益心泰有效組分對(duì)慢性心力衰竭兔肝臟組織形態(tài)的影響

魏佳明，劉承鑫，李 雅，郭志華，匡 琳，李 卉

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208)

慢性心力衰竭(chronic heart failure，CHF)是以呼吸困難、水腫和乏力為主要臨床表現(xiàn)的臨床綜合征，是心血管疾病防治中的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。近年來(lái)，中醫(yī)藥治療CHF的作用越來(lái)越得到重視。中藥復(fù)方有效組分是當(dāng)前研究的一大熱點(diǎn)，研究其效應(yīng)機(jī)制有助于更好發(fā)揮中醫(yī)藥治療疾病的優(yōu)勢(shì)作用。益心泰是具備抗心力衰竭作用的中醫(yī)臨床科研方，前期研究表明，益心泰有效組分具有改善心力衰竭心肌病理結(jié)構(gòu)的作用，其效用有待進(jìn)一步研究。中醫(yī)認(rèn)為心力衰竭病本于心，且與肝密切相關(guān)。本研究擬以兔CHF模型為研究對(duì)象，觀察益心泰有效組分干預(yù)后兔的室間隔厚度(interventricular septal thickness，IVST)、左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness，LVPWT)等心臟超聲指標(biāo)，及心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)與肝臟病理結(jié)構(gòu)的變化，進(jìn)一步探討益心泰有效組分對(duì)CHF兔的作用。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 120只健康新西蘭兔，普通級(jí)，體質(zhì)量1.5～2.0 kg，雌雄各半。購(gòu)自湖南太平生物科技有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)為SCXK(湘)2015-0004，合格證號(hào)為43608300000615。不限制飲食，通風(fēng)，室溫約23 ℃，濕度50%～60%，正常光/暗周期，分籠飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)獲得湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)文號(hào)為L(zhǎng)L2018010801。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 益心泰有效組分：黃芪、丹參、紅花、豬苓、澤瀉等購(gòu)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，按照3∶1∶1.5∶1∶1的配伍比例，采用系統(tǒng)溶劑法與大孔樹(shù)脂吸附法相結(jié)合，對(duì)益心泰復(fù)方中4個(gè)不同極性部位的藥效組分進(jìn)行分離，根據(jù)最佳工藝條件，分離得到益心泰有效組分提取液，冷凍干燥后得提取物(含總皂苷372.4 mg/g、總黃酮98.3 mg/g、總多糖445.8 mg/g)；氯沙坦鉀(每片50 mg，批號(hào) H20000371)：杭州默沙東制藥有限公司；注射用鹽酸多柔比星(每瓶10 mg，批號(hào) H44024361)：深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司；丙基硫氧嘧啶(每片50 mg，批號(hào) H32020795)：蘇州東瑞制藥有限公司；烏拉坦(批號(hào) 94300)：Sigma；生理鹽水(每瓶500 mL，批號(hào) H51021158)：四川科倫藥業(yè)股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 多聚甲醛(批號(hào) 16005)，蘇木精(批號(hào) H9627)，伊紅(批號(hào) E4009)：Sigma；石蠟：河南天孚化工有限公司；超聲心動(dòng)圖機(jī)(型號(hào) Sequoia 512)：西門(mén)子公司；石蠟輪轉(zhuǎn)切片機(jī)(批號(hào) RM2235)：Leica公司；電子秤：湘儀天平儀器設(shè)備有限公司。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及模型制備 參考文獻(xiàn)[5-6]，采用阿霉素耳緣靜脈注射+丙基硫氧嘧啶灌胃復(fù)制兔慢性心力衰竭模型。采用隨機(jī)方法將20只實(shí)驗(yàn)兔設(shè)為正常對(duì)照組，余下100只用于模型復(fù)制。將兔固定于手術(shù)臺(tái)，給予丙基硫氧嘧啶灌胃，劑量按兔每日進(jìn)食量的0.2%，每日1次；分別于每周三、周日下午耳緣靜脈注射阿霉素溶液1 mg/kg，濃度為1 mg/mL。正常對(duì)照組給予等次等容量的生理鹽水灌胃與耳緣靜脈注射。模型復(fù)制8周后第1天，行超聲提示模型兔較正常對(duì)照組兔IVST、LVPWT上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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05)，同時(shí)血清腦利鈉肽水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

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05)，伴有精神萎靡，水腫，抓起反抗下降，心率和呼吸頻率加快，耳溫降低，尿量減少等心力衰竭表現(xiàn)，提示模型復(fù)制成功。模型復(fù)制過(guò)程中，模型兔共死亡16只，均死于腹瀉。將模型復(fù)制成功的模型兔按完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方法分為5組：模型組(17只)，益心泰有效組分低劑量組(17只)、中劑量組(17只)、高劑量組(17只)，氯沙坦鉀組(16只)。

2.2 干預(yù)方法 于模型復(fù)制后第1周開(kāi)始灌胃，根據(jù)成人體表面積換算，結(jié)合臨床用藥經(jīng)驗(yàn)和既往實(shí)驗(yàn)研究，確定益心泰有效組分低、中、高劑量組分別為2.1、4.2、8.4 g/kg，氯沙坦鉀組(制成氯沙坦鉀懸液)2.75 mg/kg，正常對(duì)照組與模型組灌服同等容積的蒸餾水，各組灌胃量均為每次10 mL/kg，均每日1次，連續(xù)4周。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

2.3.1 一般情況 觀察兔精神狀態(tài)、心率、水腫等一般情況。

2.3.2 心臟超聲檢測(cè) 麻醉滿意后將兔平臥位固定，運(yùn)用西門(mén)子Sequoia 512超聲心動(dòng)圖機(jī)，探頭頻率3～8 MHz，于心前區(qū)取左室長(zhǎng)軸最大直徑處，M型超聲標(biāo)記室間隔和左室后壁收縮末與舒張末期心內(nèi)膜位置，軟件自動(dòng)計(jì)算兔IVST、LVPWT等指標(biāo)數(shù)值，取5個(gè)心動(dòng)周期讀數(shù)的平均值。

2.3.3 心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)測(cè)量 空氣栓塞法處死兔后，稱(chēng)質(zhì)量，開(kāi)胸，取心臟、肝臟，洗盡血液，剪去殘余大血管，濾紙吸干后稱(chēng)質(zhì)量。按照“臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量”公式計(jì)算心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)。

2.3.4 肝臟組織形態(tài)學(xué)檢查 處死兔后，取部分肝臟組織，4%多聚甲醛固定組織并修整，經(jīng)梯度乙醇脫水，透明，浸蠟，包埋，制備切片(厚4～5 μm)，烤片，蘇木精-伊紅染色，光學(xué)顯微鏡下觀察并拍攝圖片。

3 結(jié)果

3.1 益心泰有效組分對(duì)CHF兔一般情況的影響 各用藥組兔精神萎靡、水腫等情況均有所改善，心率較前平穩(wěn)。益心泰有效組分中、高劑量組和氯沙坦鉀組改善程度更為明顯，優(yōu)于益心泰有效組分低劑量組。模型組無(wú)好轉(zhuǎn)，并且其中部分實(shí)驗(yàn)兔上述癥狀有所加重。整個(gè)用藥干預(yù)過(guò)程中，模型組和益心泰有效組分低劑量組兔各死亡3只，中劑量組兔死亡2只，益心泰有效組分高劑量組、氯沙坦鉀組兔各死亡1只，死因均為腹瀉，正常對(duì)照組兔無(wú)死亡。

3.2 益心泰有效組分對(duì)CHF兔心臟超聲指標(biāo)的影響 與模型組比較，益心泰有效組分低、中、高劑量組與氯沙坦鉀組IVST、LVPWT均明顯下降(

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05)。與益心泰有效組分低劑量組比較，益心泰有效組分中、高劑量組和氯沙坦鉀組IVST和LVPWT均降低(

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05)。見(jiàn)表1。

表1 益心泰有效組分對(duì)CHF兔心臟超聲指標(biāo)的影響

3.3 益心泰有效組分對(duì)CHF兔心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)的影響 與模型組比較，各用藥組心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)均降低 (

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05)。與益心泰有效組分低劑量組比較，益心泰有效組分中、高劑量組和氯沙坦鉀組心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)均明顯降低 (

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05)。見(jiàn)表2。

表2 益心泰有效組分對(duì)CHF兔心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)的影響

3.4 益心泰有效組分對(duì)CHF兔肝臟組織形態(tài)的影響 模型組肝小葉區(qū)部分細(xì)胞出現(xiàn)明顯水腫，胞漿稀疏，胞核皺縮、溶解及胞膜破裂，匯管區(qū)有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。益心泰有效組分低、中、高劑量組和氯沙坦鉀組以上情況較模型組依次有不同程度的減輕。正常對(duì)照組肝臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)大致正常，未見(jiàn)病理改變。見(jiàn)圖1。

注：A.正常對(duì)照組；B.模型組；C.益心泰有效組分低劑量組；D.益心泰有效組分中劑量組；E.益心泰有效組分高劑量組；F.氯沙坦鉀組；

4 討論

隨著中國(guó)人口老齡化的加速，心力衰竭的患病率呈逐年上升趨勢(shì)，給人民生活及經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展帶來(lái)了嚴(yán)重負(fù)擔(dān)。目前對(duì)于心力衰竭的治療目的主要是在改善癥狀的基礎(chǔ)上更注重提高患者生活質(zhì)量，遏止心肌重構(gòu)的進(jìn)一步發(fā)展。近年來(lái)，中醫(yī)藥治療CHF效果顯著，在減輕癥狀、提高生活質(zhì)量、延長(zhǎng)壽命、減少不良反應(yīng)等方面凸顯優(yōu)勢(shì)。

本研究以兔CHF模型為研究對(duì)象，并通過(guò)益心泰有效組分對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組兔IVST、LVPWT較正常對(duì)照組上升(

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05)，心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)升高(

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05)，提示CHF兔心臟、肝臟質(zhì)量病理性增加，結(jié)合肝臟組織形態(tài)學(xué)檢查，進(jìn)一步說(shuō)明其肝臟存在病理結(jié)構(gòu)改變。相關(guān)研究也表明，心力衰竭的同時(shí)存在著肝臟的功能損傷及結(jié)構(gòu)改變。與模型組比較，各給藥組兔IVST、LVPWT明顯降低(

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05)，心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)下降(

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05)，結(jié)合肝臟組織形態(tài)學(xué)結(jié)果說(shuō)明，益心泰有效組分能下調(diào)心臟、肝臟質(zhì)量病理性增加，改善其肝臟組織形態(tài)的損傷，緩解CHF。

中醫(yī)認(rèn)為，肝主藏血，且能化精為清血，如肝藏血與化清血功能失用則心無(wú)血可主。“肝生筋，筋生心”，肝氣通乃心氣和，“肝氣滯則心氣乏”。肝稟春木生發(fā)之性，喜條達(dá)而惡抑郁，若氣機(jī)暢達(dá)，則氣行帶動(dòng)血行、水行，若氣機(jī)郁滯，則血行遲滯，脈道不通，水道失調(diào)，發(fā)為心力衰竭。心火受難，更易及于肝木，所謂“子盜母氣”。若肝氣日漸虧耗，瘀血、水濕等邪不除，則氣機(jī)愈不循其經(jīng)，津液愈不走其道，瘀血復(fù)又生瘀血，形成惡性循環(huán)。肝主情志，有研究發(fā)現(xiàn)，心力衰竭患者往往伴有情志抑郁，產(chǎn)生“雙心疾病”。研究表明，從“心肝同治”角度治療心力衰竭的療效肯定。益心泰在組方時(shí)針對(duì)以上病機(jī)，在處理臟腑關(guān)系時(shí)兼顧了心肝兩臟。方中以黃芪補(bǔ)氣升氣、利水消腫，以丹參、紅花同入心肝，功在活血化瘀，另以豬苓、澤瀉利水滲濕。諸藥共奏益氣活血利水之功。本研究通過(guò)觀察益心泰有效組分干預(yù)兔CHF模型的效果，比較各組兔IVST、LVPWT，心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)及肝臟組織形態(tài)的變化。結(jié)果表明益心泰有效組分能降低CHF兔IVST、LVPWT，降低心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)，減輕肝臟病理結(jié)構(gòu)損傷，改善CHF，提示益心泰抗心力衰竭的作用機(jī)制可能與“心肝同治”有關(guān)。

目前，心力衰竭的治療機(jī)制研究多從心臟指標(biāo)出發(fā)，但中藥復(fù)方診治過(guò)程以中醫(yī)整體觀和辨證論治為其特色，本研究從“心肝同治”角度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，在豐富益心泰有效組分實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容的同時(shí)，為心力衰竭的中醫(yī)辨證論治提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但研究尚不深入，其機(jī)制仍有待深入探索。