基于供試液多維使用的炎可寧丸鑒別優化研究

羅暉明，聶平，丁野，程雪清，余彬彬

1.湖南省藥品檢驗研究院（湖南藥用輔料檢驗檢測中心），湖南 長沙 410001；2.湖南省藥品質量評價工程技術研究中心，湖南 長沙 410001；3.天地恒一制藥股份有限公司，湖南 長沙 410331

炎可寧丸處方由黃柏、黃連、黃芩、大黃、板藍根五味組成，可清熱瀉火，消炎止痢，常用于急性扁桃體炎、急性尿道感染等［1］。炎可寧丸上市后因療效顯著，被廣大醫務工作者和病人認可，產品銷售規模逐年提高。現行質量標準YBZ1229592005-2009Z［1］包括大黃的顯微特征鑒別，黃連、黃柏的化學反應鑒別，大黃的薄層色譜鑒別，以及黃芩苷的含量測定。對于薄層色譜鑒別，國家藥品標準工作手冊（第四版）明確要求，盡可能采取一個供試液多項多維鑒別使用［2］，以達到保護環境、節約資源、簡便實用的目的。本研究重點針對這一要求，盡量共用供試液制備方法，對炎可寧丸處方各味藥進行TLC法鑒別研究，助力該制劑的質量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

分析天平（瑞士METTLER，AE240型）；烘箱（德國BINDER，FED 240型）；超聲儀（寧波新芝，SB-12DTD型，600 W，40 KHz）；硅膠G板（德國Merck，10 cm×20 cm）；試劑均為分析純（南京化學試劑股份有限公司）；純化水。

1.2 材料

炎可寧丸（某企業，批號170501，180703，190102，規格：每袋裝3 g）；陰性樣品分別按炎可寧丸處方自行制備；對照品：鹽酸黃柏堿（批號111895-201805，純度94.9%）、鹽酸小檗堿（批號110713-202015，純度85.9%）、鹽酸巴馬汀（批號110732-201913，純度85.7%）、大黃酸（批號110757-201607，純度99.3%）、黃芩苷（批號110715-201821，純度94.2%）、靛玉紅（批號110717-201805，純度99.6%）；對照藥材：黃連（批號121752-201801）、大黃（批號120902-201912）、黃芩（批號120955-201810），以上對照物質全部購于中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結果

2.1 黃柏的TLC鑒別［3-6］

取4.5 g炎可寧丸，研細，加甲醇20 mL，超聲30 min，濾過，取濾液10 mL濃縮至1 mL（留下其余濾液備用），作為供試品溶液。按處方稱取除黃柏外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。另取鹽酸黃柏堿對照品，用甲醇為溶劑制成1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗，取5 μL供試品溶液、2 μL對照品溶液，分別點在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在用氨飽和的展開缸里，用三氯甲烷-甲醇-水（30∶15∶4）的下層液上行展開后，噴以稀碘化鉍鉀試液。在與對照品色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點。缺黃柏的陰性對照沒有產生干擾，見圖1。

圖1 黃柏薄層色譜圖

2.2 黃連的TLC鑒別［3,7］

取“2.1”項下的備用濾液1 mL，加在干法裝柱的中性氧化鋁柱（100～200目，5 g，內徑1.5 cm）上，用50 mL無水乙醇洗脫，洗脫液蒸干后的殘渣用1 mL無水乙醇溶解，作為供試品溶液。按處方稱取除黃連、黃柏外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。取0.1 g黃連對照藥材，加20 mL甲醇浸泡5 min后，超聲30 min，過濾，將濾液作為對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀對照品，分別用甲醇為溶劑，制成0.2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗，以上四種溶液各取5 μL，分別點在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在用濃氨試液預飽和20 min的展開缸里，用甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液（6∶3∶2∶2∶1）上行展開后，365 nm下檢視。在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品顯四個以上相同顏色的熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。缺黃連、黃柏的陰性對照沒有產生干擾，詳見圖2。

圖2 黃連薄層色譜圖

2.3 大黃的薄層色譜鑒別［3,8］

取“2.1”項下的備用濾液作為供試品溶液。按處方稱取除大黃外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。取0.1 g大黃對照藥材，加20 mL甲醇浸泡5 min后，同法處理成對照藥材溶液。再取大黃酸對照品，用三氯甲烷為溶劑制成l mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗，吸取5～10 μL供試品溶液、5 μL對照藥材溶液、5 μL對照品溶液，分別點在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在展開缸里，用石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液上行展開后，365 nm下檢視。在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品顯相同的橙黃色熒光主斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點；氨熏，日光下顯相同的紅色斑點。缺大黃的陰性對照沒有產生干擾。詳見圖3。

圖3 大黃薄層色譜圖：A.365 nm；B.日光

2.4 黃芩的薄層色譜鑒別［3］

取“2.1”項下的備用濾液作為供試品溶液。按處方稱取除黃芩外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。另取1 g黃芩對照藥材，加20 mL甲醇浸泡5 min后，同法處理成對照藥材溶液。再取黃芩苷對照品，用甲醇為溶劑，制成0.5 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗，以上三種溶液各取5 μL，分別點在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在展開缸里，用乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）上行展開后，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，供試品顯相同顏色的斑點。缺黃芩的陰性對照沒有產生干擾。詳見圖4。

圖4 黃芩薄層色譜圖

2.5 板藍根的薄層色譜鑒別［3,9-11］

取10 g炎可寧丸，研細，加水40 mL，水浴加熱回流10 min，立即冷卻，離心5 min（轉速5 000 r/min），取上清液加熱近沸，加入吲哚醌0.05 g，加熱回流20 min后，加入18%鹽酸溶液5 mL，再加熱回流40 min，立即冷卻，離心5 min（轉速5 000 r/min），棄去上清液，殘渣加三氯甲烷40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液加1%氫氧化鈉溶液洗滌2次，20 mL/min，棄去氫氧化鈉液，三氯甲烷濃縮液至1 mL，作為供試品溶液。按處方稱取除板藍根外的其他味藥，按制備工藝處理后，同供試品溶液制備法制備陰性對照溶液。另取靛玉紅對照品，用三氯甲烷為溶劑，制成50 μg/mL的溶液，作為對照品溶液。照TLC法試驗，吸取20 μL供試品溶液、5 μL對照品溶液，分別點在同一塊硅膠G板上，將薄層板放在展開缸里，用甲苯-乙酸乙酯-丙酮（5∶4∶1）上行展開。在與對照品色譜相應的位置上，供試品顯相同顏色的斑點。缺板藍根的陰性對照沒有產生干擾。詳見圖5。

3 討論

藥品的療效源自藥品的質量，藥品的質量又源自生產工藝和原材料。炎可寧丸的制備工藝比較復雜，處方中雖然只有五味藥材，但卻包含了大黃、黃連生粉入藥、板藍根、黃芩水提取后入藥、黃柏水提醇沉后入藥三條路線。目前執行的質量標準中僅僅只收載了黃柏、黃連的化學鑒別、大黃的薄層色譜鑒別，難以全面控制炎可寧丸的產品質量。

中藥的質量控制研究具有階段性和漸進性［11］。隨著中醫藥產業的發展，中藥的生產和質量以及檢驗標準存在的問題越來越引起人們的關注。炎可寧丸處方中各味藥材的研究日趨深入，為其質量標準的提升提供了充分條件。本研究基于供試液多維使用的考慮，僅僅只取樣一次，共用部分供試液即可以實現黃柏、黃連、黃芩、大黃的鑒別，大大簡化了操作，提升了效率，減少了樣品的消耗。

板藍根中含有制劑中其他四味藥材沒有的靛玉紅成分，但由于其中含量太少，而且炎可寧丸中該味藥經水煎煮提取工藝致使靛玉紅的提取率較低，直接利用其作為指標成分進行質量控制難度較大。但板藍根藥材中含有大量的靛苷成分，其適合水提工藝，靛苷水解后會生成氧化吲哚，而在特定條件下氧化吲哚能與吲哚醌生成靛玉紅［12］，利用此線路生成的靛玉紅與板藍根自身含有的靛玉紅可以在鑒別中作為指標成分對板藍根進行控制。