利用Red/ET重組技術(shù)構(gòu)建表達(dá)非洲豬瘟病毒CP530R和F317L基因的重組偽狂犬病毒

孔 潔,邵洋洋,喬延召,趙琪琪,李鴻鑫,張新珩,藺文成,陳偉國(guó),謝青梅 (華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510642)

自2018年8月以來，我國(guó)已有多個(gè)省份發(fā)生非洲豬瘟(African swine fever，ASF)疫情，ASF給我國(guó)養(yǎng)殖行業(yè)帶來了巨大的挑戰(zhàn)。ASF是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染引起的豬的一種急性、烈性傳染性疾病[1]，鑒于目前該疫病在全球多個(gè)國(guó)家蔓延，開展疫情防控工作、研發(fā)新型ASF疫苗已迫在眉睫。ASFV屬于雙股線型DNA病毒，具有多層結(jié)構(gòu)和二十面體形態(tài)，其基因組編碼超過150多種病毒蛋白[2-3]。pp62多聚蛋白是ASFV非常重要的一類結(jié)構(gòu)蛋白，該蛋白可以加工合成兩個(gè)核心蛋白——p35和p15，存在于病毒顆粒的核殼，由CP530R基因編碼合成[4]。研究發(fā)現(xiàn)，pp220是病毒內(nèi)部核心殼的主要成分之一，兩種多聚蛋白前期的加工都伴隨著病毒的組裝，當(dāng)pp62多聚蛋白的表達(dá)受到阻遏，間接影響pp220多聚蛋白的離域化[5]，引起病毒工廠中具有不同核心發(fā)育水平的異常病毒顆粒積聚。未知蛋白(hypothetical proteins)是指缺少功能注釋信息的蛋白[6]。在成熟的ASFV粒子中，目前已檢測(cè)到68種蛋白質(zhì)，結(jié)構(gòu)蛋白主要參與病毒的復(fù)制和病毒粒子的形成，至今仍未知其功能的蛋白質(zhì)占30%左右，其中包括F317 L[7]。

偽狂犬病是由偽狂犬病病毒(pseudorabies virus，PRV)引起的一種急性傳染病，臨床上能夠引起豬的繁殖障礙。該病毒基因組龐大，全長(zhǎng)約145 kb，由于病毒感染宿主范圍廣，且含有多個(gè)非必需基因，可供多種外源基因插入并穩(wěn)定表達(dá)[8]。已有研究表明，復(fù)制非必需區(qū)基因(TK、PK、gE、gI和gG等)能夠作為外源基因的插入位點(diǎn)，缺失突變后可使野生株P(guān)RV侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)[9]，顯著降低病毒毒力。……