重癥急性胰腺炎患者血漿RUNX3、IL-17表達與疾病進展相關性分析

荊曉晴,何永權,姚麗

1寧夏回族自治區第五人民醫院石嘴山中心醫院內一科(寧夏石嘴山 753200)；2寧夏回族自治區人民醫院消化內科(寧夏銀川 750002)

重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)是一種全身性炎癥反應，其往往起病急、進展快，且病死率高達20%～30%[1-2]。目前隨著臨床對于SAP的深入研究，治療效果有很大進展，但結果仍不可觀[3]。因此尋求能夠早期診斷并評估SAP進展程度的可靠生物學指標對及時治療SAP具有重要意義。人RUNT相關轉錄因子(Runt-related transcription factor，RUNX)是細胞信號傳導過程的轉錄因子，調控胚胎發育過程中細胞基因表達，其中RUNX3是RUNT家族最小一員，是一種抑癌基因，能夠調控細胞生長、發育等，也可以調節T、B細胞，參與炎癥反應[4-6]。趙春娜等[7]研究發現，與健康對照組比較，慢性萎縮性胃炎患者外周血中RUNX3 mRNA和蛋白表達水平均明顯降低，可能是慢性萎縮性胃炎生物標志物。Affandi等[8]研究發現，與健康對照組比較，系統性硬化癥患者樹突狀細胞中轉錄因子RUNX3水平顯著降低，且與患者病情嚴重程度有關。白細胞介素-17(interleukin-7，IL-17)是一種由活化T細胞產生的致炎因子，可以激活T細胞，刺激上皮細胞、內皮細胞等產生多種細胞因子，導致炎癥反應。劉雋等[9]動物實驗研究發現，與正常對照組小鼠相比，急性胰腺炎模型組小鼠血清IL-17水平顯著升高。然而，有關RUNX3、IL-17在SAP中表達水平及與病情進展相關性研究鮮有報道。因此本研究探討SAP患者血漿RUNX3、IL-17表達及與疾病進展相關性，以期為尋求早期評估SAP進展程度的可靠生物學指標提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月至2019年3月本院ICU收治的SAP患者80例作為觀察組，男38例，女42例，年齡25～73歲，平均(41.66±5.77)歲。入ICU 24 h內急性生理與慢性健康評分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation scoreⅡ，APACHE Ⅱ評分)9～31分，平均(18.77±5.12)分，根據APACHE Ⅱ評分[10]高低進一步分為兩組：評分<20分組(n=37)，評分>20分組(n=43)。

納入標準：(1)符合中華醫學會胰腺外科學組制定的重癥急性胰腺炎診斷標準[11]；(2)APACHE Ⅱ評分≥8分；(3)發生單器官或多器官功能衰竭，持續時間>48 h患者；(4)患者及家屬知情同意。

排除標準：(1)臨床資料不全者；(2)既往有慢性及特發性胰腺疾病者；(3)胰腺占位者；(4)嚴重心、肝、腎等臟器功能不全者。

另選取同期健康體檢者80例為研究對象作為對照組，男36例，女44例，年齡25～74歲，平均(40.89±6.12)歲。本研究經本院醫學倫理委員會批準，患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2 治療方法 根據SAP治療原則[12]進行：(1)加強心電監護，密切觀測生命體征變化；(2)維持水電解質、酸堿平衡；(3)禁食及進行胃腸減壓；(4)預防性應用抗生素；(5)鎮靜、解痙、止痛；(6)給予腸內營養支持；(7)灌腸通便；(8)維護器官功能；(9)必要時立即采取手術治療。

1.3 標本采集 分別抽取對照組于體檢當天、觀察組于入院第2天清晨空腹靜脈血3 mL，置于EDTA抗凝管中，在20℃條件下離心15 min(3 000 r/min)分離得到血漿，-80℃保存于冰箱。

1.4 指標觀察 詳細記錄患者一般資料，包括性別、年齡、體質指數、吸煙、飲酒、高血壓、中性粒細胞計數、白細胞計數情況并進行比較。采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血漿RUNX3蛋白及IL-17水平，試劑盒(貨號：ND896G、MQ627J)均由美國R&D公司提供，所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

2 結果

2.1 受試者臨床資料比較 對照組與觀察組受試者性別、年齡、體質指數、吸煙、飲酒、高血壓情況比較差異無統計學意義(P>0.05)，中性粒細胞計數、白細胞計數差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 對照組與觀察組受試者臨床資料比較

2.2 對照組與觀察組受試者血漿RUNX3、IL-17水平比較 與對照組比較，觀察組患者血漿RUNX3蛋白水平顯著降低(P<0.05)，IL-17水平顯著升高(P<0.05)。見表2。

表2 對照組與觀察組受試者血漿RUNX3、IL-17水平比較

2.3 評分<20分組、評分>20分組受試者血漿RUNX3蛋白、IL-17水平比較 與評分<20分組比較，評分>20分組患者血漿RUNX3蛋白表達水平顯著降低(P<0.05)，IL-17水平顯著升高(P<0.05)。見表3。

表3 評分<20分組、評分>20分組受試者血漿RUNX3蛋白、IL-17水平比較

2.4 觀察組血漿RUNX3、IL-17水平與APACHEⅡ評分相關性分析 Pearson相關分析顯示，血漿RUNX3蛋白水平與APACHEⅡ評分呈負相關(r=-0.609，P<0.05)，血漿IL-17水平與APACHEⅡ評分呈正相關(r=0.503，P<0.05)。

2.5 二元logistic回歸分析SAP危險因素 以是否發生SAP為因變量，以單因素分析中差異有統計學意義的白細胞計數、中性粒細胞計數、血漿RUNX3蛋白、IL-17水平為自變量，進行二元logistic回歸分析。結果顯示，血漿RUNX3蛋白低表達、IL-17高表達是SAP危險因素(P<0.05)，見表4。

表4 SAP二元logistic回歸分析

2.6 血漿RUNX3蛋白、IL-17水平對SAP診斷價值 ROC曲線顯示，血漿RUNX3蛋白水平診斷SAP的ROC曲線下面積為0.874(95%CI：0.822～0.926)，截斷值為163.78 pg/mL，敏感度和特異度分別為89.5%、83.6%；血漿IL-17水平診斷SAP的ROC曲線下面積為0.879(95%CI：0.832～0.927)，截斷值為221.62 pg/mL，敏感度和特異度分別為81.3%、76.6%；兩者聯合檢測診斷SAP的ROC曲線下面積為0.951(95%CI：0.925～0.977)，靈敏度和特異度分別為92.5%、83.7%，見圖1。

圖1 血漿RUNX3蛋白、IL-17水平診斷SAP的ROC曲線

3 討論

SAP是急性胰腺炎的特殊類型，主要臨床表現為腹痛、高熱、休克、呼吸異常及消化道出血等，起病急驟且進展迅速，病情較危重，嚴重情況下可導致患者死亡[13]。多年來學者對SAP研究逐漸深入，但在治療方面仍然不太樂觀。因此尋求診斷SAP早期病情嚴重程度的可靠生物學指標并給予針對性治療以降低患者死亡率在臨床尤為迫切。

RUNX3廣泛表達于骨髓、外周血、T細胞、B細胞等中，通過對細胞發育、信號轉導等生物學過程的調控，參與調節T細胞、B細胞等的分化與成熟，進而調控炎癥反應及免疫應答[14]。門帥等[15]研究顯示，與健康對照組患兒比較，毛細支氣管炎組患兒血清RUNX3 mRNA水平顯著降低，且提示檢測RUNX3 mRNA水平對毛細支氣管炎有一定診斷價值。張小春等[16]研究顯示，與未感染幽門螺桿菌的慢性胃炎患者比較，幽門螺桿菌感染的慢性胃炎患者胃黏膜組織RUNX3蛋白水平顯著降低，且能反映胃黏膜損傷程度。本研究結果顯示，觀察組患者血漿RUNX3水平顯著低于對照組，與以往炎癥反應疾病中表達趨勢一致，提示血漿RUNX3蛋白水平異常低表達可能與SAP發生發展有關。IL-17由CD4+T細胞亞群Th17細胞分泌，IL-17受體IL-17R廣泛表達于多種類型細胞，IL-17與IL-17R結合后被活化，可進一步招募多種炎性細胞(如中性粒細胞、巨噬細胞等)，加重局部炎癥反應[17]。解松齡等[18]研究顯示，與健康對照組比較，急性胰腺炎組患者外周血中IL-17表達水平顯著升高，且可反映病情嚴重程度。許安文等[19]研究顯示，與給予烏司他丁治療的對照組高脂血癥相關性早期急性胰腺炎患者比較，給予丹參酮ⅡA磺酸鈉聯合烏司他丁治療的觀察組患者治療有效率顯著增加，且血清IL-17水平顯著降低。本研究結果顯示，觀察組患者血漿IL-17水平顯著高于對照組，與以往研究趨勢一致，提示血漿IL-17水平異常高表達可能與SAP發生發展有關。臨床存在多種評分系統評估SAP病情嚴重程度及預后情況，優缺點不一，側重點不同。目前應用較多的是APACHEⅡ評分系統，APACHEⅡ評分包括12個急性生理指標，結合年齡因素、慢性健康評分和格拉斯哥昏迷評分，共計15項，初期僅入院后評分，之后每天或隔天進行動態評分，評分≥8分或出現主要器官功能不全則診斷為SAP[20]。APACHEⅡ評分可一定程度上對SAP嚴重程度和患者主要器官的受累程度做出綜合反映，能有效監測病程進展。

本研究進一步發現，與評分<20分組比較，評分>20分組SAP患者血漿RUNX3蛋白表達水平顯著降低，IL-17水平顯著升高；Pearson相關分析顯示，血漿APACHEⅡ評分與血漿RUNX3蛋白水平呈負相關，與血漿IL-17水平呈正相關。進一步提示血漿RUNX3蛋白異常低表達、IL-17水平異常高表達可能與SAP患者疾病進展及病情嚴重程度有關。二元logistic回歸分析結果顯示，血漿RUNX3蛋白低表達、IL-17高表達是SAP危險因素，提示臨床應對此類患者加以重視，且監測兩者水平變化可能對SAP有一定診斷價值。最后ROC曲線顯示，血漿RUNX3蛋白、IL-17水平預測SAP ROC曲線下面積分別為0.874、0.879，兩者聯合檢測預測SAP ROC曲線下面積為0.951。提示兩者聯合檢測對SAP有較高診斷價值，可為臨床診斷及評估SAP病情進展提供一定參考。

綜上所述，血漿RUNX3蛋白低表達、IL-17高表達是SAP危險因素，兩者聯合檢測對SAP有較高診斷價值，可為SAP早期診斷提供一定輔助作用。本研究樣本量少，沒有對血漿RUNX3蛋白、IL-17在SAP中具體作用機制作深入研究，后期應加大樣本量對具體作用機制作進一步探討。