牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒GPCR基因熒光定量PCR檢測方法的建立

原耀賢，孫銘澮，黃偉楠，李康健，何 威，付 強，馬春全，劉 全，馬 駿* (.佛山科學技術(shù)學院 生命科學與工程學院，廣東 佛山 528225；2.廣東省揭陽市惠來縣溪西畜牧獸醫(yī)站，廣東 揭陽 5525；.廣州市微生物研究所有限公司，廣東 廣州 50700)

牛結(jié)節(jié)性皮膚病(lumpy skin disease，LSD)是由痘病毒科(Poxviridae)脊髓動物痘病毒亞科(Chordopoxvirinae)羊痘病毒屬(Capripoxvirus)的雙鏈DNA病毒——牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒(lumpy skin disease virus，LSDV)引起的牛病毒性疾病[1]。患病動物的皮膚表面會形成堅硬的結(jié)節(jié)或潰瘍；發(fā)病過程中體溫上升、精神萎靡、體質(zhì)量減輕、伴有流淚、流涕和流涎?；疾∧膛．a(chǎn)奶量減少，母?？赡軙鳟a(chǎn)并伴有幾個月的不發(fā)情期，公牛會暫時不育或永久不育[2]，該病嚴重時會導致動物死亡。因此，LSD被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須通報的疫病[3]，被我國進境疫病名錄列為一類動物疫病。

LSD于1929年在非洲贊比亞首次被發(fā)現(xiàn)。2013—2017年LSD由非洲傳入中東，逐漸形成了全球蔓延的趨勢[4]。2019年8月，該病傳入我國，在我國新疆伊犁地區(qū)首次暴發(fā)[5]。目前，LSD已在我國幾個省份有報道發(fā)病并執(zhí)行撲殺政策[6]。因此，鑒于LSD的流行趨勢，建立一種準確、快速的LSDV檢測方法具有重要意義。

實時熒光定量PCR方法(real-time quantitative PCR，qPCR)具有操作簡便、特異性強、敏感性高等特點，廣泛應用于病原微生物的臨床檢測中。目前，我國針對LSDV的qPCR檢測方法的相關報道較少。因此，本研究基于LSDV的G-protein-coupled chemokine receptor(GPCR)基因，設計了針對LSDV的qPCR檢測方法，為早期感染動物的發(fā)現(xiàn)和疑似病例的診斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病毒和疫苗山羊痘病毒(goatpoxvirus，GTPV)疫苗株(CVCC AV41)購自吉林正業(yè)生物制品股份有限公司。……