性別、年齡、血脂和位置影響腸系膜淋巴細胞的組成和表型*

吳紫欣， 王 菲， 羅青青， 楊 平， 梁文龍， 魏建昌，李冠煒， 魏 芳， 曹 杰， 李旺林

（華南理工大學醫學院，廣東廣州 510006）

隨著人們對腸系膜解剖學及功能的認識，腸系膜逐漸被定義為一個新的、獨立的器官［1］。腸系膜是一種雙層皺褶腹膜，附著于腸道及腹腔內壁，從十二指腸延伸到直腸呈扇形展開，連續地連接著整個腸道，懸吊、固定大小腸于腹腔內以保證腸道的相對位置［1］。腸系膜由表面的間皮細胞、結締組織間隔及大量脂肪細胞群組成，脂肪組織通過表達被稱為脂肪因子的激素和介質參與調節代謝、炎癥和免疫功能［2-3］。腸系膜內除了有血管、淋巴管和神經纖維走行，也有較多淋巴結，與腸道建立了大量血液及淋巴液的交通，是收集腸道信息的最佳位置［1］，參與介導局部及全身反應。除淋巴管和淋巴結外，腸系膜脂肪細胞間也散在分布著免疫細胞，正常狀態下，腸系膜中有大量抑炎免疫細胞，包括M2型巨噬細胞和調節性T（regulatory T，Treg）細胞［4］。然而，腸系膜免疫微環境內淋巴細胞的組成和表型尚無文獻報道。

腸系膜作為腸道血液及淋巴液的輸送途徑，可參與多種腸道疾病，包括結直腸癌（colorectal cancer，CRC）和炎性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）等。許多腹腔內腫瘤，如卵巢癌［5］、子宮內膜癌［6］、胃癌［7］和胰腺癌［8］等都有轉移到腹膜的傾向，并且出現腹膜轉移的患者疾病進展快，預后非常差。此外，多個研究顯示脂肪組織尤其內臟肥胖顯著促進腫瘤進展［9-10］。同樣值得注意的是，腸系膜的臨床意義也不僅僅局限于腹部疾?。?1-12］。腸系膜是內臟脂肪的最大貢獻者［13］，它在肥胖、糖尿病和代謝綜合征等的病理生理過程中也發揮關鍵的作用［14-15］。因此，深入探究腸系膜免疫微環境具有重要的科學及臨床意義。

在本研究中，我們探討了腸系膜的免疫微環境，尤其是淋巴細胞的組成和表型及其影響因素，描繪了腸系膜淋巴細胞圖譜。我們觀察到腸系膜存在與外周血不同的特定免疫微環境，其內的免疫細胞主要由淋巴譜系組成，能在一定程度上發揮重要的免疫調節和細胞毒性等功能，同時性別、年齡、血脂和腸系膜位置影響腸系膜淋巴細胞的組成和表型，為探討腸系膜在多種疾病中的作用提供了參考資料。

材 料 和 方 法

1 新鮮腸系膜組織及外周血樣本

本研究收集了2018～2020 年間在廣州市第一人民醫院結直腸肛門外科接受手術的26 例CRC 患者的距腫瘤組織＞10 cm 的正常腸系膜新鮮組織（normal mesentery，NM）和其中13 例CRC 患者的術前外周血樣本以及所納入患者的臨床資料。所有患者均無乙肝病毒、梅毒和HIV 感染，無IBD 病史。廣州市第一人民醫院倫理審查委員會已通過本實驗方案，所有患者均簽署知情同意書。

2 方法

2.1 腸系膜組織及外周血樣本單細胞懸液的制備仔細分離并去除NM中的淋巴結與血塊，將剩余組織用PBS進行多次清洗，剪碎后轉入15 mL離心管并加入10 mL組織消化液（含1 g/L Ⅱ型膠原酶和1%BSA的DMEM/F-12培養液）在37 ℃條件下200 r/min 搖床震蕩30 min。消化結束后使用200 目尼龍網過濾未消化組織，收集濾液到新的離心管中，離心收集細胞沉淀。隨后加入2 mL 紅細胞裂解液重懸細胞，4 ℃孵育10 min后加滿PBS，離心收集細胞沉淀并進行活細胞計數。2 mL外周血離心去除血清后與生理鹽水1∶1 混合稀釋，在離心管下層加入3 mL 人淋巴細胞分離液，外周血稀釋液沿傾斜的管壁慢慢加到人淋巴細胞分離液上層，室溫800×g離心20 min。仔細收集中間白膜層，即外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）于新離心管中，PBS洗滌后離心收集細胞沉淀并進行活細胞計數。

2.2 流式細胞術 NM 和PBMCs 的單細胞懸液首先與野生型小鼠血清孵育進行封閉，并在4 ℃條件下與流式抗體（信息見表1）混合液孵育20 min。孵育結束后加滿PBS 洗滌去除未與抗原結合的流式抗體，離心收集細胞沉淀，隨后將細胞重懸至300 μL并使用200 目尼龍網濾到流式管中，加入6 μL DAPI 染色液后，使用流式細胞分析儀檢測熒光表達。

表1 流式細胞術的抗體信息Table 1. Antibody information for flow cytometry

2.3 t 分布隨機近鄰嵌入（t-distributed stochastic neighbor embedding，t-SNE）算法分析多參數流式細胞術數據 在FlowJo 軟件中分別從PBMCs 和NM 的CD45+單個核細胞（mononuclear cells，MNCs）進門后，導出包含各個通道熒光信號值的表達矩陣。分別從PBMCs 和NM 的矩陣中隨機選擇10 000 個CD45+MNCs，在R3.5.3軟件中將它們合并成一個矩陣。使用Seurat 包（版本3.1.5）NormalizeData 函數中的“CLR”算法對表達矩陣的每個通道的熒光表達值進行標準化。使用Seurat 包的RunTSNE 函數對標準化后的表達矩陣進行t-SNE 降維分析，并通過FindNeighbors 與FindClusters 函數進行細胞的聚類和分群，隨后基于每個通道的表達分布情況對不同的細胞亞群進行鑒定。用同樣的方法分別從PBMCs和NM的T細胞或B細胞進門后，分別隨機選擇5 500個T細胞或2 000個B細胞進行t-SNE降維分析。

2.4 免疫組織化學（immunohistochemistry，IHC）染色和多重熒光IHC（multiplex IHC，mIHC）染色 （1）IHC染色即厚度為6 μm的腸系膜組織石蠟切片經過環保透明劑脫臘、梯度乙醇水化、高溫抗原修復、3%過氧化氫-甲醇消除內源性過氧化物酶活性、10%山羊血清封閉孵育后，每張切片滴加Ⅰ抗（CD4、CD8和CD19）后在濕盒中室溫孵育2 h 或4 ℃孵育過夜，TBST 洗滌后滴加Ⅱ抗，TBST 洗滌后使用DAB 顯色液顯色。隨后經蘇木素復染、大量自來水返藍、梯度乙醇脫水、環保透明劑透明和中性樹膠封片，最后使用Aperio CS2 數字病理掃描系統掃描。（2）mIHC 染色則是TBST 洗滌Ⅱ抗后使用酪胺信號放大（tyramide signal amplification，TSA）熒光染料標記，TBST洗滌后切片重新抗原修復、封閉后進行下一輪染色，使用不同的酪胺-熒光團偶聯物進行染色，直至染色完成。本研究mIHC 的Ⅰ抗配色方案為CD69 配620熒光染料、CD4 配690 熒光染料、Foxp3 配570 熒光染料和CD8 配520 熒光染料。最后滴加DAPI 染色液染細胞核，在濕盒中室溫孵育5 min，超純水漂洗后中性樹膠封片，使用Vectra Polaris 全自動定量病理成像系統掃描。

3 統計學處理

利用FlowJo 10 軟件和t-SNE 算法分析多參數流式細胞術數據；利用AperioImageScope 12.4.0 軟件和Phenochart 1.0.12 軟件進行IHC 圖像分析；利用GraphPad Prism 8.0.1 軟 件、SPSS 25.0 軟 件 和R 3.5.3軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（mean±SD）表示。組間差異分析采用非參數Mann-WhitneyU檢驗；相關性分析采用Pearson 相關分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 患者臨床資料和正常腸系膜組織的位置

本研究共納入26例2018年10月～2020年9月在廣州市第一人民醫院結直腸肛門外科接受手術的CRC 患者，其中14 例為男性（53.80%），12 例為女性（46.20%）；平均年齡為61.92歲，其中55歲以下的有5 例（19.20%），55 歲及以上的有21 例（80.80%）；身體質量指數（body mass index，BMI）及血液指標如白細胞總數、中性粒細胞絕對值、淋巴細胞絕對值、白蛋白、甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）如表2 所示。收集的NM 位于左半結腸的有15 例（57.70%），位于右半結腸的有11例（42.30%），見表2。

表2 患者的臨床資料及正常腸系膜組織的位置Table 2. Clinical data of patients and the location of the normal mesentery（NM）

2 腸系膜免疫細胞以T細胞為主

首先對腸系膜進行IHC 染色和mIHC 染色，結果顯示腸系膜脂肪細胞之間散在分布了CD4+T 細胞、CD8+T 細胞、B 細胞（CD19+）、CD4+CD69+T 細胞、CD8+CD69+T 細胞和Treg 細胞（CD4+Foxp3+），見圖1。接著我們根據細胞表面分子包括CD3、CD56、CD161、TCRVα7.2 和CD19 的表達對PBMCs 和NM的CD45+MNCs 進行t-SNE 降維分析并界定出6 個免疫細胞群，包括B 細胞（CD19+）、黏膜相關恒定T（MAIT）細胞（CD3+TCRVα7.2+CD161+）、NK 細胞（CD3-CD56+）、T細胞（CD3+CD56-）、CD3+CD56+細胞和其他細胞（單核細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞等），見圖2A 及 圖3A、B。從PBMCs 和NM 中的CD45+MNCs 的t-SNE 降維圖可以看出二者的B 細胞、T 細胞、NK 細胞和CD3+CD56+細胞的組成和分布存在差異，見圖3A。同時，根據圖2A所示CD45+MNCs的畫門策略對流式數據進行分析，結果顯示NM 中B 細胞、MAIT 細胞、CD3+CD56+細胞、NK 細胞、T 細胞和其他細胞（包括單核細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞等）分別約占CD45+MNCs 的9.96%、2.42%、4.79%、5.12%、58.65%和18.01%，即NM 中的免疫細胞以T細胞為主，見圖3C。與PBMCs 相比，NM 中的NK 細胞的比例顯著降低（P＜0.01），而T 細胞的比例顯著升高（P＜0.01），見圖3C。

Figure 1. Scattered distribution of T cells and B cells in the mesentery. A：scattered distribution of CD4+ T cells（red arrows）in the mesentery；B：scattered distribution of CD8+ T cells（red arrows）in the mesentery；C：scattered distribution of B cells（CD19+；red arrows）in the mesentery；D：mIHC showed the expression of CD4（red），CD8（green），Foxp3（white）and CD69（yellow）in the mesentery［DAPI（blue）indicated the nuclei］，and CD4+T cells，CD4+CD69+T cells，CD8+cells，CD8+CD69+T cells and Treg cells（CD4+Foxp3+）were scattered in the mesentery.圖1 腸系膜內散在分布著T細胞和B細胞亞群

Figure 2. Gating strategy of CD45+MNC subsets，T-cell subsets and B-cell subsets. A：gating strategy of CD45+MNC subsets and Tcell subsets；B：gating strategy of B-cell subsets.圖2 CD45+MNCs、T細胞和B細胞亞群的畫門策略

Figure 3. Immune cells in the mesentery were mainly T cells. A：t-SNE plot of CD45+ MNCs in the PBMCs and NM with main subsets indicated；B：feature plot of CD45+ MNC markers；C：percentages of CD45+ MNC subsets in the PBMCs（n=13）and NM（n=26）. Mean±SD.**P＜0.01 vs PBMCs.圖3 腸系膜免疫細胞以T細胞為主

3 腸系膜中浸潤高比例的記憶T 細胞和組織駐留記憶T（tissue-resident memory T，TRM）細胞

根 據 CD4、CD8、CD25、CD127、CD45RA、CD45RO、CD69 和CD103 等特定T 細胞表面分子對PBMCs和NM 的T細胞作進一步降維及細分亞群，鑒定出包括記憶CD4+T 細胞（CD4+CD45RO+）、幼稚CD4+T 細胞（CD4+CD45RA+）、記憶CD8+T 細胞（CD8+CD45RO+）、幼稚CD8+T細胞（CD8+CD45RA+）、雙陰性（DN）細胞（CD4-CD8-）、Treg 細胞（CD4+CD25+CD127-）、CD4+TRM 細 胞（CD4+CD45RO+CD69+）和CD8+TRM 細胞（CD8+CD45RO+CD69+）等不同的T 細胞亞群，見圖4A、B。結果顯示CD69 在PBMCs 中的T 細胞幾乎不表達，而在NM 的T 細胞中有著顯著表達，即NM 存在大量CD4+TRM 細胞和CD8+TRM 細胞，見圖4A。此外，根據圖2A 所示T 細胞亞群的畫門策略對流式數據進行分析，統計結果表明NM 中的CD4+T 細胞與CD8+T 細胞的比值約為2.26；Treg細胞、記憶CD4+T細胞、記憶CD8+T細胞、CD4+TRM 細胞和CD8+TRM 細胞分別約占CD4+T 細胞 或CD8+T 細 胞 的10.71%、80.26%、61.90%、58.27%和51.36%，見圖4C～F。與PBMCs 相比，NM的記憶CD4+T 細胞（P＜0.01）、記憶CD8+T 細胞（P＜0.01）、CD4+TRM 細胞（P＜0.01）和CD8+TRM 細胞（P＜0.01）的比例顯著升高，見圖4E、F。

Figure 4. Higher percentages of memory T cells and tissue-resident memory T（TRM）cells were infiltrated in the mesentery. A：t-SNE plot of T cells in the PBMCs and NM with main subsets indicated；B：feature plot of T-cell markers；C：CD4/CD8 ratio in the PBMCs（n=11）and NM（n=23）；D：percentage of Treg cells in the PBMCs（n=8）and NM（n=15）；E：percentages of memory CD4+ T cells and memory CD8+ T cells in the PBMCs（n=13）and NM（n=22）；F：percentages of CD4+TRM cells and CD8+TRM cellsin the PBMCs（n=12）and NM（n=18）. Mean±SD.**P＜0.01 vs PBMCs.圖4 腸系膜中浸潤高比例的記憶T細胞和組織駐留記憶T細胞

4 腸系膜中漿母細胞和記憶B細胞浸潤增加

根據CD38、IgD、IgM、IgA 和IgG 等特定B 細胞表面分子對B 細胞進行降維分析，將B 細胞分成5 個亞群，包括漿母細胞（CD38+IgD-）、IgM+和IgM-未轉化的B 細胞（CD38-IgD+）及IgA+和IgG+記憶B 細胞（CD38-IgD-），見圖5A、B。降維圖顯示PBMCs和NM之間表達IgA 或IgG 的記憶B 細胞的組成和分布存在差異，見圖5A。根據圖2B 的B 細胞亞群畫門策略對流式數據進行分析，結果顯示NM 中漿母細胞、記憶B 細胞、未轉化B 細胞、IgA+記憶B 細胞、IgG+記憶B 細胞和IgM+未轉化B 細胞分別約占B 細胞的24.93%、31.99%、35.60%、12.83%、13.72% 和32.31%，見圖5C、D。與PBMCs 相比，NM 的漿母細胞（P＜0.05）、記憶B 細胞（P＜0.01）和IgA+記憶B 細胞（P＜0.05）的比例顯著升高，而IgM+未轉化B 細胞比例顯著降低（P＜0.01），見圖5C、D。

Figure 5. Higher percentages of plasmablasts and memory B cells were infiltrated in the mesentery. A：t-SNE plot of B cells in the PBMCs and NM with main subsets indicated；B：feature plot of B-cell markers；C：percentages of plasmablasts，memory B cells and unswitched B cells in the PBMCs（n=5）and NM（n=14）；D：percentages of IgA+ memory B cells，IgG+ memory B cells and IgM+unswitched B cells in the PBMCs（n=5）and NM（n=13）. Mean±SD.*P＜0.05，**P＜0.01 vs PBMCs.圖5 腸系膜中漿母細胞和記憶B細胞浸潤增加

5 性別、年齡、血脂和腸系膜位置影響腸系膜T 細胞和B細胞亞群的組成

相比于男性，女性腸系膜B 細胞的比例更高（P＜0.01），而記憶CD8+T 細胞的比例更低（P＜0.05），見圖6A、B。年齡也會影響腸系膜T細胞和B細胞的組成，其中55 歲及以上患者腸系膜中有更高比例的CD8+TRM 細胞（P＜0.05）和CD8+CD103-TRM 細胞（P＜0.01），見圖6C；同時年齡與腸系膜CD8+TRM 細胞、CD8+CD103-TRM 細胞和漿母細胞比例呈正相關，與腸系膜未轉化B 細胞比例呈負相關（P＜0.05），見圖6D～H。此外，血脂也會影響腸系膜T 細胞和B細胞的組成，血TC 和LDL-C 的含量均與腸系膜記憶CD8+T 細胞（P＜0.05）、CD4+TRM 細胞（P＜0.01）、CD4+CD103-TRM 細胞（P＜0.01）、CD8+TRM 細胞（P＜0.05）和CD8+CD103-TRM 細胞（P＜0.05）比例呈正相關，見圖7A～J；血HDL-C含量與腸系膜IgA+記憶B 細胞比例呈正相關（P＜0.05），見圖7K?；颊叩难猅G 含量、血白蛋白含量和BMI 與腸系膜淋巴細胞亞群均無顯著相關性（P＞0.05）。以脾曲為界劃分右半結腸和左半結腸，結果顯示左半結腸腸系膜與右半結腸腸系膜的T細胞和B細胞亞群組成存在差異，右半結腸腸系膜的CD4+T 細胞與CD8+T 細胞比值（P＜0.01）和CD8+CD103+TRM 細胞（P＜0.05）比例更高，見圖6I～K。

Figure 6. Sex，age and location of the mesentery affect the composition of mesenteric T-cell and B-cell subsets. A：percentage of mesenteric B cells in males（n=12）and females（n=9）；B：percentage of mesenteric memory CD8+ T cells in males（n=11）and females（n=11）；C：percentages of mesenteric CD8+ TRM cells and CD8+ CD103- TRM cells in the patients ＜50 years old（n=4）and ≥50 years old（n=14）；D，E and F：correlations between age and the percentages of mesenteric CD8+TRM cells，CD8+ CD103- TRM cells and Treg cells（n=18）；G and H：correlations between age and the percentages of plasmablasts and unswitched B cells（n=14）；I：CD4/CD8 ratio in the left hemicolon（n=11）and right hemicolon（n=7）；J：percentage of mesenteric CD8+ CD103+ TRM cells in the left hemicolon（n=10）and right hemicolon（n=5）；K：percentage of mesenteric plasmablasts in the left hemicolon（n=6）and right hemicolon（n=6）. Mean±SD.*P＜0.05，**P＜0.01 vs male；#P＜0.05，##P＜0.01 vs ＜50 years old；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs left hemicolon.圖6 性別、年齡和腸系膜位置影響腸系膜T細胞和B細胞亞群的組成

Figure 7. Blood lipids affected the composition of mesenteric T-cell and B-cell subsets. A to E：correlations between blood TG levels and the percentages of mesenteric memory CD8+ T cells，CD4+ TRM cells，CD4+ CD103- TRM cells，CD8+ TRM cells and CD8+CD103-TRM cells；F to J：correlations between blood LDL-C levels and the percentages of mesenteric memory CD8+T cells，CD4+TRM cells，CD4+CD103-TRM cells，CD8+TRM cells and CD8+CD103-TRM cells；K：correlation between blood HDL-C and the percentage of IgA+memory B cells. n=10 to 14.圖7 血脂影響腸系膜T細胞和B細胞亞群的組成

討 論

腸系膜近年來被認為是一個獨立的器官，其組織學特征是表面的間皮細胞、結締組織間隔及大量脂肪細胞群［1］。腸系膜作為腸道血液及淋巴液的輸送途徑，在多種腹部及非腹部疾病的病理生理過程中具有重要作用，如CRC可以侵襲到鄰近的腸系膜，發生腸系膜轉移的CRC 患者往往累積生存率較差［16-17］，而且研究表明腸系膜是一個潛在的腫瘤殘留部位，可導致CRC 的術后復發［18-20］。此外，許多腹腔內腫瘤，如卵巢癌［5］、子宮內膜癌［6］、胃癌［7］和胰腺癌［8］等傾向轉移腹膜，發生腹膜轉移的患者疾病進展快、預后差。腸系膜是內臟脂肪的最大貢獻者［13］，多個研究也顯示脂肪組織尤其內臟肥胖顯著促進腫瘤進展［9-10］。然而，腸系膜的免疫微環境尚不清楚。在本研究中，我們首次證實了腸系膜中存在與外周血不同的特定免疫微環境，其內的免疫細胞主要由淋巴譜系組成，以T 細胞為主。與PBMCs 相比，腸系膜中顯著浸潤更高比例的記憶T 細胞、TRM 細胞、漿母細胞和記憶B 細胞。此外，性別、年齡、血脂和腸系膜位置可影響腸系膜T細胞和B細胞亞群的組成?？偟膩碚f，本研究揭示了腸系膜中淋巴細胞亞群的組成與表型及其影響因素，為探討腸系膜在多種疾病中的作用提供了參考資料。

根據行使免疫功能的不同，淋巴細胞亞群可分為效應細胞、調節細胞和記憶細胞。目前研究最多的調節細胞是Treg 細胞，它具有免疫應答低下和免疫抑制兩大特征，可通過細胞接觸或分泌抑制性細胞因子作用于抗原提呈細胞或效應T 細胞，發揮免疫負向調節的作用［21］。記憶T 細胞由記憶CD4+T 細胞和記憶CD8+T 細胞組成，各自又可分成效應性記憶T（effector memory T，TEM）細胞、中樞性記憶T（central memory T，TCM）細胞和TRM 細胞。其中TEM 細胞承擔保護性記憶形式速發型效應功能；TCM 細胞負責反應性記憶，在抗原再次刺激時重新分化為效應細胞，如CD4+輔助性T（T helper，Th）細胞、CD8+細胞毒性T 淋巴細胞（cytotoxic T-lymphocytes，CTLs）等［22］。其中CD4+Th 細胞主要通過分泌多種細胞因子在腫瘤免疫、自身免疫等發揮免疫調節作用［23］；而CD8+CTLs 是免疫應答的主要效應細胞，可以特異性結合靶細胞并釋放顆粒酶和穿孔素使其裂解和分泌TNF-α、IFN-γ 和IL-2 等協同殺傷靶細胞，在腫瘤免疫和抗病毒免疫中發揮重要作用［24-25］。CD69 的表達意味著T 細胞的早期活化及其在組織中的駐留［26-27］，TRM 細胞表現為上調CD69 的表達從而維持在組織中的駐留及其細胞毒性特征［28-30］。TRM 細胞在成年人中數量居所有記憶T 細胞之首，定居于與外周非淋巴組織，是在應答第一線發揮作用的記憶細胞［28-30］。CD8+CD69+T 細胞已經被證明具有更高的細胞毒性［31］。此外，B細胞是體液免疫中最主要的免疫細胞，同時B 細胞還可以誘導性表達參與提呈抗原的MHC II 類分子和共刺激分子，具有攝取、加工和提呈抗原，協助啟動T 細胞應答的功能。B 細胞同時還能分泌細胞因子調節免疫應答［32］。根據CD38 和IgD 的表達，B 細胞可以分為漿母細胞（CD38+IgD-）、未轉化的B 細胞（CD38-IgD+）和記憶B 細胞（CD38-IgD-）［33］。B 細胞接受抗原刺激之后可分化為體積較大的漿母細胞，而后進一步分化為漿細胞，漿細胞細胞質中有大量糙面內質網，能合成和分泌特異性抗體，介導體液免疫。而記憶B細胞在再次遇到抗原刺激時，記憶B細胞可再次分化為漿細胞，產生記憶性應答。此外，在抗原的刺激下，B 細胞可以發生類別轉換重組，從初始表達膜結合IgM 和IgD到表達膜結合的IgG、IgA或IgE［34］。我們的研究結果顯示腸系膜免疫細胞主要由淋巴譜系組成，以T 細胞為主，與外周血相比，腸系膜中顯著浸潤更高比例的T 細胞（P＜0.01）、記憶T 細胞（P＜0.01）、TRM 細胞（P＜0.01）、漿母細胞（P＜0.05）和記憶B 細胞（P＜0.01），即腸系膜除了作為腸道的支撐結構，其內也浸潤多種淋巴細胞亞群，表明腸系膜一定程度上在抗感染免疫、自身免疫和腫瘤免疫中能發揮重要的免疫調節和細胞毒性等免疫功能。

此外，我們的數據表明性別、年齡、血脂和腸系膜位置影響腸系膜T細胞和B細胞亞群的組成，其中女性腸系膜B 細胞的比例更高（P＜0.01），記憶CD8+T 細胞的比例更低（P＜0.05），不同性別的免疫差異可能是性染色體、基因、激素和環境等共同影響的結果［35-37］。我們還觀察到年齡越大的患者的腸系膜CD8+TRM 細胞和CD8+CD103-TRM 細胞的比例更高（P＜0.05），這可能是由于機體衰老伴隨著免疫功能降低，機體長期暴露在抗原（包括腫瘤抗原、病原體或自身抗原）下，導致初始細胞向記憶細胞分化［38］。已有文獻報道，多種脂質參與調節許多生理活動，如能量儲存、細胞凋亡和信號傳導等，膽固醇和LDL-C 等脂質在調節淋巴細胞增殖、分化、激活及分泌細胞因子能力中發揮重要作用［39-40］。我們的研究結果顯示，血TC 和LDL-C 含量均與腸系膜記憶CD8+T 細胞（P＜0.05）、CD4+TRM 細胞（P＜0.01）、CD4+CD103-TRM 細胞（P＜0.01）、CD8+TRM 細胞（P＜0.05）和CD8+CD103-TRM 細胞（P＜0.05）比例呈正相關，HDL-C含量與腸系膜IgA+記憶B細胞比例呈正相關（P＜0.05），表明TC 和LDL-C 等血脂的增加可能促進腸系膜T 細胞向記憶T 細胞和TRM 細胞分化。此外，臨床上常以脾曲為界將結腸劃分為右半結腸和左半結腸；它們的胚胎起源也不同，右半結腸起源于胚胎的中原腸，而左半結腸則是起源于后原腸［41］；左右半結腸疾病如結腸癌等在臨床表現、病理分型、免疫環境、分子生物學特征及預后等方面均存在差異［42］。我們的研究結果顯示，左半結腸腸系膜與右半結腸腸系膜的T 細胞和B 細胞亞群組成也同樣存在差異，即右半結腸腸系膜CD4+T 細胞與CD8+T 細胞的比值（P＜0.01）和CD8+CD103+TRM 細胞的比例（P＜0.05）更高，表明不同位置的腸系膜在疾病中的作用可能存在差異。

綜上所述，我們揭示了腸系膜中存在與外周血不同的特定免疫微環境，并描繪了腸系膜的淋巴細胞圖譜，這些細胞在一定程度上能發揮重要的免疫調節和細胞毒性等免疫功能，同時性別、年齡、血脂和腸系膜位置影響腸系膜淋巴細胞的組成和表型。