從一道試題再說血細胞計數板的使用

徐業義

（常州市田家炳高級中學 江蘇常州 213000）

1 試題（部分）

（2021蘇錫常鎮高三一模生物試題20）（3）用移液器吸取少量酵母菌培養液，從計數板的_______（填圖1字母）處沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴。加樣后觀察血細胞計數板側面，不正確的是_______（填圖2字母）。

圖1 血細胞計數板示意圖

圖2 血細胞計數板側面示意圖

2 題目分析，問題聚焦

本小題的第一空考查血細胞計數板使用的培養液添加位置問題。圖1中有4個點可供選擇，但究竟從哪個點（哪些點）滴加才能使培養液滲入到計數室呢？圖2中供選答案A和B的區別是：A圖表示吸掉了多余的培養液，內側凹槽內不再有培養液。B圖表示沒有吸掉多余培養液，內側凹槽內仍有培養液。內側凹槽內有培養液對實驗結果會有影響嗎？下面分別通過實驗來加以說明。

2.1 培養液該從何處滴入才能滲入到計數室

血細胞計數板在使用時要“先將蓋玻片放在血細胞計數板的計數室上，用吸管吸取培養液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養液自行滲入”。d處被蓋玻片覆蓋，不處于蓋玻片的邊緣，培養液無法從d處滴入，其余3處都處于蓋玻片的邊緣，滴入培養液能滲入計數室嗎？筆者實際操作結果是：從a、c兩處滴入培養液效果是一樣的，都只能滲入到外側平臺而無法進入內側凹槽（圖3），當然也就不能到達計數室。從b處滴入，1滴可滲入本側計數室，再滴3滴（平均）可滲入對側計數室（利用血細胞計數板計數屬于定量實驗，需要多次測量取平均值，所以一般是兩個計數室都要有培養液滲入）。因此，就試題給定的4個位置來說，只能從b處滴入。除了b處，還有其他滴入位置嗎？嘗試了圖3中的e處，發現滴入的培養液滴數與滴入b處的相近，1滴滲入本側計數室，再滴2.8滴（平均）滲入對側計數室。要使兩側計數室都有培養液，除了從b（e）處滴入約4滴，還可采用分別從b（e）、g（f）處各滴入1滴，根據最終的計數結果比較，兩種滴加方法效果是相同的。

圖3 血細胞計數板部位及名稱標示（血蓋片尺寸22 mm×26 mm）

通過實驗可知，題中第一空只能選擇b，如果還給了e位置，也是要選的。滴加培養液位置的規律為：在血蓋片上、下邊緣的內側凹槽以內（含內側凹槽）任一點滴加培養液都可滲入計數室，而在血蓋片上、下側邊緣內側凹槽（不含）以外、側邊緣滴加培養液則不能滲入計數室。

2.2 內側凹槽有培養液對計數結果有影響嗎

人教版教材要求將“多余培養液用濾紙吸去”。筆者實驗發現用吸水紙從血蓋片邊緣吸多余培養液，有時內側凹槽內培養液會被完全吸掉，有時仍有殘余。只有將吸水紙擰出小尖端伸入到內側凹槽內才能保證將多余培養液完全吸掉。內側凹槽內殘余的培養液會不會使血蓋片處于一定的漂浮狀態，造成血蓋片下表面與計數室底部之間的距離大于0.1 mm而計數不準呢？筆者進行了測試，結果見表1。

表1 內側凹槽內殘余培養液對計數結果的影響

從表1的數據可以明顯看出，內側凹槽內有培養液時計數室內細胞數要大于沒有培養液時的，且計數室內細胞數隨著殘余培養液的增多而增多。在吸去多余培養液時，觀察顯微鏡視野中酵母菌細胞的移動情況，發現：大部分酵母菌處于計數室底部不隨多余培養液的吸掉而移動，有少部分酵母菌處于培養液的上層，隨著多余培養液的吸掉而快速移動，直到內側凹槽內不再有培養液，酵母細胞的移動才逐漸停止。不管是計數結果，還是觀察吸去多余培養液時酵母菌的移動情況，都表明只有將多余培養液完全吸掉（內側凹槽內看不到液體）計數室內的酵母細胞數才不會繼續減少而達到穩定。所以題目第二空必須選圖2的B。

3 實驗拓展：能否用普通蓋玻片代替血蓋片進行計數

血蓋片是血細胞計數板的專用蓋玻片，它比普通蓋玻片要大、厚、重，規格有22 mm×26 mm×0.34 mm（0.45 g）、20 mm×22 mm×0.5 mm（0.5 g）、24 mm×50 mm×0.17 mm（0.47 g）等，第一種最為常見。不少生物實驗室只有普通蓋玻片而沒有血蓋片，普通蓋玻片常用的規格是18 mm×18 mm×0.13 mm（0.09 g），一個蓋玻片只能勉強同時蓋住兩個計數室（兩計數室間的距離約17 mm），且因普通蓋玻片太輕以及水的浸潤現象等原因，從蓋玻片邊緣滴入培養液后常會出現蓋玻片向血細胞計數板邊緣移動的現象。這樣，重新擺正蓋玻片的位置后再吸掉多余培養液時會造成更多細胞已經沉降到計數室底部，從而造成計數數值偏大。筆者通過在普通蓋玻片中央滴加一滴清水來增加蓋玻片的重量而防止滴加培養液時的移動，取得了較好的效果（表2）。

表2 普通蓋玻片是否滴加清水與血蓋片的計數

從實驗結果來看，在普通蓋玻片上滴加清水后與血蓋片的計數結果并無明顯差異。而如果用普通蓋玻片不滴加清水則計數結果明顯要比血蓋片的要大。因此，如果沒有血蓋片必須使用普通蓋玻片時，要盡量保證普通蓋玻片在滴加培養液時不要移動。