T淋巴細胞相關細胞因子對慢性免疫性血小板減少癥兒童甲狀腺功能的影響

姚 虹，宋賢響

徐州市兒童醫院檢驗科，江蘇徐州 221006

免疫性血小板減少癥(ITP)是由免疫因素引起的血小板減少性的出血性疾病，發病的原因多為體液免疫引起的抗血小板抗體的產生和細胞免疫異常引起的免疫耐受受損等[1]。雖然多數兒童ITP具有自限性的特點，但是仍有10%左右的患兒轉為慢性ITP，需要長期使用糖皮質激素和免疫抑制治療。有研究認為，體液免疫導致的血小板抗體產生是ITP發病的直接原因，其參與了前期ITP的發生、發展，但是隨著ITP患兒病情轉為慢性或治療中病情反復，其他免疫學指標亦出現明顯變化，可能伴發自身免疫性的甲狀腺疾病等[2-4]。本研究對慢性ITP患兒T淋巴細胞相關細胞因子進行分析，觀察其水平變化情況，同時分析其對甲狀腺功能的影響，以期為ITP的臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年8月至2019年12月在本院就診的慢性ITP患兒62例作為慢性組，均按照《兒童原發性免疫性血小板減少癥診療建議》[5]診斷。納入標準：(1)符合慢性ITP的診斷標準；(2)病情反復且病程超過12個月。排除標準：(1)合并系統性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病(除外自身免疫性甲狀腺炎)；(2)合并其他疾病，如再生障礙性貧血和白血病等；(3)近1個月內使用過藥物治療，如大劑量糖皮質激素、丙球蛋白、左旋甲狀腺素或者免疫抑制劑等。另選取同期急性ITP患兒60例作為急性組，體檢健康兒童60例作為健康組。慢性組男41例，女21例；年齡3～15歲，平均(6.6±2.3)歲。急性組男38例，女22例；年齡2～13歲，平均(4.1±2.0)歲。健康組男36例，女24例；年齡2～12歲，平均(5.3±2.8)歲。本研究獲得本院倫理委員會批準，所有患兒及其家屬對本研究知情同意，并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1治療方法 慢性組、急性組所有患兒的治療方案選擇符合診療指南建議，具體方案為人免疫球蛋白1 g/(kg·d)注射，使用2 d；潑尼松2 mg/(kg·d)口服，連用4～6周；如果患兒不能耐受，可以換用甲潑尼龍1.6 mg/(kg·d)注射，療程不變。所有患兒在治療過程中均監測其血小板和皮膚黏膜的出血情況，隨時調整用藥，血小板和出血情況未得到明顯改善者，使用地塞米松0.6 mg/(kg·d)沖擊治療，連用4 d。如果療效不佳，可以聯用免疫抑制劑和輸注血小板等進行治療。(1)以IFN-γ均值進行分組，高于均值為IFN-γ高值組，低于均值為IFN-γ低值組，比較兩組T4、FT4、TGAb和TPOAb水平；(2)以IL-17均值進行分組，高于均值為IL-17高值組，低于均值為IL-17低值組，比較兩組T4、FT4、TGAb和TPOAb水平；(3)以IL-2均值進行分組，高于均值為IL-2高值組，低于均值為IL-2低值組，比較兩組T4、FT4、TGAb和TPOAb水平。

1.2.2標本采集與處理 在急性組和慢性組患兒治療后3個月及健康組兒童體檢時采集血液標本4 mL，靜置20 min,待凝固后使用離心機進行離心留取血清，置于-70 ℃冰箱待用。

1.2.3檢測方法 采用BD FACSantoⅡ流式細胞儀(美國BD公司)進行輔助性T淋巴細胞(Th)細胞因子檢測，采用多重微球流式免疫熒光發光法進行白細胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10、IL-17、γ干擾素(IFN-γ)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)檢測，試劑盒購自青島瑞斯凱爾生物科技有限公司。選擇羅氏E602全自動生化免疫分析儀和原裝配套試劑，采用電化學發光法檢測甲狀腺功能相關指標游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、促甲狀腺素(TSH)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、抗甲狀腺球蛋白抗體(TGAb)和抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPOAb)。

2 結 果

2.13組兒童細胞因子水平比較 慢性組、急性組治療后及健康組體檢時IL-2、IL-4、IL-10、IL-17水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)，IL-6和TNF-α水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，慢性組及急性組IL-2和IL-17水平高于健康組，IL-4和IL-10水平低于健康組，差異均有統計學意義(P<0.05)；慢性組IL-2、IL-17和IFN-γ水平高于急性組，IL-4水平低于急性組，差異均有統計學意義(P<0.05)，但慢性組與急性組IL-10水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組兒童細胞因子水平比較

2.23組兒童甲狀腺功能相關指標比較 慢性組、急性組治療后及健康組體檢時T4、FT4、TGAb和TPOAb比較，差異有統計學意義(P<0.05)。慢性組治療后T4、FT4、TGAb和TPOAb水平明顯高于健康組體檢時和急性組治療后，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組兒童甲狀腺功能相關指標比較

2.3慢性組IFN-γ水平對甲狀腺功能相關指標的影響 IFN-γ高值組T4、FT4、TGAb和TPOAb水平較IFN-γ低值組明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 慢性組IFN-γ水平對甲狀腺功能相關指標的影響

2.4慢性組IL-17水平對甲狀腺功能相關指標的影響 IL-17高值組TGAb和TPOAb水平較IL-17低值組明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 慢性組IL-17水平對甲狀腺功能相關指標的影響

2.5慢性組IL-2水平對甲狀腺功能相關指標的影響 IL-2高值組TGAb較IL-2低值組明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 慢性組IL-2水平對甲狀腺功能相關指標的影響

3 討 論

受環境污染等原因的影響，兒童ITP的發病率呈上升趨勢，雖然急性ITP的轉歸良好，但是仍有部分患兒病情逐漸轉變為慢性，這不僅嚴重影響患兒的身體健康，而且隨著病情的反復和進展，有可能合并其他自身免疫性疾病[3]。有研究證實，ITP患者易合并免疫性甲狀腺炎和系統紅斑狼瘡等自身免疫性疾病，這主要是由于ITP的部分發病原因是Th1/Th2系統出現失調，促炎的Th1細胞占據優勢，而抑炎的Th2細胞缺乏，因而免疫耐受失衡，導致自身的免疫系統異常激活，引起自身免疫反應[6-7]。自身免疫性的甲狀腺疾病多因自身免疫耐受缺陷，導致抗甲狀腺的相關抗體TGAb和TPOAb水平升高，進而影響甲狀腺的功能[4]。故本研究主要探討T淋巴細胞相關細胞因子對ITP患兒甲狀腺功能的影響。

本研究結果發現，慢性ITP患兒Th1細胞相關因子IL-2、IL-17和IFN-γ水平升高，說明Th1細胞處于激活狀態，這使機體處于異常的炎癥狀態，促炎因子的高水平表達能夠異常激活免疫細胞，進而對血小板發生免疫反應；Th2細胞相關因子IL-4和IL-10水平明顯降低，這說明抑制炎癥的細胞因子表達不足，不能抑制B淋巴細胞等免疫細胞對血小板產生自身免疫反應，導致免疫耐受缺陷，引起ITP。本研究對3組兒童的甲狀腺功能相關指標進行比較發現，慢性組T4、FT4、TGAb和TPOAb水平較急性組和健康組明顯升高，原因可能是慢性ITP患兒的病情遷延不愈，多伴發甲狀腺功能異常，免疫耐受缺陷，從而導致甲狀腺相關的自身抗體TGAb和TPOAb的產生，引起甲狀腺組織的破壞，最終導致T4和FT4水平升高，但是這種升高程度較低，沒有引起TSH的明顯變化，說明這種影響可能是短期、可逆轉的，尚未發展為甲狀腺功能亢進[8-9]。

本研究結果顯示，IFN-γ、IL-17和IL-2水平均為影響甲狀腺功能的指標，但是IL-17和IL-2僅影響甲狀腺相關抗體，IFN-γ水平不僅可能會影響慢性ITP患兒的最終轉歸，而且還會影響其甲狀腺功能，導致甲狀腺功能亢進等。這也說明兩種疾病可能存在某種關聯。有研究發現，高水平的T4和FT4也會刺激網狀內皮系統的功能，強化其吞噬和破壞血小板的能力，使ITP患兒的血小板破壞更加嚴重，最終導致ITP患兒病情進展和不良轉歸[10-11]。IL-17和IL-2可能主要影響TGAb和TPOAb水平，而TGAb和TPOAb可能與橋本氏甲狀腺炎有關，這說明Th1細胞相關的細胞因子IFN-γ、IL-17和IL-2的水平升高，促進自身抗原的識別，引起免疫系統對甲狀腺組織的識別和攻擊，最終引起自身免疫性的甲狀腺炎[12]。

綜上所述，慢性ITP患者存在明顯的甲狀腺功能異常，其發生原因可能是細胞因子的促炎作用，其IFN-γ、IL-17和IL-2水平升高會影響T4、FT4、TGAb和TPOAb水平，因此在研究和治療慢性ITP時應關注甲狀腺功能。