抗登革病毒人源化單克隆抗體h1A1D的構建及純化

劉宇夢，汪 偉，孫世宇，于 寧，李成輝，莊忻雨，孫文超，魯會軍*，金寧一* (1.廣西大學 動物科學技術學院，廣西 南寧530001；.軍事科學院 軍事醫學研究院 軍事獸醫研究所，吉林 長春1301；3.延邊大學 農學院，吉林 延吉 133000；4.溫州大學 病毒學研究所，浙江 溫州 35035)

登革病毒(dengue virus，DENV)是一種重要的蚊媒傳染病病毒，屬于黃病毒科黃病毒屬，主要的傳播媒介是埃及伊蚊和白紋伊蚊[1]，DENV感染可引起不同程度的臨床癥狀，從無感染癥狀到有嚴重的登革出血熱和登革休克綜合征，并可能導致死亡[2-3],死亡率高達10%[4]。登革熱已成為一個全球性的嚴重公共衛生問題[5-6]。

DENV有4種血清型(DENV1～DENV4)，每種血清型中又有多個基因型[7]，主要以DENV2型流行[8- 9]。DENV為單股正鏈RNA病毒，含有1個開放閱讀框，編碼3種結構蛋白(C、pr M和E)和7種非結構蛋白[10]。有研究表明，DENV自然感染過程中誘導的抗體明顯以包膜(E)和膜前(pr M)蛋白為靶點[11-12]。研究發現，DENV單克隆抗體h1A1D 能識別ED Ⅲ上的表位，且對4種血清型具有中和活性[13-15]。鼠源性抗體作為異源蛋白應用于人體會引起針對異源蛋白的免疫排斥反應，誘發產生人抗鼠抗體，縮短了抗體在體內的半衰期影響了抗體的治療效果引起人抗鼠抗體(human anti-mouse antibody，HAMA)反應[16-17]。人源化單克隆抗體已經成為治療性抗體藥物研究的重要方向，因此，需研發一種具有廣譜抗DENV中和活性的單克隆抗體。

本研究參考 GenBank公布的抗體序列，通過基因工程技術將DENV鼠源單克隆抗體輕重鏈可變區氨基酸序列與人源抗體輕重鏈恒定區氨基酸序列合成至pcDNA 3.1(+)載體上，轉染CHO-K1細胞進行抗體表達，Protein A親和純化后，成功制備了抗DENV人源化單克隆抗體h1A1D，本研究結果對進一步探索DENV致病機制及研發登革熱的抗體藥物提供參考。……