甲狀腺乳頭狀癌組織TACSTD2表達的臨床病理意義

曾煥虹 黃東航 ▲ 李 峰 陳 旭

1.福建醫科大學省立臨床醫學院，福建福州350001；2.福建省立醫院基本外科，福建福州350001；3.福建省立醫院病理科，福建福州350001

腫瘤相關鈣信號轉導蛋白2（tumor-associated calcium signal transducer 2，TACSTD2）是一種單體跨膜糖蛋白，在正常人體細胞中表達很少或不表達，而在多種實體腫瘤中呈高表達，參與腫瘤增殖和侵襲的過程，被認為與腫瘤的不良預后密切相關[1-4]。

甲狀腺癌是常見的頸部惡性腫瘤，而其中最常見的是甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC），約占 70%[5]，近年來發病率增長較快[6]。雖然PTC一般預后良好，但是PTC的復發率、淋巴結轉移率較高，難治性PTC仍可致死[7]。近年來一些免疫組化標志物如半乳糖凝集素-3（Galectin-3）、細 胞 角 蛋 白 19（CK19）、CD56、人骨髓內皮細胞標記物-1（HBME-1）用于診斷PTC，但其敏感性和特異性均不理想，需要尋找更好的免疫標志物來協助診斷PTC[8-9]。目前有關甲狀腺癌組織中TACSTD2表達的臨床意義的研究較少。本研究通過檢測TACSTD2 mRNA及TACSTD2蛋白在PTC組織中的表達，研究TACSTD2表達與PTC臨床病理特征之間的關系，探討其臨床意義。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標準：①經病理診斷證實為PTC的患者；②初發病例；③術前未經過任何治療。

排除標準：①復發病例；②術前接受過針對病灶的射頻消融治療或其他治療；③既往因各種原因接受過甲狀腺手術或131I治療；④合并毒性彌漫性甲狀腺腫（Graves病）、甲狀腺炎。

根據上述標準，收集2014年2月至2018年2月就診于福建省立醫院基本外科的130例PTC患者的臨床病理資料以及病理標本切片。130例PTC患者中男36例，女94例；年齡15～79歲，平均48歲；TNM分期：Ⅰ期75例，Ⅱ期34例，Ⅲ期16例，Ⅳ期5例。

1.2 主要試劑

兔超敏二步法免疫組化檢測試劑盒（北京中杉金橋生物技術公司），兔抗人TACSTD2抗體（德國R&D公司）。

1.3 免疫組織化學法

標本經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚連續切片。采用PV二步法進行免疫組化染色，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。用已知的陽性切片作陽性對照，用磷酸緩沖鹽溶液代替一抗作陰性對照。

采用雙盲法，由兩名高年資病理科醫師讀片，結果不一致時協商判定結果。每例切片隨機選取5個高倍鏡視野，每個高倍鏡視野計數100個細胞。組織染色強度：無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕黑色為3分。陽性細胞數目百分比：無陽性細胞為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。染色指數為以上兩項得分之積（0～12分），染色指數≥4分為TACSTD2陽性表達。

1.4 統計學方法

應用SPSS 20.0統計學軟件進行統計學分析。計數資料以[n（%）]表示，TACSTD2在癌組織及相應的癌旁正常組織表達的陽性率比較采用χ2檢驗；TACSTD2表達與PTC患者臨床病理特征的相關性分析采用單因素χ2檢驗及多因素logistic回歸分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TACSTD2蛋白在PTC組織及相應癌旁正常組織中的表達情況

TACSTD2的免疫反應產物呈棕黃色顆粒，主要定位于細胞膜，也可少量出現于細胞質中，見圖1。130例PTC組織及相應癌旁正常組織中TACSTD2陽性例數分別為 86（66.2%）、17（13.1%）。PTC組織中TACSTD2陽性率明顯高于相應癌旁正常組織，差異有統計學意義（χ2=76.55，P＜ 0.001）。

圖1 TACSTD2在PTC組織及癌旁正常組織的表達情況（免疫組化PV二步法，×200）

2.2 TACSTD2蛋白表達與PTC患者臨床病理特征關系

TACSTD2表達與腫瘤大小（P=0.002）、被膜侵犯（P＜ 0.001）、淋巴結轉移（P=0.006）顯著相關。在腫瘤≥1 cm組表達陽性率高于＜1 cm組，被膜侵犯組表達陽性率高于無被膜侵犯組，淋巴結轉移組表達陽性率高于無淋巴結轉移組。TACSTD2表達與性別、年齡、TNM分期等無明顯相關。見表1。

表1 TACSTD2表達與PTC患者臨床病理特征的關系

2.3 多因素logistic回歸分析TACSTD2表達與PTC患者臨床病理特征的相關性

將上述分析中P＜0.05的因素引入多因素logistic回歸模型，TACSTD2表達是否為陽性作為因變量，相關因素作為自變量進行賦值，見表2。結果表明，TACSTD2表達與被膜侵犯（P=0.007）和淋巴結轉移（P=0.001）呈獨立相關性，見表3。

表2 賦值方法

表3 TACSTD2表達與PTC患者臨床病理特征多因素logistic回歸分析

3 討論

近年來，甲狀腺癌發病率逐漸上升，其中主要是PTC[10]。PTC一般預后良好，10年總生存率可在90%以上，盡管如此，PTC的復發率、淋巴結轉移率均較高，難治性PTC仍可致死[7]。如何篩查高風險PTC，以便更好地為患者制訂個體化治療方案，對復發、轉移風險較高的患者進行更積極的治療已成為目前甲狀腺癌的研究熱點之一[11-12]。

TACSTD2又稱滋養層細胞表面抗原（trophoblast cell-surface antigen 2，Trop-2）、胃腸腫瘤相關抗原（gastrointestinal tumor-associated antigen，GA-733-1）等，是由染色體1p32上的TACSTD2基因編碼的、分子量約為35kD的跨膜糖蛋白。TACSTD2由323個氨基酸構成。TACSTD2作為細胞表面受體，是一種重要的信號轉導分子，具有調節腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞遷移的作用[13-14]。Guo等[3]觀察到，TACSTD2在非小細胞肺癌組織及細胞株中均有過表達，TACSTD2過表達可促進肺癌細胞的增殖及侵襲行為。Xia等[15]應用免疫組化技術研究發現，在涎腺腺樣囊性癌中TACSTD2明顯呈高表達，TACSTD2過表達與TNM分期、局部復發和遠處轉移相關。Lin等[1]應用實時聚合酶鏈反應和免疫組化技術研究，發現乳腺浸潤性導管癌組織中TACSTD2的表達高于癌旁非瘤組織。TACSTD2高表達與組織學分級、淋巴結轉移、遠處轉移、TNM分期顯著相關。Kaplan-Meier生存率和Cox回歸分析表明TACSTD2高表達是乳腺浸潤性導管癌患者獨立的預后因素之一。

目前，關于PTC組織中TACSTD2表達及其臨床意義的報道較少。Sadullahoglu等[16]檢測了29例濾泡性腺瘤，57例甲狀腺乳頭狀癌和12例濾泡性甲狀腺癌的石蠟切片中TACSTD2的表達，結果顯示，PTC組織和濾泡性甲狀腺癌組織中TACSTD2表達陽性率顯著高于濾泡性腺瘤組織。Zargari等[17]對102例甲狀腺病變進行TACSTD2的檢測，結果顯示TACSTD2對甲狀腺惡性病變的敏感性為93%，特異性為74%，可用于甲狀腺癌的鑒別診斷。本研究亦提示在PTC組織中TACSTD2的表達顯著高于相應的癌旁組織，TACSTD2在一定程度上可用于甲狀腺良惡性病變的鑒別診斷。文獻中亦提及TACSTD2聯合其他免疫組化標志物，如CD56、CK19、HBME-1、Stomatin樣蛋白 -2（SLP-2）等可提高甲狀腺惡性腫瘤的診斷率，尤其對一些不典型的惡性腫瘤病變[17-19]。

TACSTD2在多種腫瘤中的過度表達與腫瘤的不良預后和侵襲行為有關。目前亦有一些相關的文獻指出，TACSTD2的表達或許是侵襲性PTC的一個潛在生物標志物。Abdou等[18]的研究中發現TACSTD2的陽性表達與淋巴結轉移有關。Guan等[20]的研究回顧性收集了145例PTC患者的臨床病理特征，采用實時定量聚合酶鏈反應方法檢測癌組織及癌旁正常組織中TACSTD2 mRNA的表達，結果顯示，TACSTD2的過度表達與淋巴結轉移和腫瘤向甲狀腺外延伸顯著相關，是獨立危險因素。章萍萍等[21]的研究中亦指出TACSTD2表達與PTC淋巴結轉移有關。本研究將多種臨床病理參數進行分層分析，發現在PTC組織中TACSTD2的表達與腫瘤大小、被膜侵犯、淋巴結轉移顯著相關。多因素logistic回歸分析表明，TACSTD2的表達與被膜侵犯和淋巴結轉移呈獨立相關。提示TACSTD2表達與PTC的侵襲及轉移關系密切。或許提示對TACSTD2蛋白過表達的PTC患者應考慮制訂較積極的治療方案。

TACSTD2過表達在人類癌癥發生、進展中起到的作用尚未被完全闡明，初步研究結果顯示miR-125b-1啟動子甲基化可引起miR-125b-1表達缺失，進而引起TACSTD2過表達。TACSTD2過表達可激活絲裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）信號通路，進而通過細胞外信號調節蛋白激酶（extracellular signalregulated kinase，ERK）磷酸化激活 Myc，促進腫瘤細胞增殖并增強其侵襲能力[4]。ERK信號通路的激活，還可促進腫瘤新生血管生成[3]。ERK磷酸化抑制劑U0126可以抑制腫瘤細胞的增殖和腫瘤新生血管生成[3-4]。在臨床試驗中已證實，sacituzumab govitecan作為一種由抗TACSTD2抗體和化療藥物拓撲異構酶1抑制劑SN-38組成的抗體偶聯藥物，可用于對一線化療耐藥的TACSTD2過表達的非小細胞肺癌及轉移性三陰性乳腺癌患者的治療，起到縮小腫瘤并延長帶瘤生存期的作用[22-25]。TACSTD2可否作為難治性PTC及晚期PTC靶向治療的靶點，值得今后進一步深入研究。

綜上所述，PTC患者的癌組織中存在TACSTD2過表達的情況，其過表達與被膜侵犯、淋巴結轉移有關，提示TACSTD2過表達可能參與PTC的局部侵襲及淋巴結轉移過程。