GC-MS聯用技術分析麝鼠香和麝香化學成分差異

孫菲菲，張振凌,3*，梁 迪，余海英，鄭旭亞，黃亞森

1河南中醫藥大學藥學院；2河南省中藥特色炮制技術工程研究中心；3呼吸疾病中醫藥防治省部共建協同創新中心，鄭州 450008

麝香(Musk)為麝科動物林麝(MoschusberezovskiiFlerov)，馬麝(MoschussifanicusPrzewalski)和原麝(MoschusmoschiferusLinnaeus)成熟雄體香囊中的干燥分泌物，始載于《神農本草經》，有2 000多年的藥用歷史，其性溫，味辛，歸心、脾經，具有開竅醒神、活血通經、消腫止痛等功效[1]。麝為國家一級保護野生動物，為保護麝資源和滿足醫藥行業的需要，臨床多使用人工麝香，但人工麝香功效遠不如天然麝香，本草記載靈貓香與麝鼠香具有與麝香類似的功效[2]。麝鼠香為嚙齒目倉鼠科麝鼠屬動物麝鼠(OndatrazibethicaLinnaeus)成齡雄性香腺囊內的乳白色分泌物，具有消炎止痛、活血散瘀、芳香開竅的作用，用于癰瘡腫毒、中風昏迷、跌打損傷等癥[3]。研究發現麝鼠香中含有與麝香相同的麝香酮、環十五烷酮以及其他相類似的大環酮類等成分，也發現麝鼠香具有類似麝香的氣味[2]。現代藥理實驗表明麝鼠香的藥理作用與天然麝香相近，能起到抗炎鎮痛、減慢心率、降低血壓、增強心臟功能和降低血液粘稠度、改善心肌缺血和保護心臟缺血性損傷等作用[4-7]，并且可以促進動物生長，在抗衰老和治療冠心病方面具有廣闊前景[8]。在天然麝香資源匱乏的情況下，國內外都在尋找新的資源，麝鼠香有可能成為麝香入藥的新資源。本研究采用GC-MS對麝鼠香和麝香進行化學成分分析，比較兩者成分差異，并測定麝鼠香中環十五烷酮含量，為麝鼠香入藥及其資源的開發利用提供科學依據。

1 實驗材料

1.1 儀器

TRACE1300-TSQ8000EVO氣相色譜質譜聯用儀(賽默飛公司)；BT25S型十萬分之一電子天平(賽多利斯科技儀器有限公司)；KQ-500DV型超聲清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；MX-S型漩渦振蕩儀(北京大龍興創實驗儀器有限公司)；TG16-WS高速臺式離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司)。

1.2 材料

環十五烷酮對照品(批號：M29J11K117112，質量分數≥98%)、麝香酮對照品(批號：B18N10D103404，質量分數≥98%)，上海源葉生物科技有限公司；乙酸乙酯為色譜純。麝鼠香(江蘇宿遷市麝香鼠養殖專業合作社提供)，經中國農業科學院特產研究所陳玉山教授鑒定為倉鼠科動物麝鼠成齡雄性香腺囊內的乳白色分泌物；麝香(河南保和堂麝鼠香有限公司提供)，經河南中醫藥大學張振凌教授鑒定為鹿科動物林麝，馬麝或原麝成熟雄體香囊中的干燥分泌物。

2 方法與結果

2.1 GC-MS分析條件

2.1.1 色譜條件

采用TG-5MS石英毛細管柱(0.25 mm × 30 m，0.25 μm)，載氣：高純度氦氣(99.999%)，體積流量1.0 mL/min，進樣量1.0 μL，分流比50∶1，進樣口溫度250 ℃，程序升溫，80 ℃保持2 min，以速率10 ℃/min升至 260 ℃，保持30 min[9]。

2.1.2 質譜條件

EI電離源，電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃，傳輸線溫度280 ℃，溶劑延遲時間3 min，檢測模式為全掃描模式，質量掃描范圍m/z：30～500 amu。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取環十五烷酮對照品1.24 mg置于5 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，搖勻，即得環十五烷對照品母液，備用。

精密稱取麝香酮對照品2.24 mg置于5 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，搖勻，即得麝香酮對照品溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

分別取麝鼠香、麝香(置于研缽中研成粉末，過五號篩)50 mg，精密稱定，置于10 mL具塞玻璃試管中，加入乙酸乙酯5 mL，密塞，用漩渦振蕩儀混合1 min后，轉移至離心管中，用離心機以8 000 rpm離心2 min，取上清液，過0.22 μm有機相微孔濾膜，備用。

2.4 結果與分析

按上述實驗條件對麝鼠香、麝香進行GC-MS分析，得到麝鼠香和麝香的總離子流圖(見圖1)。各色譜峰使用NIST14標準質譜圖庫進行檢索比對，選擇匹配度高于80%的色譜峰，并參照相關文獻[4,9-15]進一步確認其化學成分，按色譜峰面積歸一化法計算各成分的相對百分含量，結果見表1。通過質譜分析和標準譜圖檢索，麝鼠香共檢出58個峰，初步鑒定出化合物23個，占總峰面積的90.38%；麝香共檢出43個峰，鑒定出化合物19個，占總峰面積的91.21%。結果分析顯示，麝鼠香中酯類化合物含量最高，達36.57%，其次為大環酮類成分，占32.59%，脂肪酸類、甾體類、醇類化合物分別為13.34%、6.56%、1.32%；麝香中大環酮類化合物含量最高，達44.5%，其次為甾體類成分占25.93%，脂肪酸類成分占20.35%，還含有少量的醛類為0.43%；麝鼠香、麝香中共有化合物有6種，分別為十四烷酸、環十五烷酮、十六烷酸、油酸、硬脂酸和膽固醇。

表1 麝鼠香、麝香化學成分保留時間及相對質量分數Table 1 The retention time and relative mass fraction of the chemical constituents of muskrat and musk

續表1(Continued Tab.1)

圖1 環十五烷酮對照品(A)、麝鼠香(B)、麝香(C)、麝香酮對照品(D)總離子流圖Fig.1 Total ion chromatograms of cyclopentadecanone standard (A),muskrat (B),musk (C) and muscone standard (D)

2.5 麝鼠香中環十五烷酮的含量測定

2.5.1 線性關系考察

精密吸取“2.2”項下環十五烷酮對照品母液適量，至5 mL容量瓶中并定容，配制成質量濃度分別為1.24、2.48、12.4、24.8、62.124 μg/mL的環十五烷酮對照品溶液，過0.22 μm的微孔濾膜，按照“2.1.1”項下色譜條件進行檢測，記錄色譜峰面積，以對照品溶液濃度為橫坐標(X)，對照品峰面積值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，計算回歸方程，結果Y=3.96E+09X+3.82E+06，R2=0.999 8，線性范圍為1.24～124.0 ng。

2.5.2 精密度試驗

取“2.2”項下環十五烷酮對照品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件連續進樣6次進行檢測，計算環十五烷酮峰面積的RSD為1.17%，表明該方法精密度良好。

2.5.3 穩定性試驗

取同一供試品溶液，在0、2、4、6、8、10、24 h進樣檢測，計算環十五烷酮峰面積RSD值為0.79%，結果表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.5.4 重復性試驗

精密稱取同一麝鼠香樣品6份，按照“2.3”項下方法制成供試品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件測定，計算環十五烷酮質量分數的RSD值為1.39%，表明該方法重復性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗

精密稱取已測定含量的麝鼠香樣品6份，每份25 mg，加入0.3 mL濃度為0.248 mg/mL的環十五烷酮對照品溶液，加入乙酸乙酯4.7 mL，混勻，按“2.3”項下制備供試品溶液，測定峰面積，計算回收率，結果環十五烷酮的平均回收率為99.3%，RSD值為2.49%，表明加樣回收率良好，方法可行(見表2)。

表2 麝鼠香中環十五烷酮加樣回收率試驗Table 2 Recovery test of cyclopentadecanone in muskrat

2.5.6 不同批次麝鼠香中環十五烷酮的含量測定

取不同批次麝鼠香50 mg，按照“2.3”項下方法制成供試品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件進行測定，計算樣品中環十五烷酮的含量，結果見表3。

表3 不同批次麝鼠香中環十五烷酮質量分數Table 3 The contents of cyclopentadecanone in different batches of muskrat

3 討論

實驗結果表明，麝鼠香和麝香中共有成分有十四烷酸，環十五烷酮，十六烷酸，油酸，硬脂酸和膽固醇，兩者所含成分種類相似，都含有酯類，脂肪酸類，大環烷酮類及甾體類化合物。文獻研究顯示麝鼠香中含有環十五烷酮和麝香酮，所以認為其可成為麝香入藥的新資源，但本實驗通過采用麝香酮對照品進行了比對，結果表明麝鼠香中并不含有麝香酮。并且，以往文獻研究結果顯示對于其是否含有麝香酮結果并不一致，Liu[4]、Zhao[11]、Peng[16]等在麝鼠香中檢測到了麝香酮，Hu[17]、Mou[18]、Zhao[19]、Li[9]等沒有檢測到，可能是以前儀器分辨率較低，在當時又缺少對照品的情況下，兩種物質出峰時間相近，所以誤把環十五烷酮認為是麝香酮了。雖然麝鼠香中不含有麝香酮，但含有多種大環酮類化合物，其中環十五環酮和環十七烷酮含量較高，分別占9.89%和19.1%，Hu等[17]通過麝香、靈貓香、麝鼠香中大環酮類成分的分離與鑒定研究證明大環酮類化合物是麝香類藥物發揮藥效的主要成分，是具有芳香開竅的主要物質，所以麝鼠香中環十五烷酮和環十七烷酮是其主要香氣成分及發揮藥效的物質基礎。研究表明，麝香酮具有抗癡呆、抗腦缺血、抗炎、抗心肌缺血、抗腫瘤、抗早孕和抗著床等多種作用，同時其還可以興奮中樞神經系統[20]，但關于環十五烷酮和環十七烷酮是否具有同樣的藥理作用，尚未有人進行研究，可作為下一階段研究目標，比較麝香酮與其藥理作用差異，為麝鼠香成為新的藥用資源提供科學理論依據。

麝鼠香中還含有棕櫚油酸、棕櫚酸、油酸、亞油酸等脂肪酸類成分，研究發現，脂肪酸類化合物有較強的抗氧化作用，且兼具調節血脂、軟化血管、降低血壓、抗血小板聚集、促進微循環等活性[21,22]，同時還有抗腫瘤、提高生物膜相對流動性的免疫調節作用[23]。亞油酸是人體和動物生長發育的必須脂肪酸，油酸有降血脂，預防動脈硬化的功效[23]，棕櫚油酸對肥胖癥、糖尿病和脂肪肝等具有一定的療效，可預防或減少心血管疾病的發生[24]，且對傷口發炎具有抑制效果以及具有改善皮膚光滑度等作用[25]。同時通過動物藥理實驗表明，麝鼠香系列化妝品具有較強的抗衰老活性，能促進皮膚內SOD活性，抑制脂質過氧化物丙二醛(MDA)的產生，降低脂褐質的含量和單胺氧化酶(MAO-B)的活性，還具有抗炎、抑菌和促進皮膚的新陳代謝，有較好的潤膚作用[26]。另外，Xu[27]研究發現麝鼠香可抑制血小板聚集，延長PT(凝血酶原)、TT(凝血酶)時間，能抑制紅細胞聚集，降低紅細胞的脆性，增加其變形性，降低全血粘度，從而具有活血化瘀的作用，可預防血栓性疾病的發生，麝鼠香活血化瘀的作用，可能與其含有的不飽和脂肪酸有關，具體機制有待進一步研究。

麝鼠香不僅藥理作用廣泛，其香氣純正，氣味柔和，留香持久，還是一種優良的定香劑，可用于調制香水、膏、霜等，可廣泛應用于日化工業，麝鼠香中含有的酯類、脂肪酸類、大環酮類物質，使得麝鼠香具有了天然動物香料的物質基礎，是繼麝香、靈貓香、海貍香、龍涎香四大名香之后的又一名貴天然動物香料，麝鼠香在香料、日化工業以及醫藥行業方面都具有廣闊的應用前景。本文建立了麝鼠香的GC-MS分析方法，并同時測定了環十五烷酮含量，比較了麝鼠香、麝香兩者成分差異，為麝鼠香資源的合理利用提供了科學理論依據。