針刺抗抑郁動物模型使用規律探討

高 靜 寧百樂 符文彬

1.河南中醫藥大學第一附屬醫院康復中心，河南 鄭州 450000；2.廣州中醫藥大學第二臨床醫學院，廣東 廣州 510120；3.廣東省中醫院大針灸科，廣東 廣州 510120

抑郁障礙是指各種原因引起的以顯著而持久的心境低落為主要臨床特征的一類心境障礙，是最常見的精神障礙之一[1]。據世界衛生組織在2017年發布的調查報告顯示，全球抑郁障礙病人約有3.22億，患病率為4.4%[2]。中國精神衛生調查最新公布，我國抑郁障礙患病率發病率達6.8%[3]。據預測，到2030年抑郁障礙造成的疾病負擔將位居全球疾病負擔之首[4]。抑郁障礙已經成為全球研究熱點[5]，針刺作為一種中醫傳統治療方法，自古以來對抑郁障礙的治療上顯示出較好的療效[6-9]。近年來，針刺抗抑郁的機制研究日益豐富[10-12]，抑郁障礙動物模型作為載體在其相關研究中廣泛應用[13-14]。本文研究了近二十年來應用抑郁動物模型的針刺抗抑郁文獻，對抑郁模型使用規律進行探討，為以后針刺抗抑郁基礎研究提供借鑒。

1 研究方法

1.1 檢索策略 檢索式：中文以“抑郁癥”“抑郁障礙”“郁證”為主題詞或關鍵詞進行第一次檢索，再以“針刺”為主題詞或關鍵詞進行第二次檢索。英文以“depression”“acupuncture”為檢索關鍵詞檢索；文獻數據庫：中文數據庫為中國生物醫學文獻數據庫(CBM)、中國學術期刊全文數據庫(CNKI)、中文科技期刊數據庫(VIP)，外文(語言限制為英文)：Pubmed數據庫。檢索時間范圍2000年至2020年。

1.2 納入文獻篩選 檢索后對文獻進行手工篩選，剔除臨床研究、個案報道、綜述等，以抑郁動物模型為研究對象的針刺抗抑郁研究作為最終篩選目標(不包含抑郁共病模型的相關研究，如卒中后抑郁、產后抑郁等)。文獻篩選由兩位研究人員同時進行，以免漏選或多選。

1.3 統計分析 將符合要求的文獻建立數據庫，對模型的運用規律如模型類別、動物使用、造模時長、造模方法等進行統計分析。

2 研究結果

根據上述關鍵詞，共檢索出2701篇相關文獻。對文獻進行閱讀篩選，剔除臨床研究、綜述、個案報道等，共篩選出162篇運用抑郁動物模型的針刺抗抑郁相關文獻，共包含165項實驗。

2.1 抑郁模型類別 研究結果顯示，在165項實驗中涉及的動物模型共有11種，包括慢性不可預知溫和應激模型(CUMS)、慢性不可預知應激模型(CUS)、慢性束縛應激模型(CRS)、強迫游泳應激模型(FST)、母嬰分離模型(MS)、習得性無助模型(LH)、藥物誘導抑郁模型，其他類別的模型還有社會孤立模型、WKY模型、浸水模型等。

2.2 抑郁模型使用情況 研究結果顯示，納入的研究中，應用CUMS模型的研究118項，CUS模型的研究11項，CRS模型的研究10項，FST應激模型的研究7項；MS抑郁模型的研究5項；LH模型的研究4項；藥物誘導抑郁模型的研究5項。見表1。

表1 各類抑郁模型使用頻次表

2.3 各種抑郁模型的造模時長分析 研究結果顯示，CUMS模型造模時長多為21 d，最長為60 d；CUS模型造模時長多為21 d；CRS模型造模時長多為21 d；FST應激模型造模時長為2 d；MS抑郁模型造模時長為5 d；LH模型造模時長多為7 d；藥物誘導抑郁模型造模時長則小于2 d。見表2。

表2 各種抑郁模型造模時長分布表/項

2.4 抑郁模型動物使用情況 研究結果顯示，研究中所使用的動物主要為大鼠、小鼠，其中使用大鼠的研究占96.97%，使用小鼠的研究占3.03%；動物種屬涉及SD大鼠、Wistar大鼠、C57BL/6小鼠、B ALB/C小鼠、昆明小鼠等。在動物性別的選擇方面，使用雄性動物的研究占86.67%，使用雌性動物的研究占1.21%，使用雌雄各半動物的研究占12.12%。見表3、4。

表3 各種抑郁模型動物種屬的選擇 [例(%)]

表4 抑郁模型動物性別使用分布情況 [例(%)]

2.5 各種抑郁模型造模方法分析

2.5.1 CUS模型 CUS模型是通過較長時間給予動物不同的刺激因子，而造成對其的長期壓力。在使用CUS模型的研究中，使用頻次較高的刺激因子為禁水、冰水游泳、晃籠、晝夜顛倒、禁食、熱應激、夾尾等。其中，50%的研究聯合孤養方法。見表5。

表5 CUS造模應激項目頻次表

續表5

2.5.2 CUMS模型 CUMS模型是使用頻率最高的抑郁模型。CUMS模型是由CUS模型改良而成，是通過每日給予動物不同的較溫和的刺激因子，從而造成對動物的長時間壓力。具體的造模方法為，使用7～10種刺激因子，每日1～2種，為避免適應性，隨機分配刺激因子，至少連續兩日內的應激不重復，持續應激21 d或更長時間。將118項使用CUMS造模的研究中所使用的刺激因子進行頻次分析，其中禁水、禁食、夾尾、冰水游泳、晝夜顛倒、晃籠、束縛、熱應激、潮濕墊料、電擊足底等10項刺激因子有較高頻次出現。另外，65.25%的研究還聯合孤養的方法。見表6，圖1。

表6 CUMS造模應激項目頻次表

續表6

圖1 CUS/CUMS模型構建過程模式圖

2.5.3 CRS模型 CRS模型是將束縛作為單一刺激因子，經過較長時間刺激構建而成。在使用CRS模型的研究中，80%的研究造模時聯合孤養方法。該模型構建的具體方法為，每日將動物放置在一定大小的瓶子或金屬網袋內，以限制其活動，每日刺激4 h，連續進行28 d。如圖2所示。

限制行為，每日4 h,持續28 d圖2 CRS模型構建模式圖

2.5.4 FST應激模型 FST應激模型屬行為絕望模型的一種。其操作方法為，先將動物放進一定規格的容器內進行適應性訓練15 min，使其適應環境并誘導絕望行為，24 h后進行正式實驗，持續6 min游泳，觀察期間動物的不動時間，不動時間代表了動物的絕望行為的持續時間。如圖3所示。

圖3 FST應激模型構建模式圖

2.5.5 MS抑郁模型 MS抑郁模型是將出生不久的幼鼠與其母鼠分離，等其成熟后，而出現快感缺失、活動減少、興趣降低等抑郁樣行為。具體操作方法為，在幼鼠出生15 d后，將其與母鼠分離孤養一段時間，通過行行為學檢測其抑郁樣行為。

2.5.6 LH模型 當機體遭受到不可逃避的厭惡性刺激(如足電休克)時，會產生一種絕望行為，表現為對刺激的不再逃避，即使在可逃避的環境下也呈現出逃避行為障礙及自發活動減少。LH模型既是根據該原理構建的，具體操作方法為，將動物置于不可逃避的籠內給予不可預知的電擊刺激，持續2～3 d后，將其置于可逃避的籠內再次給予電刺激時，動物出現逃避不能的行為，其中逃避延遲時間和成功逃避次數代表了其抑郁樣行為。

圖4 LH模型構建模式圖

2.5.7 藥物誘導抑郁模型 藥物誘導抑郁模型時通過給藥，而誘發動物的抑郁樣行為。常運用的藥物有LPS、皮質醇、利血平等，給藥方式有腦立體定位注射、腹腔注射等。

3 討論

研究結果顯示，在針刺抗抑郁的研究中，較為常用的動物模型有CUMS模型、CUS模型、CRS模型、FST應激模型，其中CUMS、CUS、CRS模型的造模時間在21 d以上，而FST應激模型造模時長為2 d。在抑郁動物模型的相關研究中，CUMS模型亦是目前應用最廣泛的研究，該模型源于Katz提出[15]的CUS模型，后由Willner改良而成[16]，很好地模擬了抑郁障礙發生發展的過程[14]。其優點在于多種應激因子交替出現，可避免動物習慣。而CRS模型與CUMS、CUS模型同樣為慢性抑郁模型，造模時長較長，但較兩者刺激因子單一，有造模簡便的優點，亦為當前研究中常用模型[17]。FST應激模型與懸尾實驗(Tail suspension test)一樣，均屬行為絕望模型，該模型造模時長短，操作簡便，在快速抗抑郁的藥理研究中常用[18]。MS抑郁模型、LH模型和藥物誘導抑郁模型在針刺抗抑郁中較少使用。另外，抑郁模型還有嗅球切除抑郁模型、轉基因動物模型等，但在針刺抗抑郁研究中使用較少。隨著抑郁相關基因的發現，遺傳學及表觀遺傳學的發展，轉基因動物將成為針刺抗抑郁研究的重要載體。

各類抑郁模型中動物的使用上，鼠類是最常使用的動物，以SD雄性大鼠最為常用，未涉及鳥類、豬、雞等動物的使用。不同的模型所使用的動物具有選擇性，不同種動物對造模的效果影響較大[14]。因大鼠行為表現多樣，情緒反應敏感，常用以高級神經活動的研究[19]。但在不同的種屬的選擇上亦應注意，應參考既往研究來確定動物的種屬。同時，性別是抑郁障礙的發生重要的影響因素[3,20]。其中，雌性動物存在明顯的生理周期，由于機體激素水平的波動性變化，可能會對造模的效果產生一定的影響[21]。因此，多選用雄性動物進行實驗，可避免性別及生理周期因素的影響，以保證模型的穩定性和一致性。

在針刺抗抑郁的研究中，各類抑郁模型的造模方法大致保持可重復性，在較復雜的模型中有較多的可變空間。運用CUMS和CUS抑郁模型造模時，較多的研究參考Katz和Willner等人[15-16]的方法改良實驗方案，因而出現多種多樣的刺激因子。根據刺激因子出現的頻次所呈現的規律，至少約50%的研究中，使用了禁水、禁食、夾尾、冰水游泳、晝夜顛倒、晃籠、束縛、熱應激、潮濕墊料、電擊足底，這對今后的相關研究有參考意義。其他模型造模時涉及操作種類較少，因而在這些研究中造模方法一致性較好，便于重復。

針灸對抑郁障礙的治療在臨床上表現出有效、安全、綠色的優勢，揭示針刺抗抑郁的作用機制對指導針灸臨床具有重要意義。抑郁動物模型的應用，對于抑郁障礙分子機制的研究和針刺抗抑郁機制研究都有著至關重要的意義。當前，抑郁模型多種多樣，除上述幾種抑郁模型外，針刺的抗抑郁效應還應在更多種模型中得以驗證。另外，每種模型都有優點與適用范圍，同時也存在一定的缺點與不足。因此，應該根據研究目的以及實驗室的實際條件選擇合適的動物模型開展實驗。