枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對蛋雞生產性能、蛋品質及腸道相關指標的影響

陸建強，蔡猛，聶根基,陸新富， 沈素娥，虞德兵，王德前，李雙茂，李進軍

(1. 建德市建珂養殖有限公司,浙江 建德 311600;2. 南京農業大學動物科技學院,江蘇 南京 210095;3. 浙江省農業科學院畜牧獸醫研究所,浙江 杭州 310021)

在畜禽生產中，可以通過對飼料配方不斷進行優化、采用各種飼料添加劑等方法來提供更加完善均衡的飼糧，這些盡管可以在一定程度上提高動物生產性能，但效果并不十分明顯。近些年來，由于抗生素的藥物殘留問題，禁止抗生素在飼料中添加的呼聲越來越高，正因為如此，也導致了眾多的飼料企業開始迫切尋找抗生素替代品[1]。目前看來，在飼料中添加益生菌，通過調節畜禽腸道菌群的平衡，來提高畜禽腸道的健康水平，是一種提高動物生產性能的很好方式[2]。枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)也叫枯草桿菌，是芽孢桿菌屬的一種。枯草芽孢桿菌菌體可以在生長過程中產生枯草菌素、多黏菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質，這些活性物質對致病菌或內源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用[3]。枯草芽孢桿菌迅速消耗腸道中的游離氧，造成腸道低氧，促進有益厭氧菌生長，間接抑制其他致病菌生長，而且對小腸絨毛的發育具有顯著的促進作用[4-5]。同時枯草芽孢桿菌對特殊菌體進行促芽孢和微膠囊包被處理，在芽孢狀態下穩定性好，能耐氧化、耐擠壓、耐高溫(能長期耐60 ℃高溫，在120 ℃溫度下能存活20 min)、耐酸堿(在酸性胃環境中能保持活性，可以耐唾液和膽汁的攻擊)，是微生物中可100%直達大、小腸的活菌。地頂孢霉是一種人工制成、可被動物食用的冬蟲夏草型真菌添加劑，功效與古尼蟲草相近。研究表明添加地頂孢霉有益于提高蛋鴨的生產性能[6]和腸道菌群豐度[7]。盡管針對枯草芽孢桿菌在動物生產中的作用已有大量的科學研究，但關于枯草芽孢桿菌與地頂孢霉聯合使用對蛋雞生產中的影響的研究還比較少。本試驗主要探討了枯草芽孢桿菌及其與地頂孢霉聯合使用對蛋雞生產性能、蛋品質和腸道相關指標的影響，從而為蛋雞健康養殖提供更多的理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

根據單因子試驗設計，本試驗選用30周齡的海蘭蛋雞240只，隨機分為枯草芽孢桿菌與地頂孢霉聯合復合制劑試驗組和對照組，每處理4個重復，每個重復30只雞。對照組飼喂基礎飼糧，試驗組在基礎飼糧中添加濃度為5×108CFU/g的枯草芽孢桿菌和地頂孢霉復合添加劑。基礎日糧配方參照NRC(1994)蛋雞營養需要進行配制，具體營養成分見表1。所有試驗雞均采用3層階梯式籠養，每籠3只，所有重復組在雞舍均勻分布。每天的早晨7時和下午2時各飼喂1次，所有雞自由采食和飲水；每日恒定光照16 h；雞舍采用風機通風，雞的免疫和欄舍消毒都按照標準化程序進行。

表1 基礎飼料組成及營養水平(風干基礎)

1.2 測定指標與方法

1.2.1 蛋雞生產性能

試驗期間以重復為單位，定時記錄每天的產蛋總數和破蛋數，以1周為1個時間單位，計算出產蛋率和破蛋數。

1.2.2 蛋品質

試驗期的第1、7、13周，從每個重復組分別選取20枚雞蛋做蛋品質的測定。用蛋殼強度測試儀(日本Nidec-shimpo corporation公司)測定蛋殼強度；用千分尺測定蛋殼厚度；蛋形指數用游標卡尺測定；用EMT-5200型多功能蛋品質自動分析儀(日本Robotmation公司)測定蛋白高度、哈氏單位及蛋黃顏色。

1.2.3 腸道菌群數量測定

在試驗期的第1周和13周，分別從每個重復組隨機選取2只空腹(期間自由飲水) 12 h后的蛋雞，屠宰后在無菌環境下取出盲腸內容物約0.5 g，用生理鹽水10倍稀釋至108倍，通過預試驗選取適宜的稀釋梯度，用平板培養計數法計數沙門菌、乳酸菌和大腸桿菌。其中乳酸菌接種于乳酸菌選擇性培養基(LBS)，在37 ℃生化培養箱中厭氧培養48 h后進行菌落計數；沙門菌接種于HE瓊脂，在37 ℃生化培養箱中有氧培養24 h后進行菌落計數；大腸桿菌接種于伊紅美蘭瓊脂培養基(EMB)，在37 ℃生化培養箱中有氧培養24 h后進行菌落計數；菌群數量以每克腸道內容物所含細菌群落總數的對lg(CFU/g)表示。

1.3 統計分析

試驗數據經Excel 2019初步整理后，使用IBM SPSS Statistics 22.0 軟件進行統計分析，使用t檢驗 評估組間的差異，結果用“平均值±標準誤”表示，P<0.05作為差異顯著判斷標準，P<0.01為差異極顯著判斷標準。

2 結果

2.1 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對蛋雞生產性能的影響

表2所示為飼喂1周到13周蛋雞的產蛋率和破殼率。結果顯示，與對照組相比，試驗組的蛋雞產蛋率極顯著提高(P<0.01)，但破蛋數和平均蛋重均無顯著差異(P>0.05)。

表2 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對蛋雞生產性能的影響

2.2 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對產蛋雞蛋品質的影響

由表3、表4和表5可知，在試驗的第1、7和13周，對照組和試驗組間蛋型指數、蛋殼厚度、蛋重和哈夫單位均無顯著差異(P>0.05)。與對照組相比，在試驗的第7周，添加枯草芽孢桿菌與地頂孢霉可以顯著提高雞蛋的蛋白高度(P<0.05)和蛋黃顏色(P<0.05)。在試驗的第1周，枯草芽孢桿菌與地頂孢霉的添加可以極顯著提高蛋黃重(P<0.01)；與對照組相比，第13周的蛋殼強度也有了極顯著的提高(P<0.01)。

表3 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對試驗的第1周產蛋雞蛋品質的影響

表4 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對試驗的第7周產蛋雞蛋品質的影響

表5 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對試驗的第13周產蛋雞蛋品質的影響

2.3 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對產蛋雞盲腸菌群的影響

由表6可知，與對照組相比，在試驗雞的第1周，試驗組盲腸大腸桿菌數量與對照組相比極顯著降低(P<0.01)；但兩組之間的沙門菌和乳酸菌數量無顯著差異(P>0.05)。

表6 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對產蛋雞腸道菌群的影響

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對產蛋雞生產性能的影響

枯草芽孢桿菌與地頂孢霉聯合添加使用能調理腸道菌群的平衡，使有益菌群數量增加，調節腸道消化、吸收和代謝。在促進有益菌群生長的同時，也抑制了有害細菌的繁殖，減少了不同菌群之間的拮抗作用，提高了消化酶的活性[8-9]，在增強機體對營養物質消化吸收的同時，也促進了蛋雞生產性能的提高[10]。本試驗結果表明，在飼糧中添加枯草芽孢桿菌與地頂孢霉使得蛋雞的產蛋率有了顯著提高。Geng等[11]通過在飼糧中使用枯草芽孢桿菌混合添加劑使得蛋雞的生長速率有了顯著提高；Fan等[12]用茯苓多糖與枯草芽孢桿菌聯合在飼糧中添加也得到了相同的試驗結果。益生元對促進動物的生長有很大作用，這可能是由于益生菌的生長繁殖效率得到提高，進而使腸道中有益菌群的數量增加[13-14]。本研究結果提示，枯草芽孢桿菌與地頂孢霉一同添加對提高蛋雞生產性能有一定的積極作用。

3.2 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對產蛋雞蛋品質的影響

眾所周知，在蛋殼的組成成分中大部分都是碳酸鈣，所占比例能達到94%～97%，因此蛋殼中碳酸鈣的多少，也在很大程度上決定了蛋殼的強度和厚度[15]。除此之外，蛋殼的強度和厚度還與蛋殼中的礦物元素有很大關系[16-17]。在飼糧中添加枯草芽孢桿菌與地頂孢霉，其含有的生物活性物質，能使機體在一定程度上提高對飼糧中營養物質的消化吸收，進而增強對鈣的吸收消化和利用。關于芽孢桿菌對蛋品質的影響已有眾多的報道，而地頂孢霉對蛋雞生產中的影響也有類似的效果。地頂孢霉培養物是地頂孢霉菌經人工發酵等一系列的處理而得到的產品，地頂孢霉菌是從古尼蟲草中分離出來的。古尼蟲草是我國珍貴的中藥材，其藥理成分和冬蟲夏草生藥類似，具有免疫調節，抗炎鎮痛等作用[18-19]。大量研究表明，地頂孢霉對豬生產性能的提高也有很大的促進作用，能顯著增加仔豬體重[20]。在對蛋鴨的試驗結果表明，在日糧中添加地頂孢霉后，使蛋品質量有了明顯提高[21]。在試驗的第1周和7周，試驗組的蛋殼強度與對照組相比并沒有顯著差異，這可能與蛋雞不同階段的生理狀態以及外界環境因素有關，但在第13周中，兩組的蛋殼強度有了極顯著差異。另外有研究表明，將苯丙乳酸添加在蛋雞日糧中，再對蛋品質進行檢測，發現蛋殼強度有了顯著提高，但蛋殼厚度卻沒有顯著增加[22-23]，這與本試驗中第13周的蛋品質測定結果相一致。

此外，在本試驗中蛋黃顏色也有了一定程度的提高。研究表明，類胡蘿卜素對蛋黃的著色有很大影響，其含量的多少將直接影響著蛋黃的深淺，當日糧中類胡蘿卜素的含量較少時，或者機體對類胡蘿卜素的消化吸收受到阻礙，都將會導致蛋黃顏色變淺[24]。因此，本試驗中蛋黃顏色得到明顯改善的原因，可能是由于在枯草芽孢桿菌與地頂孢霉共同作用下，使機體對類胡蘿卜素的吸收和沉積得到了較大的促進。另外也可能是由于枯草芽孢桿菌的抗氧化的功能，使類胡蘿卜素不容易被氧化，蛋黃中色素的沉積得到了提高。進而使蛋黃顏色得到了改善，但具體的生理代謝機制仍需要未來進行更多的研究。雷凱[25]研究發現，蛋雞日糧中添加地衣芽孢桿菌可在一定程度上改善蛋殼強度和蛋殼厚度，顯著提高雞蛋的哈氏單位、蛋白高度和蛋黃顏色。這與本試驗中蛋殼強度有了極顯著差異，蛋白高度和蛋黃顏色出現顯著差異的結果相一致。

3.3 枯草芽孢桿菌與地頂孢霉復合制劑對產蛋雞盲腸菌群的影響

家禽腸道中定植著大量與機體健康密切相關的微生物，盲腸菌群可在一定程度上反映腸道健康狀況。有研究指出，畜禽腸道中微生物群落的組成，直接影響著機體對日糧的消化和吸收[26-27]。本試驗結果表明，枯草芽孢桿菌與地頂孢霉聯合添加極顯著降低了腸道內致病菌大腸桿菌的數量，改善了腸道菌群結構。腸道內合理的菌群結構，將會提高機體對日糧中營養物質的吸收和利用，使飼料的消化率得到提高，進而提高生產性能[28]。另一方面，通過在飼料中添加枯草芽孢桿菌與地頂孢霉，使腸道中有益菌的數量增加了，由于競爭、拮抗等作用，大量的有益菌反過來抑制了有害細菌的生長繁殖[29]。曹國文等[30]研究結果表明，芽孢桿菌和雙歧桿菌在動物腸道內有協同作用，能共同促進乳酸桿菌等益生菌的繁殖，調整腸道菌群結構，從而提高機體的代謝速率，促進日糧中營養物質的吸收。

綜上，本研究結果表明，產蛋雞飼料中添加枯草芽孢桿菌和地頂孢霉復合制劑能夠提高蛋雞生產性能、蛋品質以及降低腸道中大腸桿菌的數量，為蛋雞的健康生產及飼料添加劑的發展提供了可借鑒的經驗。