氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺顆粒劑高效液相色譜分析

王廣成，許艷秋，陳丙坤，謝樹林，高立明

(四川省農藥檢定所，四川 成都 610041)

1 前言

氯蟲苯甲酰胺是一種高效廣譜的殺蟲劑，對鱗翅目的夜蛾科、螟蛾科、蛀果蛾科、卷葉蛾科、粉蛾科、菜蛾科、麥蛾科、細蛾科等均有很好的控制效果[1-2]。噻蟲胺是一類高效安全、高選擇性的新型煙堿類殺蟲劑，主要用于防治水稻、蔬菜、果樹及其他作物上的蚜蟲、葉蟬、薊馬、飛虱等半翅目、鞘翅目、雙翅目和某些鱗翅目類害蟲[3-4]。氯蟲苯甲酰胺與噻蟲胺的殺蟲組合物具有擴大防治譜和增效的作用，并可以降低用藥成本，用于防治鱗翅目、半翅目、膜翅目、鞘翅目等多種害蟲。

有關氯蟲苯甲酰胺的分析方法[5-7]和噻蟲胺的分析方法[8-9]已有相關報道，但兩者混配顆粒劑的分析方法目前還未見公開報道，本文采用高效液相色譜法對試樣中的氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺同時進行分離和測定，該方法操作快速、簡便，精密度和準確度均能滿足定量分析要求，能適用于生產質量控制和相關分析的研究。

2 實驗部分

2.1 試劑與溶液 甲醇：色譜純；水：一級水；磷酸：分析純；氯蟲苯甲酰胺標準品：(≥99.0%)；噻蟲胺標準品：(≥99.0%)；1.5%氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺顆粒劑(其中氯蟲苯甲酰胺含量0.3%、噻蟲胺含1.2%)。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1260，具有DAD檢測器和自動進樣器；色譜柱：250mm×4.6mm(i.d.)不銹鋼柱，內填ZORBAX SB-C18，5μm填充物；過濾器：濾膜孔徑0.45μm。

2.3 液相色譜操作條件 流動相：Ψ(甲醇+0.1%磷酸水溶液)梯度淋洗(表1)；流量1.0mL/min;柱溫：(30±2)℃；檢測波長：240nm；進樣體積：5μL；保留時間：噻蟲胺約為5.09min，氯蟲苯甲酰胺約為10.95min。氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺的高效液相典型色譜圖(圖1～2)。

表1 梯度淋洗程序(VA+VB)

圖1 氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺標樣高效液相色譜圖

圖2 1.5%氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺顆粒劑高效液相色譜圖

2.4 測定步驟

2.4.1 標樣溶液的配制 稱取氯蟲苯甲酰胺胺標樣0.05g(精確至0.000 2g)和噻蟲胺標樣0.2g(精確至0.000 2g)于50.00mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，超聲5min，恢復至室溫后用甲醇稀釋定容，搖勻，準確移取5.0mL于50.00mL容量瓶中，加入甲醇稀釋定容，搖勻備用。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取已研磨粉碎的試樣2.0g(精確至0.000 2g)置于100mL具塞錐形瓶中，用移液管準確加入甲醇50.0mL，超聲5min，恢復至室溫后，用0.45μm濾膜過濾，濾液備用。

2.4.3 測定 在上述操作條件下，待儀器穩定，基線平穩后，連續注入數針標樣溶液，至相鄰2針標樣溶液的響應值相對變化<1.5%后，按照標樣、試樣、試樣、標樣溶液的順序進行測定。

2.4.4 計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)的峰面積分別進行平均。試樣中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)的質量分數ω按下式計算：

式中：A1—標樣溶液中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)峰面積的平均值；

m1—氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)標樣的質量，g；

m2—氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)試樣的質量，g；

ωs—標樣中氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)的質量分數，% ;

10—標樣溶液稀釋倍數。

3 結果與討論

3.1 溶劑的選擇 根據2種待測物質的溶解度性質，選擇甲醇作為溶劑。色譜柱使用常規的反相柱(ZORBAX SB-C18)。

3.2 檢測波長的選擇 通過二極管陣列檢測器，對氯蟲苯甲酰胺標樣和噻蟲胺標樣進行200～400nm范圍內的吸收光譜掃描(圖3)。由光譜信息可以得到，噻蟲胺在270nm附近有最大吸收，氯蟲苯甲酰胺在200nm以下有最大吸收，二者吸收光譜交叉點在240nm附近，為了減少干擾，同時結合噻蟲胺與氯蟲苯甲酰胺的含量差異，平衡二者峰型大小，故選擇240nm作為本方法的檢測波長。

圖3 噻蟲胺+氯蟲苯甲酰胺紫外吸收曲線

3.3 流動相的選擇 在選擇流動相時，先后選用甲醇與水系列，甲醇與磷酸水溶液系列作為流動相，對比純水和0.1%磷酸水溶液作水相的峰形，最后選用甲醇與磷酸水溶液作為流動相系列；結合待測物質含量的差異及出峰時間的差距，通過調節流動相中有機相和水相的比例，選用梯度淋洗作為流動相分離條件，流速1.0mL/min時，氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺能得到有效分離，出峰時間適宜，峰形尖銳且對稱。

3.4 分析方法的線性相關實驗 準確稱取5份氯蟲苯甲酰胺標準品(噻蟲胺標準品)于5個50.00mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，超聲5min，恢復至室溫后用甲醇稀釋定容，搖勻，分別準確移取5.00mL于50mL容量瓶中，甲醇定容，配制成5個不同濃度的標準溶液備用。按上述色譜操作條件進行分析，分別對氯蟲苯甲酰胺(噻蟲胺)的質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸分析，得到氯蟲苯甲酰胺線性方程為Y=9 130.9X-5.955 9，線性相關系數R2為0.999 6；噻蟲胺線性方程為Y=9 960.9X+275.67，線性相關系數R2為0.993 2(表2，圖4～5)。

表2 分析方法的線性實驗結果

圖4 氯蟲苯甲酰胺線性關系圖

圖5 噻蟲胺線性關系圖

3.5 分析方法精密度實驗 對同一樣品中的氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺的質量分數進行6次平行測定，并進行標準偏差及變異系數的統計運算，同時運用Horwitz公式計算值作為精密度是否合格的判定依據(表3)。氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺標準偏差均分別為0.002和0.006，變異系數分別為0.53%和0.49%，本分析方法的變異系數小于Horwitz公式計算值，精密度符合要求。

表3 分析方法精密度實驗結果

3.6 方法準確度實驗 按照配方比例，將除原藥以外的所有助劑混勻，制成空白樣品。準確稱取6個一定量的空白試樣，分別準確加入5.00mL氯蟲苯甲酰胺標樣溶液(1.129mg/mL、1.355mg/mL)和噻蟲胺標樣溶液(4.479mg/mL、3.583mg/mL)合成6個制劑樣品溶液，按上述操作條件分別測定氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺的回收率(表4)。氯蟲苯甲酰胺的平均回收率為99.69%，噻蟲胺的平均回收率為100.08%。

表4 分析方法的準確度實驗結果

4 結論

本文建立的高效液相色譜法對氯蟲苯甲酰胺·噻蟲胺顆粒劑中有效成分進行分離測定，其方法線性關系較好，精密度和準確度較高，操作簡便，可以作為氯蟲苯甲酰胺和噻蟲胺混配制劑的分析方法。