長角血蜱磷酸丙糖異構酶的真核表達及免疫保護力分析

吳品興，梁 娜，董紅猛，肖舒文，胡永紅 (河北師范大學 生命科學學院，河北 石家莊 050024)

長角血蜱(Haemaphysalislongicornis)隸屬于節肢動物門(Arthropoda)、蛛形綱(Arachnida)、蜱螨亞綱(Acari)、寄螨總目(Parasitiformes)、蜱目(Ixodida)、硬蜱科(Ixodidae)[1]，在全世界呈廣泛性分布[2-4]。長角血蜱作為重要的病原體載體，可引起立克次體病[5]、人單核細胞埃立克體病[6]、犬焦蟲癥[7]、泰勒蟲病[8]及發熱伴血小板減少綜合征[9]等，對人類健康和畜牧業發展帶來極大危害。目前，化學防治仍然是控制蜱類的重要方式[10]，但長期使用會導致環境污染和蜱抗藥性的產生[11]，因此，疫苗接種已成為有效的蜱類防治策略之一。

磷酸丙糖異構酶(triosephosphate isomerase，TIM)是一種催化磷酸二羥丙酮(DHAP)和甘油醛-3-磷酸(GAP)互逆轉化的酶，在糖酵解過程中有重要的地位[12]。已有研究證實，剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii)[13]、日本血吸蟲(Schistosomajaponicum)[14]、微小扇頭蜱(Rhipicephalusmicroplus)[15]中TIM對宿主具有免疫保護力，而蜱中相關研究報道甚少。畢赤酵母(Pichiapastoris)是一種工業化的甲基營養型酵母，具有易操作，穩定表達，高密度發酵及翻譯后修飾(例如糖基化，多肽折疊和甲基化)的優點[16]，并且在畢赤酵母中表達的重組蛋白不會遇到內毒素污染[17]。因此，本研究采用畢赤酵母表達系統對長角血蜱TIM進行表達和純化，通過蜱叮咬試驗分析免疫保護力，為進一步篩選抗蜱疫苗提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物新西蘭大白兔(約2 kg)購自河北醫科大學實驗動物中心。所有動物試驗方案經河北師范大學動物倫理委員會批準 (2020LLSC05)。

長角血蜱采集于中國小五臺山國家自然保護區。非寄生期蜱放置于恒溫培養箱培養(濕度為75%，溫度為(25±1)℃)?！?br>