏的穩(wěn)定性。

3.1 檢測波長的確定 鐵皮石斛多糖在濃硫酸的作用下，水解、脫水成糖醛衍生物，與苯酚縮合成有色化合物，在488 nm處有最大吸收，吸收度與濃度成線性關系，可用于定量測定。

3.2 基質的選擇 制備鐵皮石斛多糖軟膏時，考慮以PEG為基質的軟膏成分簡單，且操作方便。PEG穩(wěn)定、不易變質，即使在高溫狀態(tài)也較穩(wěn)定，且是良好的保濕劑。PEG3350水溶性好，比傳統(tǒng)的油脂基質刺激??；且石斛多糖在這兩種基質中有較好的溶解度；選用這兩種基質制作的軟膏具有良好的附著性、涂展性，使用方便，安全可靠。

3.3 pH的確定 研究中發(fā)現，當多糖軟膏pH在6～8之間時，多糖含量具有較好的穩(wěn)定性。pH較低或較高時，DOP含量會隨之降低；考慮在酸性條件下，多糖容易發(fā)生水解反應；在堿性條件下，多糖可能存在烯醇化、異構化反應。且此次制備的鐵皮石斛軟膏用于體表的涂抹，其pH應與人體組織液的pH相近，因此，研究加入三乙醇胺調節(jié)軟膏pH至7.0～7.5之間。

鐵皮石斛多糖軟膏最初的成品存在DOP分散不勻、顆粒較粗的現象，直接影響藥物的吸收效果。故在制備時將DOP加少量乙醇溶解后配制，取得了較好的效果。成品均勻、細膩、無顆粒感。在處方中加入甘油起保濕作用，同時也有一定的防腐作用，保證了藥品質量。此次研究制備的鐵皮石斛多糖軟膏，提供一種抑菌、抗氧化的護膚軟膏，便于人們使用；并以鐵皮石斛多糖含量作為此軟膏劑的質量檢測指標，采用分光光度法對其進行含量測定，快速準確，重現性好，為鐵皮石斛軟膏質量控制提供了有效的方法。