豬圓環病毒3型和4型雙重PCR檢測方法的建立

侯承堯， 徐 通,崔建濤,田潤博,鄭蘭蘭，趙 麗，陳紅英* (.河南農業大學 動物醫學院，河南 鄭州 45000；.河南牧業經濟學院 動物醫藥學院，河南 鄭州 450046)

豬圓環病毒(porcine circovirus，PCV) 屬于圓環病毒科圓環病毒屬，是一種無囊膜、二十面體對稱的單股環狀DNA病毒，是迄今為止發現的最小的動物病毒之一[1]。根據最新報道PCV可以分為PCV1、PCV2、PCV3和PCV4[2-3]。PCV1對豬沒有致病性[4]，而PCV2被認為是斷奶仔豬多系統衰竭綜合征(PMWS)的主要病原[5]，不僅可引起PMWS，還與豬皮炎和腎病綜合征(PDNS)、豬呼吸系統混合疾病(PRDC)、母豬繁殖障礙、增生性壞死性腸炎等疾病密切相關[6]。2015年,美國學者PALINSKI等[7]和PHAN等[8]發現PCV3，隨后在中國、韓國和意大利等國家相繼報道[9-11]。目前PCV3已經在世界范圍內流行，據相關報道PCV3極可能會導致PNDS、PRDC和繁殖障礙等一系列PCV相關疾病(PCVAD)[12]。2019年,ZHANG等[3]在湖南省發現新型PCV，并暫定為PCV4型。PCV4全長為1 770 bp，和其他PCV的同源性為43.2%～51.5%，也包含2個主要的開放閱讀框Rep和Cap，且發現PCV4可能與PDNS和PRDC等嚴重臨床疾病相關。

前期研究結果顯示，PCV3/4均與PDNS、PRDC相關，且兩者的混合感染在我國豬場已經存在，臨床診斷難于區分這2種病原體，因此需要建立實驗室診斷方法。徐朋麗等[13]、田潤博等[14]已經建立了針對PCV3/4單項PCR檢測方法，迄今尚無同時檢測和區分PCV3/4的PCR檢測方法，且單項的PCR檢測方法費時費力。因此，本研究旨在建立一種同時檢測PCV3/4的雙重PCR方法，并對河南、山西省部分地區臨床病料進行檢測，為這2種病原的臨床診斷及流行病學調查提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 病毒株及臨床樣品根據徐朋麗等[13]、田潤博等[14]建立的PCR方法，對實驗室保存的疑似PCV感染病料樣品分別進行PCV3/4檢測、測序，將鑒定為陽性的病料樣品用于本試驗陽性對照和重組質粒的構建。……