細胞塊結合免疫組化技術在惡性胸腔積液病理診斷中的 效果觀察

方曉華

(江門市中心醫院，廣東 江門 529000)

0 引言

胸腔積液是臨床多發呼吸系統疾病之一，大部分是因為胸膜間皮瘤、非小細胞肺癌等發展而形成的。臨床上，主要應用胸腔積液脫落的細胞實施檢查，該方法能夠將胸腔積液中是否存在腫瘤進行判斷，其在疾病診治中具有重要作用。以往關于胸腔積液的判斷以胸腔積液細胞涂片法為主，但是因為間皮細胞缺乏顯著增生或者細胞形態結構并不明顯，進而導致誤診的出現，漿膜腔原發性間皮性腫瘤與轉移性癌的鑒別診斷難度較大[1]。近年，在醫療技術水平日益提高的背景下，免疫組化染色技術使用范圍越來越廣，其能夠有效鑒別診斷間皮性腫瘤與轉移性癌。基于此，本次研究針對細胞塊結合免疫組化技術在惡性胸腔積液病理診斷中的應用效果進行分析，具體如下。

1 資料與方法

1.1 資料

隨機抽選本院2019年1月至2021年2月接收的30例惡性胸腔積液患者，其中有18例男，12例女；最小年齡36歲，最大年齡67歲，均值(52.23±3.15)歲。原發腫瘤組織學分型：6例小細胞癌，9例鱗癌，15例腺癌。經醫院醫學倫理委員會批準。納入標準：惡性胸腔積液診斷標準與《惡性胸腔積液診斷與治療專家共識》相符；自愿簽署研究同意書。排除標準：合并器官功能障礙；伴有全身感染；具有精神疾病史；哺乳期或者妊娠期婦女。

1.2 方法

1.2.1 細胞學涂片

標本靜置大約6-12h，去除上清液，向試管中放置50mL進行5min離心操作，離心速度為每min2000r，然后將上清液去除，均勻混合底部0.5mL左右的細胞液，在載玻片上均勻涂抹，然后采用95%的乙醇進行10-30min固定，采用HE染色。

1.2.2 制作細胞塊

在50mL的離心管中放入胸腔積液，按照每min2500r的速度進行大約10min的離心操作，多次離心后，將底部沉渣保留下來，將上清液去除，添加4%的中性多聚甲醛進行固定，離心靜置1h后向包埋盒中放置沉淀物，實施常規脫水包埋，然后切片，厚度約0.4μm，最后實施HE染色。

1.2.3 免疫組化染色

利用免疫組化技術分析惡性胸腔積液細胞塊切片，應用DAB顯色實際與抗體，試驗期間，免疫組化染色方法嚴格按照說明書展開。細胞蠟塊切片，厚度為4μm，常規烤片1h脫蠟直至出水，過氧化氫將內源性過氧化物酶阻斷，微波抗原修復，添加一抗4℃孵育過夜，DAB顯色，然后應用蘇木素再次染色，PBS代替一抗為陰性對抗。

1.3 觀察指標

分析細胞角蛋白7(CK7)、腎母細胞瘤基因1(WT-1)、癌胚抗原(CEA)、甲狀腺轉錄因子1(TTF-1)、淋巴細胞抗原(CD56)、細胞角蛋白5/6(CK5/6)和嗜鉻素A(CgA)陽性檢出狀況[2]。

1.4 統計學方法

2 結果

小細胞癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽 性 表 達 率 分 別 是0.00%、16.67%、83.33%、0.00%、100.00%、100.00%、16.67%、3.33%；鱗 癌 中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽 性 表 達 率 分 別 是100.00%、22.22%、11.11%、100.00%、22.22%、0.00%、22.22%、33.33%；腺癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽性表達率分別是20.00%、13.33%、100.00%、0.00%、13.33%、0.00%、86.67%，詳見表1。

表1 分析不同組織類型肺癌惡性胸腔積液細胞塊中各項指標的表達[n(%)]

3 討論

胸腔積液是許多肺癌患者并沒有發現原發病灶前的主要癥狀，如何確診胸腔積液的性質在肺癌組織學分型中具有重要作用。據有關資料顯示[3]，關于非小細胞肺癌的治療方案的制定也是以病理分型為基礎而形成的。

本次研究主要應用胸腔積液離心制作細胞塊方法，同常規涂片方法相比，其具有顯著優勢。常規圖片是在靜置標本后直接展開細胞學涂片，對具有診斷意義的細胞進行查找，但是該方法很可能混有炎性滲出物和紅細胞，而且標本細胞密度偏低，導致細胞涂片厚度不同，導致多個細胞重疊，增加了惡性腫瘤漏檢率。連續且細胞塊，能夠將組織學結構盡可能的保留下來，包括乳頭結構、腺管和腺泡等，與此同時，細胞塊能夠為基因檢測和免疫組化檢測奠定基礎[4]。本次研究中的胸腔積液細胞塊HE染色切片中可以發現乳頭狀結構和腺管狀結構，鱗癌上也能夠發現與組織學類似的結構特點，小細胞癌中能夠發現被擠壓的腫瘤細胞。為進一步明確具體類型，為臨床治療方案的制定提供參考，需要結合免疫組化檢查方法，通過檢測P63、CEA、WT-1、CK7、DK5/6、CD56等抗體，從而對其診斷價值進行探討。本次研究結果顯示，小細胞癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽性表達率分別是0.00%、16.67%、83.33%、0.00%、100.00%、100.00%、16.67%、3.33%；鱗癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽性表達率分別是100.00%、22.22%、11.11%、100.00%、22.22%、0.00%、22.22%、33.33%；腺 癌 中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽性表達率分別是20.00%、13.33%、100.00%、0.00%、13.33%、0.00%、86.67%，腺癌中，CEA、TTF-1和CK7具有較高的陽性率，TTF-1是一種核蛋白，其主要存在成人Ⅱ型肺泡上皮和肺組織中，大部分肺小細胞癌和肺腺癌經過免疫組化檢查提示TTF-1表現為陽性。此外，腺癌中，CEA和CK7同樣具有良好的表達，尤其是CK7，表達較高，小細胞癌和鱗癌中，該指標表達相對偏低。鱗癌中，P63、CK5/6具有較高的陽性率，P63是一種鱗癌標記物，其具有較高的陽性率和面趕驢，CK5/6主要存在于細胞膜與細胞漿中，小細胞癌及腺癌中未見CK5/6表達，由此可見，該指標具有較高的特異性和敏感性。小細胞癌中，CgA及CD56具有較高的陽性率。據有關資料顯示[5]，免疫組化標記物包括CD56、CgA及Syn，本次研究結果與之相似，于胸腔積液細胞塊中實施免疫組化，小細胞癌中，CgA和CD56具有較高的陽性率。

細胞塊結合免疫組化技術能夠彌補傳統細胞涂片檢查的不足，更好地保存細胞標本，促進診斷準確率的提高[6]。該檢測方法利用許多特異性抗體對細胞有關抗原進行檢測，同時結合酶著色反應將細胞分布狀況、定位和活性等清楚的反映出來，從而對疾病的良性和惡性進行判斷，同時判斷腫瘤類型[7]。因為連續切片，對于多項檢查的實施十分有利，該方法有助于診斷準確率提高，除此之外，該檢查方法具有操作便捷、簡單等特點，能夠對陽性物質準確定位。免疫組化技術利用專業儀器進行染色，能夠盡量減少人為因素造成的影響，確保診斷結果準確性，與此同時，只需要一名人員進行操作，減少了醫療自愿的浪費，該檢查方法檢查設備操作簡單，并不會導致受檢者痛苦程度，對于配合度的改善十分有利[8]。而且以上兩種檢查方法結合對于疾病的鑒別診斷十分有利，其為臨床診治提供了重要數據參考。

總而言之，細胞塊結合免疫組化技術在惡性胸腔積液診斷中具有較高的應用價值，其有助于診斷率提高，鱗癌及腺癌鑒別診斷過程中，建議應用CK5/6、TTF-1和P63；針對小細胞癌的診斷，建議應用CgA與CD56。