CD44、CD166在潰瘍性結腸炎上皮內瘤變中的表達及臨床意義

李瑩 楊蔚峰 寧燕華 黃芳菊 胡馨予

1廣西壯族自治區欽州市第一人民醫院病理科 535000；2廣西壯族自治區欽州市第一人民醫院消化內科 535000

潰瘍性結腸炎（UC）是臨床常見炎性疾病，上皮內瘤變（IN）是結直腸常見息肉，UC-IN是結直腸癌患者癌前病變階段，是導致結直腸癌發生的重要因素。通過分析UC-IN階段腫瘤干細胞標志物表達并采取針對性干預措施，對預防結直腸癌發生或提早干預有重要意義。相關研究指出，腫瘤組織內存在極少數具有自我更新及無限繁殖能力、促進腫瘤發生的細胞——腫瘤干細胞，可分化為不同表型腫瘤細胞，在腫瘤形成階段通過分裂增加數量，從而促使腫瘤復發、轉移［1］。分析、尋找、分離、鑒定腫瘤干細胞是目前臨床研究熱點。CD44是結直腸癌腫瘤干細胞標志物，CD166是間充質干細胞表面標志，在結直腸癌上皮細胞內呈異質性分布，CD166即可作為單獨結直腸癌標志，又與CD44存在協同關系［2］。本研究選取欽州市第一人民醫院UC-IN患者，旨在從CD44、CD166臨床表達方面分析其與腫瘤病理學之間的關系，為臨床診療、預后評估提供參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取欽州市第一人民醫院2018年10月至2021年1月UC-IN患者53例為研究對象，均經病理學檢查確診為UC-IN，術前未進行放化療干預，其中男38例，女15例；年齡范圍為32～64歲，年齡（47.95±7.16）歲。標本切除后24 h內采集對應癌組織，甲醛固定后常規石蠟包埋、切片，厚度4μm。正常腸黏膜組織者14例（與癌組織相距＞5 cm，且HE染色確定腸黏膜組織正常），其中男10例，女4例；年齡范圍為30～67歲，年齡（49.05±7.31）歲。UC-IN患者與正常腸黏膜組織者性別、年齡等資料比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）。患者及家屬知情同意，且簽署知情同意書；本研究經欽州市第一人民醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法（1）制作組織芯片：標本組織常規病理切片，行常規HE染色，經2名病理學專家（病理科主任醫師1名，擅長軟組織、淋巴組織及皮膚腫瘤的病理診斷；病理科副主任醫師1名，擅長食管癌、肺癌、胸壁腫瘤外科治療及綜合治療）以雙盲法切片，HE切片上標記典型病變位置，并與蠟塊對照，蠟塊相應位置做標記；制作2 cm×4 cm空白蠟塊，通過組織芯片制備儀對空白蠟塊打孔，直徑為1.5 cm，根據HE切片標記位置在標本組織蠟塊對應位置獲取索要組織置入空白蠟塊中，記錄組織編號里重復上述步驟制作3塊標本組織芯片蠟塊。（2）免疫組化法：標本組織芯片進行4μm切片，敷貼在經3-氨基丙基三乙氧基硅烷處理的載玻片，置入烤箱，加熱30～60 min，采用免疫組化法標記CD44、CD166。具體步驟：①活檢組織標本切片應用乙醇進行脫水，梯度分別為75%、85%、90%、95%、100%；②行二甲苯透明處理，浸蠟，所有操作在組織處理機中進行；③石蠟包埋，切片，厚度控制在4～5μm；④應用二甲苯及100%、95%、90%、85%、75%梯度乙醇行脫蠟處理；⑤4μm常規蠟塊切片脫蠟至水；⑥以蘇木精實施3 min染色處理，沖洗；⑦以鹽酸酒精（1%）行分化處理，沖洗；⑧以氨水（1%）實施5 s返藍處理，沖洗；⑨以伊紅實施1 min染色，沖洗；⑩應用乙醇進行脫水，梯度分別為75%、85%、90%、95%、100%；?行二甲苯透明處理后，中性樹膠封片。（3）判定標準。CD44：陽性表達于細胞膜，少量表達于胞漿，以半定量法計數，＞25%記為（+++），5%～25%記為（++），＜5%記為（+），未見陽性細胞記為（-）。CD166：陽性染色為胞膜或胞漿存在棕黃色顆粒沉著，根據陽性細胞百分比確定陽性強度，＞10%記為（++），5%～10%記為（+），＜5%記為（-）。每個視野查100個細胞，40×物鏡下查10個視野，統計陽性細胞數。

1.3 觀察指標（1）統計CD44、CD166染色結果。（2）分析比較CD44、CD166在UC-IN及正常腸黏膜中的表達。（3）分析UC-IN患者不同病灶浸潤深度CD44、CD166的臨床表達。（4）分析不同病理分級UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達。

1.4 統計學分析 通過SPSS22.0處理數據，符合正態分布的計量資料以（±s）表示，組間行獨立樣本t檢驗，計數資料以例（%）表示，行χ2檢驗，等級資料比較采用Ridit檢驗，檢驗標準α＝0.05。

2 結 果

2.1 CD44、CD166染色結果統計 53例UC-IN患者CD44陽性細胞沿腺管基底側呈小灶性弱陽性染色，CD166陽性細胞沿腺管基底側呈黃色胞漿染色；14例正常腸黏膜組織者CD44均為陰性染色，CD166基本為陰性染色，部分可見腺管基底側小灶性淺黃色胞漿染色，見圖1～2。

圖1 CD44在正常腸黏膜（A）及潰瘍性結腸炎上皮內瘤變（B）中的表達 ×40

2.2 CD44、CD166在UC-IN及正常腸黏膜中的表達UC-IN患者CD44、CD166表達水平明顯高于正常腸黏膜者（均P＜0.05），見表1。

表1 CD44、CD166在UC-IN及正常腸黏膜中的表達[例（%）]

2.3 不同病灶浸潤深度UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達 病灶浸潤至漿膜層者CD44、CD166表達水平明顯高于病灶浸潤至肌層者（均P＜0.05），見表2。

表2 不同病灶浸潤深度的UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達[例（%）]

2.4 不同病理分級UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達 病理分級為中的UC-IN患者CD44、CD166表達水平均低于病理分級為低的UC-IN患者（均P＜0.05），見表3。

表3 不同病理分級的UC-IN患者CD44、CD166的臨床表達[例（%）]

圖2 CD166在正常腸黏膜（A）及潰瘍性結腸炎上皮內瘤變（B）中的表達 ×40

3 討 論

UC是病因尚未明確的結直腸慢性非特異性炎性反應，病變位置多局限于大腸黏膜及黏膜下層，可延伸至整個結腸，且病程較長，易反復發作。UC-IN是結腸癌惡性病變前的特殊階段，在細胞排列及細胞形態學方面與正常組織相比具有顯著改變，生物學上具有侵襲性，細胞學及組織結構學上具有異型性。結直腸癌的發生是多階段、多步驟、多基因參與的疾病，近年來發病率明顯上升，其中80%以上的結直腸癌患者均由UC-IN惡性病變進展所致［3］。因此，分析UC-IN患者腫瘤標志物的表達水平具有重要臨床意義。

近年來腫瘤疾病發病率有上升趨勢，關于腫瘤干細胞的研究逐漸成為臨床研究熱點，分析腫瘤標志物特性的研究逐漸受到臨床重視。既往研究證實，多種腫瘤細胞內均存在不同程度CD44、CD166表達，可作為腫瘤細胞標志物，對臨床診療、預后評估有一定價值［4-5］。但目前關于從腫瘤干細胞角度分析CD44、CD166與腫瘤進展的機制研究相對較少。CD44是跨膜糖蛋白，同時是細胞表面黏附分子，多在腫瘤細胞表面或間質細胞、淋巴細胞、正常組織內表達，有研究指出CD44可作為白血病腫瘤標志物，同時可作為胃癌、肺癌、結直腸癌、乳腺癌等腫瘤標志物［6-7］。CD44具有黏附性，可促使腫瘤細胞呈浸潤性生長，對促進腫瘤發生、進展及轉移、復發有重要關系［8］。本研究數據顯示，正常腸黏膜者未見CD44表達，UC-IN患者沿腺管基底側呈小灶性表達，主要表達于細胞膜，部分胞漿部位存在淺染色。通過數據分析顯示，CD44表達與病灶浸潤深度、病理分級密切相關，病灶浸潤至漿膜層者、病理分級較低者CD44呈高表達。

CD166是淋巴細胞抗原CD6配體、免疫球蛋白基因超家族的跨膜蛋白，是活化白細胞黏附分子，廣泛分布于多分化潛能間葉祖細胞、成纖維細胞、骨髓細胞、淋巴細胞、胸腺上皮細胞，具有較強侵襲性，是評估腫瘤浸潤轉移的重要標志物，在結直腸癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌等多種腫瘤中均存在過度表達［9-10］。CD166過度表達可加快腫瘤細胞繁殖，促進腫瘤進展［11-12］。本研究數據顯示，正常腸黏膜者CD166基本為陰性染色，UC-IN患者CD166陽性細胞沿腺管基底側呈黃色胞漿染色，同時病灶浸潤深度、病理分級與CD166過度表達密切相關，其中病灶浸潤至漿膜層者、病理分級較低者則CD166表達越明顯。

上述數據及分析結果表明CD44、CD166與UC-IN患者病變程度密切相關，可反映UC-IN患者病灶浸潤情況及分化程度，提示在UC-IN患者病變過程中CD44、CD166存在重要促進作用，二者可能存在相關聯系共同對腫瘤細胞惡性分化、浸潤起到促進作用。本研究通過分析CD44、CD166兩種抗體，同時標記雙陽性細胞，得出在UC-IN病變過程中CD44、CD166均存在明顯變化，提示二者對腫瘤細胞轉移有促進作用，可作為腫瘤細胞標志物。CD44、CD166與UC-IN病灶惡化、浸潤程度關系密切，但通過臨床檢測是否可評估結腸癌患者生物學行為，尚需進一步數據證實。

綜上，CD44、CD166在UC-IN患者中呈高表達，且與病灶浸潤深度、病理分級關系密切，通過檢測其水平對UC-IN臨床診療、預后評估具有一定價值，有助于分析UC-IN患者病灶惡性病變風險，臨床應用價值較高。