2018-2019年上饒市串聯質譜篩查新生兒遺傳代謝病情況分析

楊 瑩，蘇小梅，潘淑娟

1.上饒市婦幼保健院產前診斷中心，江西上饒 334000;2.上饒市立醫院檢驗科，江西上饒 334000

新生兒疾病篩查是指醫療保健機構在新生兒群體中，用快速、簡便、敏感的檢驗方法，對一些危及兒童生命、危害兒童生長發育、導致兒童智能障礙的一些先天性、遺傳性疾病進行群體檢查[1]，以便對疾病盡早做出診斷，并進行有效治療，從而保障兒童正常體格發育及智力發育。遺傳代謝病主要因基因突變導致蛋白功能異常而引起的一系列代謝改變，導致受累代謝途徑受阻，產物減少，底物蓄積，以及旁路代謝產物增加，從而導致代謝紊亂，影響多組織器官功能引發一系列的臨床癥狀[2]。串聯質譜(MS/MS)技術在新生兒遺傳代謝病篩查中能在早期發現出生缺陷患兒，并及時予以有效治療[3]。

2017年上饒市婦幼保健院引進了MS/MS篩查，在原有新生兒傳統3項遺傳代謝病的基礎上開展MS/MS檢測，極大地擴大了篩查的病種并提高了新生兒疾病篩查的效率。質譜分析技術因其高通量、高特異性、超敏性成為代謝病診斷的常規檢驗技術，作為新生兒篩查遺傳代謝性疾病的有效手段被廣泛應用[4]。

本研究對上饒市婦幼保健院新生兒篩查中心的15 207例新生兒進行了MS/MS遺傳代謝病篩查，對陽性患兒的篩查結果進行分析，并對其臨床診斷及治療進行追蹤和記錄，探討上饒市新生兒遺傳代謝病的篩查狀況。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年10月至2019年8月于上饒市婦幼保健院新生兒篩查中心進行MS/MS遺傳代謝病篩查的新生兒15 207例。

1.2儀器與試劑 美國生物應用系統公司生產的API-3200MD型串聯質譜儀，美國 PE公司生產的96孔過濾板(濾膜孔徑0.45 μm)、96孔聚丙烯板；純度為高效液相色譜級的乙酰氯、甲醇、正丁醇、乙腈等，純度為99.99%的氮氣。

1.3方法

1.3.1樣品處理 采用API-3200MD型串聯質譜儀對分娩的活產新生兒干血濾紙片標本進行分析檢測。分布在干血濾紙片待測血斑處打孔，置于96孔聚丙烯板中，添加含同位素內標的工作液，覆板，45 ℃ 650～750 r/min振蕩45 min，將反應后標本轉移到V型底微孔板后覆蓋裝載到自動進樣器中，使用適當的內標準品濃度值及采集方法，啟動應用軟件(Analyst MD Software)并創建工作列表進行MS/MS分析。

1.3.2定量分析 采用美國應用生物系統公司軟件ChemoView1.2 版本進行換算分析，根據記錄不同質荷比的離子質量譜，通過將待測樣品峰面積與內標峰面積之比來獲得定量結果。通過線性回歸計算出所測樣品各項指標的濃度。根據結果分析初篩陽性情況，明確MS/MS篩查的初篩陽性率及確診陽性率，統計通過MS/MS篩查的新生兒遺傳代謝病在上饒地區的總體發病率。

1.3.3可疑陽性的處理 由專業醫生根據臨床表現結合標本檢測值進行分析。對初篩可疑陽性患兒進行原血液標本復查及召回復查，進一步加做尿液氣相色譜分析及其他相關實驗室檢查。

1.4統計學處理 采用Excel電子表格統計數據，計數資料以例數或率表示。統計結果采用描述性分析。

2 結 果

2.1新生兒遺傳代謝病篩查情況 15 207例新生兒中初篩可疑陽性360例，召回330例，未召回30例。初篩陽性率2.37%，召回復查后陽性29例，召回陽性率為8.79%，篩查陽性率為1.9‰，確診了4例陽性患兒。陽性預測值為 1.2%。確診病例為短鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥1例，中鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥1例，瓜氨酸血癥Ⅱ型1例，原發性肉堿缺乏癥1例。確診陽性與臨床最終診斷相比準確率為100%。篩查情況見表1。

表1 新生兒MS/MS篩查情況(n=15 207)

2.2遺傳代謝病患兒的MS/MS篩查情況 本研究確診的4例患兒中，短鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥患兒C4、C4/C2、C4/C3升高，中鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥患兒C6、C8、C10、C10∶1等多肉堿升高，瓜氨酸血癥Ⅱ型患兒瓜氨酸、瓜氨酸/精氨酸升高，原發性肉堿缺乏癥患兒C0降低。MS/MS篩查結果見表2。

表2 確診的4例遺傳代謝病患兒情況

2.34例陽性患兒基因診斷結果及隨訪情況 經過飲食、藥物、酶替代治療等方法及處理，4例患兒預后良好。4例陽性患兒具體基因診斷結果及隨訪情況見表3。

表3 4例患兒基因診斷結果及隨訪情況

續表3 4例患兒基因診斷結果及隨訪情況

3 討 論

臨床研究表明，遺傳代謝病是因遺傳因素導致機體正常代謝途徑受阻，如氨基酸代謝病可致各種類氨基酸的異常，脂肪酸氧化代謝病可致血液中酰基肉堿指標異常，大量代謝產物在體內聚集或者發生必需代謝物缺乏可導致機體各組織器官發生不同程度受累并出現臨床癥狀[5]。

短鏈酰基輔酶 A 脫氫酶缺乏癥、中鏈酰基輔酶 A 脫氫酶缺乏癥、瓜氨酸血癥Ⅱ型及原發性肉堿缺乏癥均為常染色體隱性遺傳疾病。本研究中，基因診斷檢測到短鏈酰基輔酶 A 脫氫酶缺乏癥患兒發生ACAD8基因的純合突變，可導致異丁酰輔酶A脫氫酶缺乏造成機體無法正常代謝纈氨酸；中鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥患兒ACADM基因外顯子9存在c.715C>T(pArg239Cys)雜合錯義突變，導致中鏈脂肪酸β氧化受阻導致代謝異常；瓜氨酸血癥Ⅱ型患兒SLC25A13_ex9c.852_855delTATG(p.M285fs)基因有一純合移碼錯義突變；原發性肉堿缺乏癥患兒檢測到SLC22A5基因的2個致病突變，分別為c.338G>A(pCys113Tyr)及c.1472C>G(pSer491Cys),已有相關文獻報道該位點的致病性[6-7]。

短鏈酰基輔酶 A 脫氫酶缺乏癥患兒主要表現在神經系統方面，發育遲緩是最常見的表現。MS/MS技術能夠在無癥狀的情況下篩查出短鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥,因此其發病率較以前明顯增加[8]。中鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥患兒中鏈脂肪酸β氧化受阻導致代謝異常，長期營養不良及感染性疾病為發病的常見誘因。早期發病患兒常表現為嗜睡、嘔吐、急性發病時有典型低血糖癥狀。MS/MS技術可檢測出無癥狀的中鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥新生兒血漿中升高的酰基肉堿，尤其是C8升高明顯，為本病的特征。瓜氨酸血癥Ⅱ型患兒為瓜氨酸血癥Ⅱ型(成人發病型)/希特林缺乏癥，臨床表現為反復黃疸，肝功能受損，無明顯嘔吐、抽搐。原發性肉堿缺乏癥患兒可表現為急性能量代謝障礙、心肌病及肝臟損害。近年研究顯示，遺傳代謝性病臨床表現多樣，可影響患兒全身各組織器官的生長發育[9]。既往由于檢測方法的限制，一些遺傳代謝病患兒不能得到及時確診。MS/MS技術能夠檢測干血濾紙片中多種化合物的濃度，通過干血濾紙片一次檢測，在短時間內檢測出幾十種遺傳代謝疾病，為臨床快速診斷提供技術支持，推動了遺傳代謝病的篩查、診斷和治療。MS/MS技術的應用能夠對遺傳代謝病進行早期篩查、早期診斷，可對陽性患兒及早干預，并且預后較好，特異性強，敏感度高，但其陽性預測值低，且篩查效率需要進一步提高[10]。

本研究結果顯示，上饒市2018年10月至2019年8月篩查量為15 207例，確診陽性4例，新生兒遺傳代謝病的患病率為1/3 802。據統計，臺灣地區新生兒遺傳代謝病的發病率為1/6 219，上海新華醫院篩查的發病率1/3 650，浙江省篩查的發病率1/5 626，國外同類報道的發病率為1/5 000～1/2 000[11]。可見上饒市發病率與上海地區相近，比浙江及臺灣地區略高。雖然篩查率有了明顯提升，但與本市實際分娩量相比，仍有很大部分新生兒未進行MS/MS篩查。另外，仍有部分召回陽性病例未能做進一步檢測，部分遺傳代謝病為急性發作，而間歇期篩查結果可能基本正常，或可導致漏診[12]。

遺傳代謝病雖然發病率低，但是危害極大，若不及時診治，病死率及致殘率極高。目前，隨著MS/MS技術的廣泛應用，臨床上對遺傳代謝病的篩查和診斷更加便捷，但對于有些疾病應結合相關生化測定、尿有機酸分析、酶學檢查及分子生物學等技術做進一步診斷[13]。

綜上所述，MS/MS技術在新生兒遺傳性代謝病的篩查及早期診斷中具有重要的應用價值，對優生優育，提高人口素質具有積極意義。