消痔洗劑提取工藝研究

丁美林 宗 陽 徐玲玲 周建華 蔣 勇 江建國*

1.江蘇省如東縣中醫院，江蘇 如東 226400；2.蘇州市中醫院，江蘇 蘇州 215000；3.上海中醫藥大學，上海 200120

消痔洗劑為江蘇省如東中醫院的外用經驗方，由黃柏、虎杖、敗醬草、魚腥草等六味藥組成，具有清熱利濕解毒、散瘀止痛、去腐消腫的功效，臨床用于肛腸病術后創面疼痛、出血、肛緣水腫、創面恢復。經多年臨床應用并驗證，該洗劑使用方便、療效良好，尚未發現明顯不良反應，年使用量大于12000瓶。方中黃柏為君藥，魚腥草為臣藥?，F代藥理研究[1-3]表明黃柏對皮膚有抗菌、抗炎、抗氧化等作用，其中鹽酸小檗堿抗炎作用研究較多。魚腥草揮發油是發揮抗炎、抗菌作用重要成分[4-5]。

研究根據《中國藥典》(2020年版)四部項下揮發油測定法[6]，以揮發油提取體積、提取量為考察指標，通過單因素考察，確定魚腥草揮發油最佳提取工藝。水提取工藝提取，根據處方分析以君藥黃柏中鹽酸小檗堿為指標成分，采用高效液相色譜法(HPLC)法結合正交試驗，以鹽酸小檗堿含量、干膏率的綜合評價為指標，考察加水量、煎煮時間、煎煮次數對消痔洗劑指標成分含量的影響，優選出最佳提取工藝，以期為醫院制劑的質量控制和制備工藝提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20AT島津高效液相色譜儀(日本島津公司)；AE-240電子分析天平(上海賽多利斯科學儀器有限公司)；QCD3120超聲波清洗器(天津旗美科技有限公司)；HN101-1A鼓風干燥箱(南通滬南科學儀器有限公司)；HH-S2數顯恒溫水浴鍋(常州國宇儀器制造有限公司)。

1.2 材料 鹽酸小檗堿(批號：110713-202015，中國食品藥品鑒定研究院)。高效液相色譜所用試劑為色譜純，水為去離子水，其他試劑為分析純。所用中藥飲片均購自南通市三越飲片有限公司，并由本院主任中藥師鑒定。

2 方法與結果

2.1 魚腥草揮發油的提取

2.1.1 浸泡時間與吸水率的考察 稱取處方量藥材2份，置于燒杯中，分別加入12倍量的水，用保鮮膜封住燒杯口，分別在室溫下靜置0.5、1、1.5、2、2.5、3 h，并稱量重量，每次分別倒出被藥材吸收剩下的藥液體積，計算吸水率[7]，最終確定藥材的浸泡時間為2 h，藥材吸水率為393%。

2.1.2 加水量的考察 取4份藥材，分別加入10、12、14、16倍處方量水，浸泡2 h后，加熱提取5 h，收集揮發油，計算揮發油提取率，確定加水量為14倍處方量。結果見表1。

表1 魚腥草加水量的考察

2.1.3 提取時間的考察 取4份藥材，分別加入14倍處方量水，浸泡2 h后，分別加熱提取揮發油3、4、5、6 h，收集揮發油，計算魚腥草揮發油提取率，確定提取時間為5 h。結果見表2。

表2 魚腥草提取時間的考察

2.1.4 驗證試驗 對魚腥草浸泡時間、加水量、提取時間進行考察，最終確定魚腥草揮發油提取工藝，即加入14倍處方量的水，浸泡2 h，提取 5 h。按照確定最佳提取工藝，稱取3份魚腥草平行操作，結果表明此工藝合理可行，具有較好的穩定性。結果見表3。

表3 揮發油提取工藝的驗證試驗

2.2 水提取工藝優選

2.2.1 浸泡時間與吸水率的考察 稱取處方量藥材，置于燒杯中，分別加入7倍量的水，用保鮮膜封住燒杯口，分別在室溫下靜置0.5、1、1.5、2、2.5、3 h，量取體積，稱取重量，計算吸水率，最終確定浸泡時間為1.5 h，藥材吸水率為156%。

2.2.2 溶液配制 對照品溶液：精密稱取鹽酸小檗堿10.26 mg，用流動相溶液定容于10 mL容量瓶，即得。

供試品溶液的制備：按處方量稱取藥材，加入8倍量的水，浸泡2 h，煎煮1 h后，精密吸取10 mL提取液，水浴蒸干后，用流動相定容10 mL容量瓶中，即得。

陰性供試品溶液的制備：按處方量稱取除黃柏外的藥材，按“供試品溶液”項下的方法制備，即得。

2.2.3 色譜條件 色譜柱：Inertrustain C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(每100 mL加入十二烷基硫酸鈉0.1 g)，柱溫30 ℃，流速1 mL/min；對照品進樣量5 μL，供試品進樣量20 μL。

2.2.4 專屬性 分別吸取對照品溶液、供試品溶液、缺黃柏的陰性供試品溶液，按色譜條件進樣分析，陰性供試品溶液在對照品相應位置無吸收，表明鹽酸小檗堿無陰性干擾。色譜圖見圖1。

圖1 消痔洗劑中鹽酸小檗堿的色譜圖

2.2.5 線性關系考察 精密量取適量的對照品溶液，加入流動相進行稀釋至123.39、105.76、83.76、70.51、52.88、32.25、17.63 μg/mL的濃度對照品溶液。分別吸取各濃度的對照品溶液 5 μL，注入高效液相色譜儀中測定。得到現性方程為y=2440.76x+44273，(r=0.999)，鹽酸小檗堿在17.63～123.39 μg/mL間現性關系良好。

2.2.6 精密度實驗 精密吸取同一對照品溶液，按色譜條件進樣檢測，重復測定6次，以峰面積計算，RSD為0.06%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 重復性實驗 取同一批樣品，按“供試品溶液”制備方法平行制備6份，按色譜條件進樣檢測，測定鹽酸小檗堿含量的RSD為0.91%(n=6)，表明該方法重復性良好。

2.2.8 穩定性實驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h分別進樣，測定色譜峰面積，RSD為0.11%，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.2.9 加樣回收率 精密吸取已知含量的同一批供試品溶液共6份，加入適量鹽酸小檗堿對照品溶液，按“供試品溶液”制備方法制備供試品溶液，測定鹽酸小檗堿的含量，平均回收率為101.98%，RSD為1.59%(n=6)。

2.3 正交試驗 試驗根據臨床用藥方法，確定采用水提方法進行提取，影響水提主要因素為A加水量(倍)、B煎煮時間(h)、C煎煮次數(次)。采用L9(34)正交試驗設計優選最佳提取工藝參數。因素與水平見表4，正交試驗結果見表5，方差分析見表6。

表4 因素水平表

表5 正交試驗設計及結果

續表5

表6 方差分析結果

分析表明，在中藥水提過程中，煎煮時間為顯著性影響因素(P<0.05)，可根據生產實際情況適當調整。因此本實驗結果表明正交試驗優選的最佳提取工藝為A3B2C2，即加12倍量的水，煎煮1.5 h，提取2次。

2.4 驗證試驗 稱取與正交試驗等量飲片3份，按優選的提取工藝提取，結果見表7，表明優化水提工藝提取率較高，工藝穩定。

表7 水提取工藝的驗證試驗

3 討論

肛腸疾病的基本病因病機一般受風濕熱燥等外邪的作用、情志內傷、飲食起居等因素的影響，濕熱下注于大腸，經絡阻滯，氣血不暢，淤血濁氣留滯肛門大腸而衍生諸多病癥[8-9]。西醫治療多采用高錳酸鉀等坐浴方式，但治療效果并不理想[10]。消痔洗劑為如東縣中醫院肛腸科臨床經驗方，具有清熱利濕解毒、散瘀止痛、去腐消腫等功效，臨床上有消除痔瘡炎癥腫脹脫出、嵌頓、抗菌等作用，促進痔瘡術后創面愈合作用，臨床使用超過十年，臨床研究[11-12]表明患者使用效果良好，值得應用推廣，表明該制劑制備工藝可以深入開發。

采用單因素試驗考察揮發油提取工藝時，曾考察魚腥草、敗醬草、魚腥草和敗醬草三組揮發油提取，在實驗的1 h內可清晰看到魚腥草黃色揮發油，而敗醬草在實驗的4 h后看到少量的聚集物顯紅色，且聚集物呈白色無定形粉末狀漂浮于油面，敗醬草的揮發性成分極其少。魚腥草和敗醬草共同提取得到棕紅色的揮發油且油內夾雜著白色無定形粉末。實驗采用的敗醬草為黃花敗醬草，現代研究[13]表明，黃花敗醬草雖含揮發性成分，但未發現相關大量的研究敗醬草中揮發油，且藥理作用尚未清晰，加之黃花敗醬草提取出難容于水油的白色粉末狀物質[14]，為不影響后期的實驗研究，本實驗去除黃花敗醬草的揮發性成分提取。最終確定魚腥草揮發油提取工藝加入14倍量的水，浸泡2 h，提取5 h，該工藝合理可行。

黃柏為方中君藥，具有瀉火解毒，清熱燥濕，除骨蒸、退虛熱等功效，其化學成分主要有生物堿類、酚酸類、黃酮類、多糖類等，具有抗菌、抗炎、消腫、止痛等藥理作用[15-16]。水提工藝考察過程中，根據處方分析，將君藥黃柏中鹽酸小檗堿、干膏率作為考察指標[17-18]，設計正交試驗。參照文獻[19-20]對色譜條件多次考察，最終確定色譜條件參照2020版《中國藥典》一部黃柏項下含量測定[21]，實驗表明該色譜條件分離度良好，陰性供試品對本法測定無干擾。最終確定水提工藝為加入12倍量的水，浸泡1.5 h，提取1.5 h，煎煮2次，該工藝穩定可行。

綜上所述，消痔洗劑的提取工藝分兩步提取。第一步考察魚腥草揮發油提取工藝，由于魚腥草揮發油抗菌抗炎活性較好[22-23]，增強消痔洗劑抗菌抗炎效果，將魚腥草揮發油充分得到應用。第二步考察魚腥草藥渣、黃柏、虎杖、芒硝、敗醬草等中藥的提取工藝，采用水提工藝合理可行。結果表明消痔洗劑提取工藝合理穩定可行，后續開發將繼續按照外用中藥洗劑的要求，結合現代化技術對該洗劑進一步考察開發。