基于能量代謝的巴戟天鹽、酒炙炮制增效作用對比研究*

吳文輝，管莉，魏玉玲，賈琳，曾敏

重慶市中醫院 重慶 400021

巴戟天為茜草科巴戟天屬植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根，味甘、辛，性微溫，具有補腎助陽，祛風除濕的功效。本品不僅補腎助陽，還強筋骨、祛風濕，對腎陽虛兼風濕之證尤宜，且甘潤而不燥?，F代炮制應用多以巴戟肉、鹽巴戟和制巴戟為主，認為生品味辛而溫，補肝腎祛風濕力強，適用于腎虛而兼有風濕之證；鹽炙后功專入腎，增強補腎助陽的作用，適用于腎中元陽不足的陽痿早泄，宮冷不孕等；甘草制后味甘，補腎益氣養血，適用于脾腎虧損，氣血不足等，而酒炙則甚少應用[1]。但是，巴戟天酒炙炮制歷史沿革卻顯示，巴戟天酒制（炙）在古代，不僅常用于祛風濕，通經絡，亦曾廣泛用于溫腎助陽，以治療腎虛陽痿及不孕等癥[2]。中醫腎陽虛，是腎陽虛衰，溫煦失職，氣化失權所表現的一類虛寒證候，患者常有畏寒怕冷，四肢發涼（重者夏天也涼），腰背冷痛，遇寒則甚，遇熱則緩等臨床表現。而輔料酒味辛、甘，性大熱，辛甘化陽，熱者益熱。因此，巴戟天酒炙亦有可能同時具有溫腎助陽的炮制增效作用。本研究擬從能量代謝的角度為切入點，對比研究巴戟天酒炙與鹽炙對腎陽虛大鼠模型能量代謝的影響，為巴戟天酒炙溫腎助陽的科學闡釋提供實驗數據。

材料與方法

1 實驗動物

SD大鼠，雄性，體重220～260g，SPF級，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，實驗動物生產許可證號：SCXK（湘）2019-0004。

2 實驗儀器

HYC-310S醫用冷藏箱（海爾）、Synergy HTX全波段酶標儀（Bio-teck）、超低溫冰箱（Thermo）、TGL-18C-C臺式離心機（上海安亭）、RT-3100C全自動洗板機（雷杜生命科技有限公司）、AXLM1820-2超純水機（阿修羅）、UV-2450紫外可見分光光度計（日本島津）。

3 實驗材料

巴戟天購買于重慶桐君閣股份有限公司，經重慶市中醫研究院中藥制劑研究所副所長楊敏主任中藥師鑒定為茜草科植物巴戟天Morinda officinalisHow的干燥根。右歸丸（小蜜丸，仲景宛西制藥股份有限公司，批號：180901）。注射用氫化可的松琥珀酸鈉（50mg×5支，天津生物化學制藥有限公司，批號：011909022）。氯化鈉注射液（500ml：4.5g，太極西南藥業股份有限公司，批號：20084002）。Na＋-K＋-ATP酶、Ca2＋-Mg2＋-ATP酶、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、琥珀酸脫氫酶（SDH）、大鼠乳酸脫氫酶（LDH）和考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒均購自江蘇晶美生物科技有限公司，批號202011。

巴戟天生品：取原藥材，除去雜質，洗凈，置蒸制容器內蒸透，趁熱除去木心，或用水潤透后除去木心，切段，干燥。篩去碎屑。鹽巴戟天：取凈巴戟段，用鹽水拌勻，待鹽水被吸盡后，置炒制容器內，用文火炒干。巴戟天每100kg用食鹽2kg。酒巴戟天：取凈巴戟段，用適量黃酒拌勻，悶潤，待酒被吸盡后，置炒制容器內，用文火炒干。巴戟天每100kg用黃酒10kg。

4 供試品制備

4.1 右歸丸陽性對照液制備 右歸丸粉碎，臨用時用0.5%羧甲基纖維素鈉配置成2776.50mg/ml右歸丸液（相當于成人日服劑量10倍）[3-7]；

4.2 巴戟天（生品、鹽炙品、酒炙品）供試品制備 巴戟天（生品、鹽炙品、酒炙品）剪碎，75%乙醇回流提取兩次，每次10倍量，每次提取1h，后藥渣水回流提取2次，每次10倍量，每次提取1h，合并4次提取液減壓濃縮至無醇味，0.5%羧甲基纖維素鈉分別配置成低劑量102.83 mg生藥/mL（相當于成人最大日用劑量10g）、中劑量3084.90mg生藥/ml（相當于成人最大日用劑量10g的30倍）、高劑量6169.80mg生藥/mL（相當于成人日服劑量10g的60倍）混懸液。

4.3 氫化可的松琥珀酸鈉注射液 注射用氫化可的松琥珀酸鈉臨用前用生理鹽水配置成25mg/ml

5 方法

5.1 分組及給藥 SD大鼠，雄性，體重220～260g，SPF級，54只，隨機分為空白組、模型組、陽性組、生品（低、中、高）組、鹽炙（低、中、高）組，酒炙（低、中、高）組，每組8只。除空白組和模型組灌胃給與等量0.5%羧甲基纖維素鈉溶液外，其余各組灌胃給與相對應的藥物，1次/d，給藥劑量為1mL/100g，給藥前禁食不禁水 12h，持續 25d。

5.2 造模 給藥第3天開始造模，除空白組給與等量生理鹽水外，其余各組肌肉注射氫化可的松琥珀酸鈉注射液 0.1mL/100g，1 次 /d，持續 20d[8]。

5.3 血清采集及測定 末次給藥2h后，10%水合氯醛麻醉，腹主動脈采血，離心，取血清，按試劑盒要求進行測定，或-80℃保存，備用。

5.4 肝組織取樣、勻漿及蛋白濃度測定[9-11]上述實驗動物采血后，迅速摘取同一部位肝組織，冷生理鹽水快速洗凈，濾紙拭干，精確稱量，按照質量（g）：體積（ml）為1∶9的比例，冰層上制成肝組織勻漿，2500r/min離心10min，取上清液按照試劑盒說明書測定 Na＋-K＋-ATP酶、Ca2＋-Mg2＋-ATP酶、SDH 和LDH。采用考馬斯亮藍法測定蛋白總量。

6 統計學方法

數據用SPSS 20.0統計軟件處理，組間比較采用單因素方差分析，各組數據均以（）表示

結 果

1 巴戟天酒炙和鹽炙對腎陽虛肝組織中能量代謝相關酶的影響

與空白組正常值比較，模型組大鼠肝組織中Na＋-K＋-ATP酶、Ca2＋-Mg2＋-ATP酶、SDH 和 LDH活性均有顯著的下降（P＜0.01）。給藥干預后，相較于模型組，生品組雖無顯著差異，但趨勢明顯。鹽炙組在中劑量和高劑量上表現出顯著的改善作用，具體為中劑量組可顯著升高Na＋-K＋-ATP酶（P＜0.05）和Ca2＋-Mg2＋-ATP 酶活性（P＜0.01），高劑量組 4種酶的活性均能得到顯著升高（P＜0.05）。酒炙組較鹽炙組改善作用則更加明顯，中劑量組和高劑量組均能顯著提升4種酶的活性（P＜0.05），且在Ca2＋-Mg2＋-ATP酶活性和LDH的提升上極為顯著（P＜0.01）.相同劑量下，鹽炙組與酒炙組比較無統計學上的顯著差異，但提升率高于鹽炙組。見表1。

表1 巴戟天酒炙前后對腎陽虛大鼠肝組織中能量代謝相關酶的影響（n=8，）

表1 巴戟天酒炙前后對腎陽虛大鼠肝組織中能量代謝相關酶的影響（n=8，）

注：與正常組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

LDH/U·mgprot-1空白組 - 1.646±0.363 1.725±0.182 8.972±1.223 3466.0981±473.189模型組 - 0.944±0.274** 0.917±0.209** 5.613±0.853** 1976.564±327.823**陽性組 2776.50 1.467±0.186## 1.601±0.231## 7.917±1.159## 3069.571±361.189##生低組 102.83 1.005±0.239 1.069±0.189 5.771±1.117 2291.427±346.317生中組 3084.90 1.092±0.238 1.135±0.171 5.401±1.261 2327.883±389.502生高組 6169.80 1.025±0.174 1.167±0.255 6.300±1.172 2238.320±576.081鹽低組 102.83 1.110±0.212 1.119±0.262 6.434±0.951 2352.688±252.851鹽中組 3084.90 1.253±0.185# 1.286±0.168## 6.944±1.015 2424.429±392.348鹽高組 6169.80 1.292±0.269# 1.258±0.285# 7.117±1.082# 2575.032±267.076#酒低組 102.83 1.099±0.2501 1.164±0.213 6.507±0.973 2317.112±268.890酒中組 3084.90 1.383±0.299# 1.370±0.252## 7.070±1.266# 2521.817±279.903#酒高組 6169.80 1.347±0.211# 1.352±0.253## 7.343±1.176# 2712.398±541.225##組別 生藥劑量/mg·mL-1 Na＋-K＋-ATP酶/U·mgprot-1 Ca2＋-Mg2＋-ATP酶/U·mgprot-1 SDH/U·mgprot-1

2 巴戟天酒炙和鹽炙對腎陽虛肝血液中能量代謝相關物質的影響

與空白組正常值比較，模型組大鼠血清TC和GLU含量均有顯著的下降（P＜0.01），TG含量有顯著的升高（P＜0.01）。給藥干預后，相較于模型組，生品組雖在統計學上未能有顯著改善，但是各項指標水平值較模型組有恢復的趨勢；鹽炙中劑量組能顯著降低TG含量（P＜0.05），高劑量組對3個指標均能呈現顯著的改善作用（P＜0.05）；酒炙中劑量組能顯著升高TC水平值（P＜0.05），高劑量組亦是能3個指標均顯著改善（P＜0.05），并且對TC水平值得恢復還具有極顯著作用（P＜0.01）。相同劑量下，鹽炙組和酒炙組比較無統計學上的顯著差異，且水平值改善率大致相當。見表2。

表2 巴戟天酒炙前后對腎陽虛大鼠肝血液中能量代謝相關物質的影響（n=8，）

表2 巴戟天酒炙前后對腎陽虛大鼠肝血液中能量代謝相關物質的影響（n=8，）

注：與正常組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別 生藥劑量 /mg·ml-1 TC/mmol·L-1 TG/mmol·L-1 GLU/mmol·L-1空白組 - 1.508±0.077 0.682±0.133 4.726±0.849模型組 - 1.262±0.090** 0.963±0.152** 2.880±0.823**陽性組 2776.50 1.435±0.059## 0.609±0.134## 4.199±0.834#生低組 102.83 1.264±0.074 0.863±0.166 3.350±0.775生中組 3084.90 1.270±0.065 0.840±0.226 2.735±1.033生高組 6169.80 1.332±0.031 0.892±0.166 3.303±1.003鹽低組 102.83 1.316±0.050 0.807±0.134 3.098±1.001鹽中組 3084.90 1.346±0.091 0.741±0.147# 2.928±0.716鹽高組 6169.80 1.385±0.049# 0.752±0.179# 4.035±1.322#酒低組 102.83 1.303±0.105 0.856±0.097 3.230±0.913酒中組 3084.90 1.363±0.46# 0.816±0.146 3.879±0.896酒高組 6169.80 1.387±0.103## 0.711±0.141# 4.065±0.544#

結論與討論

巴戟天生品雖對模型組大鼠肝組織中能量代謝相關酶和血液中能量代謝相關物質水平值改善無統計學上的顯著差異，但是作用趨勢明顯，給藥后各水平值均得到一定程度上的恢復，并且會隨著劑量得增加而得到提升，說明巴戟天本身既有改善腎陽虛的虛寒癥狀作用。鹽炙組和酒炙組均能在一定程度上顯著恢復異常的水平值（P＜0.01或P＜0.05），說明鹽炙和酒炙均有提高巴戟天溫腎助陽的炮制增效作用。相同劑量下，雖然酒炙組和鹽炙組的比較無統計學上的顯著差異，但是從水平值的增長率可以看出，酒炙組的提升率高于鹽炙組，且起效劑量亦有一定程度上的降低，說明在腎陽虛的機體能量代謝上，酒炙的效果可能較鹽炙更優。

巴戟天是臨床常用溫補腎陽藥，現存記載最早的炮制方法為“去心”，巴戟天酒炙最早見于《雷公炮炙論》：“凡使，須用枸杞子湯浸一宿，待稍軟，漉出，卻，用酒浸一伏時，又漉出，用菊花同熬，令焦黃，去菊花，用布拭令干用”，是巴戟天除去心外最早的炮制記載。巴戟天鹽炙最早見于《太平惠民和劑局方》：“鹽湯浸打去心”。傳統炮制理論認為，巴戟天心有“令人煩躁”的副作用，故應棄去；鹽味咸，咸入腎，故鹽炙可引藥入腎經，巴戟天鹽炙引藥歸經，增強其療效；酒活血通絡，祛風散寒，巴戟天酒炙可增強在治療風濕方面的作用。但是，酒味辛、甘，性大熱，亦有熱者益熱和辛甘化陽的作用，且中醫腎陽虛所表現出的臨床證候恰為虛寒證候。因此，從理論上，酒炙也可能具有增強巴戟天溫腎助陽的炮制作用。而上述實驗結果也證明了，巴戟天酒炙在腎陽虛模型大鼠機體上的能量代謝作用不弱于鹽炙，且隱隱有優于鹽炙的趨勢。但是在其它方面，如改善生殖能力，治療陽痿或宮冷不孕等炮制作用尚需進一步的對比研究，以期闡明酒炙在溫腎助陽上是否具有與鹽炙相似的炮制增效作用。