方竹葉黃酮提取工藝優(yōu)化及其抗氧化能力研究

黃珊，劉嘉，李貴華，劉永翔，3，盧揚(yáng)，劉輝，黃畢應(yīng)，李俊*

（1.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食品加工研究所，貴州 貴陽 550006；2.貴州省福泉市牛場(chǎng)鎮(zhèn)人民政府，貴州 黔南 550508；3.貴州省生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽 550006）

竹葉在我國擁有悠久的食用和藥用歷史，是國家認(rèn)可并批準(zhǔn)的藥食兩用植物[1]。古人對(duì)竹葉研究頗多，在食用方面，竹葉茶、竹葉酒等產(chǎn)品已有數(shù)百年歷史。藥用方面，古醫(yī)書中關(guān)于竹葉的記載很多。《藥性論》中記載竹葉主吐血熱毒風(fēng)，止消渴；《食療本草》中記載竹葉主咳逆、消渴、痰飲、喉痹、除煩熱；《本草綱目》中記載竹葉煎濃汁，漱齒中出血，洗脫肛不收[2]。現(xiàn)代研究表明，竹葉中含有黃酮及其甙類、活性多糖及其衍生物等活性物質(zhì)，富含錳、鋅、硒、鍺、硅等多種能活化人體細(xì)胞的元素，以及醛、醇為主的芳香成分等[3-4]。

竹葉黃酮主要是碳苷黃酮，包括葒草苷、異葒草苷、牡荊苷、異牡荊苷4類[5]。天然來源黃酮具有抑菌、抗氧化、解毒、抗光敏及增強(qiáng)免疫力等作用[6-7]。因具有清除皮膚中自由基、避免細(xì)胞損傷、促進(jìn)皮膚新陳代謝、提升皮膚彈性、減少色素沉著等功效，從而可以達(dá)到美白效果[7-9]。現(xiàn)階段關(guān)于竹葉中黃酮的提取方法主要有溶劑提取法（水、乙醇、甲醇、丙酮等）、微波或超聲波輔助提取法、超臨界CO2萃取法、酶提取法等[9]。王紫薇等[10]利用超聲波輔助乙醇提取淡竹葉中的黃酮類物質(zhì)，提取率為2.11%。史娟等[11]采用超聲波預(yù)處理-乙醇回流法提取漢中毛竹葉黃酮類物質(zhì)，提取率最高為2.92%。王文淵等[12]采用纖維素酶輔助提取竹葉中黃酮，提取率可達(dá)4.21%。

方竹[Chimonobambusa quadrangularis（Fenzi）Makino]筍肉質(zhì)地脆嫩，味道鮮美，受到廣大消費(fèi)者歡迎。近年來方竹在貴州省內(nèi)的種植面積不斷增加，但關(guān)于方竹葉加工和方竹葉黃酮提取利用的研究較少。本研究以方竹葉為原料，通過對(duì)比乙醇提取法、纖維素酶提取法、超聲輔助乙醇提取法、振蕩輔助乙醇提取法4種不同提取方式對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響，對(duì)比4種提取方式所得黃酮體外抗氧化能力，確定最優(yōu)的方竹葉黃酮提取工藝，為方竹葉的進(jìn)一步開發(fā)利用提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

方竹葉：貴州省林業(yè)科學(xué)研究院提供，在60℃烘箱中烘干 10 h，使含水量達(dá)到（12.0±0.5）%；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（≥98%）、纖維素酶（3 U/mg）：北京索萊寶科技有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、硝酸鈉、無水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鋁、三氯化鐵、三氯醋酸、鐵氰化鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉（均為分析純）：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

UV-6000型紫外可見分光光度計(jì)：上海元析儀器有限公司；G-040s型超聲波清洗機(jī)：深圳市歌能清洗設(shè)備有限公司；HHS型數(shù)顯恒溫水浴鍋：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；DHG-9140A電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；HS-7型磁力攪拌器：德國IKA公司。

1.2 方竹葉黃酮提取方法

1.2.1 乙醇提取法

稱取粉碎后的方竹葉粉1.0 g，按照如下條件確定乙醇提取法較優(yōu)工藝條件。1）固定乙醇濃度70%，設(shè)定料液比為 1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30（g/mL）。2）固定料液比為 1∶25（g/mL），設(shè)定乙醇濃度為40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%。制作好的樣品在室溫（25℃）條件下用磁力攪拌器攪拌提取60 min，用濾紙過濾，測(cè)定濾液中的黃酮含量，計(jì)算黃酮提取率。

1.2.2 纖維素酶提取法

稱取粉碎后的方竹葉粉1.0 g，按照如下條件確定纖維素酶提取法較優(yōu)工藝條件。1）固定纖維素酶添加量0.6%，設(shè)定料液比為 1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30（g/mL）。2）固定料液比為 1∶25（g/mL），設(shè)定纖維素酶添加量為0%、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%。后續(xù)步驟同1.2.1。

1.2.3 超聲輔助乙醇提取法

1.2.3.1 單因素試驗(yàn)

根據(jù)1.2.1中確定的較優(yōu)乙醇提取工藝參數(shù)，分別考察超聲時(shí)間、超聲功率、超聲溫度對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響。設(shè)置超聲輔助乙醇提取的單因素試驗(yàn)條件如下。

1）固定超聲溫度40℃，超聲功率40 W，設(shè)定超聲時(shí)間為 20、40、60、80、100、120 min。

2）固定超聲溫度40℃，超聲時(shí)間100 min，設(shè)定超聲功率為 20、40、60、80、100 W。

3）固定超聲功率40 W，超聲時(shí)間100 min，設(shè)定超聲溫度為 30、35、40、45、50、55、60 ℃。

1.2.3.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇A超聲時(shí)間、B超聲溫度、C超聲功率進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，優(yōu)化超聲輔助乙醇提取方竹葉黃酮的提取工藝。響應(yīng)面因素水平見表1。

表1 響應(yīng)面優(yōu)化因素水平Table 1 Factors and levels of the response surface optimization

1.2.4 振蕩輔助乙醇提取法

1.2.4.1 單因素試驗(yàn)

根據(jù)1.2.1中確定的較優(yōu)乙醇提取工藝參數(shù)，分別考察振蕩時(shí)間、振蕩溫度、振蕩頻率對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響。設(shè)置振蕩輔助乙醇提取的單因素試驗(yàn)條件如下。

1）固定振蕩溫度40℃，振蕩頻率150 r/min，設(shè)定振蕩時(shí)間為 30、60、90、120、150、180 min。

2）固定振蕩溫度40℃，振蕩時(shí)間120 min，設(shè)定振蕩頻率為 100、150、200、250、300 r/min。

3）固定振蕩頻率150 r/min，振蕩時(shí)間120 min，設(shè)定振蕩溫度為 30、35、40、45、50、55、60 ℃。

1.2.4.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇E振蕩時(shí)間、F振蕩溫度、G振蕩頻率進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，優(yōu)化振蕩輔助乙醇提取方竹葉黃酮的提取工藝。響應(yīng)面因素水平見表2。

表2 響應(yīng)面優(yōu)化因素水平Table 2 Factors and levels of the response surface optimization

1.3 黃酮含量及提取率測(cè)定

用30%乙醇配制0.2 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別移取 0、1、2、3、4、5 mL 上述蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次加入到25 mL容量瓶中，用30%乙醇稀釋至12.5 mL，加入1 mL 5%亞硝酸鈉，搖勻并靜置5 min；然后加入1 mL 10%硝酸鋁，搖勻并靜置6 min；最后加入10 mL 1 mol/mL氫氧化鈉，用30%乙醇定容至刻度，搖勻后置于80℃水浴鍋中水浴加熱10 min，以空白溶液作為對(duì)照，在510 nm處測(cè)定樣品溶液吸光值[13]。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)x，吸光值為縱坐標(biāo)y，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=1.754x-0.005 1，r2=0.999 1。取方竹葉提取液1 mL，按照上述步驟操作，所有樣品平行測(cè)定3次，取A510的平均值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算相應(yīng)的黃酮含量。

方竹葉黃酮提取率按如下公式計(jì)算。

式中：W為方竹葉黃酮提取率，%；W1為方竹葉提取液中的黃酮質(zhì)量，g；W2為方竹葉粉末質(zhì)量，g。

1.4 抗氧化活性測(cè)定

1.4.1 DPPH自由基清除率測(cè)定

配制79 mg/L的DPPH-乙醇溶液，低溫避光保存?zhèn)溆谩?.2中不同提取方法得到的方竹葉黃酮提取液用乙醇溶液配制成質(zhì)量濃度分別為200、400、600、800、1 000 μg/mL的溶液。分別取0.5 mL不同質(zhì)量濃度的樣液，加入5.0 mL DPPH-乙醇溶液，搖勻后置于37℃水浴中反應(yīng)1 h，以乙醇為空白對(duì)照（A空白），在波長為517 nm處測(cè)定樣品溶液吸光值（A樣品）[14-15]，DPPH自由基清除率按如下公式計(jì)算。

1.4.2 還原力測(cè)定

取2.5 mL的磷酸緩沖液（0.2 mol/L，pH 6.6）和2.5 mL 1%鐵氰化鉀混勻，分別移取1 mL 1.2中4種不同提取方法所得不同質(zhì)量濃度的黃酮提取液加入反應(yīng)體系內(nèi)，搖勻后置于50℃水浴中20 min。流水快速冷卻，然后分別加入2.5 mL 10%三氯醋酸終止反應(yīng)，3 000 r/min離心10 min，離心后取2.5 mL上清液，加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL 0.1%三氯化鐵，搖勻后靜置10 min，在波長700 nm處測(cè)定樣品溶液吸光值[16-17]。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Origin（Version 8.6）作圖，Design-Expert（Version 8.0）進(jìn)行響應(yīng)面分析，SPSS（Version 17.0）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，p<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，p<0.01認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇提取工藝優(yōu)化結(jié)果

不同料液比和乙醇濃度對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響結(jié)果見圖1。

圖1 不同料液比和乙醇濃度對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響Fig.1 Effects of solid-liquid ratio and ethanol concenration on the extraction rate of flavonoids from Chimonobambusa quadrangularis（Fenzi）Makino leaves

由圖 1A 可知，料液比由 1∶10（g/mL）變化到 1∶25（g/mL），黃酮提取率顯著升高（p<0.05），在料液比為1∶25（g/mL）時(shí)達(dá)到最大值（2.07%），之后黃酮提取率隨提取溶劑增加顯著下降（p＜0.05）。當(dāng)提取溶劑較少時(shí)，原料浸潤不完全，從而導(dǎo)致提取率較低；而溶劑過多則會(huì)增加提取能耗，在同等提取能耗條件下黃酮類物質(zhì)提取不充分導(dǎo)致提取率降低，且溶劑過多會(huì)造成資源浪費(fèi)[18]。由圖1B可知，隨著乙醇濃度增加，黃酮提取率呈先顯著升高后顯著下降的趨勢(shì)（p＜0.05），在乙醇濃度為80%時(shí)黃酮提取率達(dá)到最大值（2.41%）。張春娟[19]研究表明，方竹葉黃酮主要為葒草苷、異葒草苷、牡荊苷、異牡荊苷4種黃酮碳苷，易溶于70%～80%的乙醇溶液，當(dāng)乙醇濃度超過80%時(shí)，某些醇溶性雜質(zhì)、色素等成分溶出量增加，與4種黃酮碳苷競(jìng)爭乙醇溶液結(jié)合部位，導(dǎo)致黃酮提取率下降。綜上所述，方竹葉黃酮乙醇提取工藝較優(yōu)的料液比為1∶25（g/mL），較優(yōu)的乙醇濃度為80%。

2.2 纖維素酶提取工藝優(yōu)化結(jié)果

不同料液比和纖維素酶添加量對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響結(jié)果見圖2。

圖2 不同料液比和纖維素酶添加量對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響Fig.2 Effects of solid-liquid ratio and cellulase addition amount on the extraction rate of flavonoids from Chimonobambusa quadrangularis（Fenzi）Makino leaves

由圖2A可知，隨著溶劑增加，黃酮提取率顯著升高（p＜0.05），在料液比為 1∶25（g/mL）時(shí)達(dá)到最大值（1.51%），之后隨著溶劑增加顯著下降（p＜0.05）。由圖2B可知，隨著纖維素酶添加量增加，黃酮提取率顯著升高（p＜0.05），在纖維素酶添加量為0.4%時(shí)黃酮提取率達(dá)到最大值（1.51%），之后隨著纖維素酶添加量繼續(xù)升高，黃酮提取率基本保持不變。纖維素酶能夠破壞方竹葉細(xì)胞壁，使黃酮類物質(zhì)溶出，當(dāng)纖維素酶添加量較少時(shí)，酶與底物充分接觸，黃酮提取率升高；當(dāng)纖維素酶添加過量時(shí)，底物不足，所以黃酮提取率基本保持不變[20-21]。綜上所述，方竹葉黃酮纖維素酶提取工藝較優(yōu)的料液比為1∶25（g/mL），較優(yōu)的纖維素酶添加量為0.4%。

2.3 超聲輔助乙醇提取工藝優(yōu)化結(jié)果

2.3.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

超聲時(shí)間、超聲溫度和超聲功率對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響見圖3。

圖3 超聲時(shí)間、超聲溫度和超聲功率對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響Fig.3 Effects of ultrasonic time，ultrasonic temperature and ultrasonic power on the extraction rate of flavonoids from Chimonobambusa quadrangularis（Fenzi）Makino leaves

由圖3A可知，隨著超聲時(shí)間延長，黃酮提取率顯著升高（p<0.05），在超聲時(shí)間為100 min時(shí)達(dá)到2.76%，之后隨著超聲時(shí)間繼續(xù)延長黃酮提取率變化不顯著。由圖3B可知，超聲溫度在55℃時(shí)提取率最高（3.30%），超聲溫度過高或過低都會(huì)造成提取率降低。溫度升高會(huì)加速方竹葉中黃酮類物質(zhì)溶出，但過高的溫度會(huì)造成方竹葉中活性成分被破壞，從而導(dǎo)致提取率降低[22-23]。由圖3C可知，增大超聲功率會(huì)使黃酮提取率顯著升高（p<0.05），在超聲功率為80 W時(shí)，黃酮提取率達(dá)到3.02%，之后隨著超聲功率繼續(xù)增大提取率變化不顯著。綜上所述，超聲輔助乙醇提取法較優(yōu)的提取工藝條件為超聲時(shí)間100 min，超聲溫度55℃，超聲功率80 W。

2.3.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

2.3.2.1 響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)與結(jié)果

以Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)原則，選取超聲時(shí)間（A）、超聲溫度（B）、超聲功率（C）為自變量，以黃酮提取率為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)三因素三水平響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化超聲輔助乙醇提取工藝，試驗(yàn)方案及結(jié)果如表3所示。

表3 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)方案及結(jié)果Table 3 Experimental scheme and results of response surface optimization

2.3.2.2 回歸方程與顯著性分析

利用Design-Expert 8.0軟件對(duì)表3試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多項(xiàng)式逐步回歸擬合，得回歸模型方程為Y=4.01+0.21A+0.05B+0.08C+0.01AB+0.03AC+0.07BC-0.10A2-0.31B2-0.18C2。

回歸模型方差分析見表4。

表4 回歸模型方差分析Table 4 Variance analysis of items of regression equation

由表4可知，模型F值為78.23，模型差異極顯著（p<0.01），失擬項(xiàng) F 值為 0.30（p>0.05），結(jié)果表明該模型可以對(duì)超聲波輔助乙醇提取法工藝條件進(jìn)行預(yù)測(cè)和分析。R2=0.990 2，說明黃酮提取率的變化有99.02%來源于超聲時(shí)間、超聲溫度和超聲功率的影響。方差分析結(jié)果中 A、C、BC、A2、B2、C2各項(xiàng)差異均極顯著（p<0.01），一次項(xiàng)B差異顯著（p<0.05）。3個(gè)因素對(duì)黃酮提取率具有交互影響，其影響大小依次為A>C>B。

回歸模型預(yù)測(cè)得到超聲輔助乙醇提取最優(yōu)工藝條件為超聲時(shí)間112.2 min，超聲溫度56.8℃，超聲功率85.2 W。在此條件下黃酮提取率的預(yù)測(cè)值為4.10%，考慮到實(shí)際操作的可行性，將最優(yōu)提取工藝修正為超聲時(shí)間112 min，超聲溫度57℃，超聲功率85 W。在該條件下測(cè)定黃酮提取率的平均值為（4.05±0.03）%，與預(yù)測(cè)值基本一致。該模型可以較好地反映最優(yōu)的超聲輔助乙醇提取工藝條件。

2.4 振蕩輔助乙醇提取法優(yōu)化結(jié)果

2.4.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

振蕩時(shí)間、振蕩溫度和振蕩頻率對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響見圖4。

圖4 振蕩時(shí)間、振蕩溫度和振蕩頻率對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響Fig.4 Effects of oscillation time，oscillation temperature and oscillation frequency on the extraction rate of flavonoids from Chimonobambusa quadrangularis（Fenzi）Makino leaves

由圖4A可知，隨著振蕩時(shí)間延長，黃酮提取率顯著升高（p<0.05），在振蕩時(shí)間為120 min時(shí)達(dá)到2.52%，之后隨著振蕩時(shí)間延長黃酮提取率變化不顯著（p>0.05）。由圖4B可知，隨著振蕩溫度升高，黃酮提取率顯著升高（p<0.05），在溫度為55℃時(shí)提取率達(dá)到最大值（3.04%），當(dāng)振蕩溫度超過55℃時(shí)提取率顯著降低（p<0.05）。由圖4C可知，黃酮提取率隨振蕩頻率增加顯著升高（p<0.05），在振蕩頻率為250 r/min時(shí)，黃酮提取率達(dá)到2.76%，之后黃酮提取率隨著振蕩頻率增加變化不顯著。綜上所述，振蕩輔助乙醇提取法較優(yōu)的提取工藝條件為振蕩時(shí)間120 min，振蕩溫度55℃，振蕩頻率250 r/min。

2.4.2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

2.4.2.1 響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)與結(jié)果

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，以Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)原則，選取E振蕩時(shí)間、F振蕩溫度、G振蕩頻率為自變量，以黃酮提取率為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)三因素三水平響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化振蕩輔助乙醇提取工藝，試驗(yàn)方案及結(jié)果如表5所示。

表5 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)方案及結(jié)果Table 5 Experimental scheme and results of response surface optimization

2.4.2.2 回歸方程與顯著性分析

利用Design-Expert 8.0軟件對(duì)表5試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多項(xiàng)式逐步回歸擬合，得回歸模型方程為Y=3.77+0.14E+0.02F+0.14G+0.03EF+0.04EG+0.09FG-0.14E2-0.22F2-0.16G2。

回歸模型方差分析見表6。

表6 回歸模型方差分析Table 6 Variance analysis of items of regression equation

由表6可知，模型F值為90.92，差異極顯著（p<0.01），失擬項(xiàng)F值為0.49（p>0.05），從而該模型可以對(duì)振蕩輔助乙醇提取法工藝條件進(jìn)行預(yù)測(cè)和分析。R2=0.991 5，說明黃酮提取率的變化有99.15%來源于振蕩時(shí)間、振蕩溫度和振蕩頻率的影響。方差分析結(jié)果中E、G、FG、E2、F2、G2各項(xiàng)差異均極顯著（p<0.01），交互項(xiàng)EG差異顯著（p<0.05），3個(gè)因素對(duì)黃酮提取率具有交互影響，其影響大小依次為E>G>F。

回歸模型預(yù)測(cè)得到振蕩輔助乙醇提取最優(yōu)工藝條件為振蕩時(shí)間150.0 min，振蕩溫度56.6℃，振蕩頻率273.6 r/min。在此條件下黃酮提取率的預(yù)測(cè)值為3.82%，考慮到實(shí)際操作的可行性，將最優(yōu)提取工藝修正為振蕩時(shí)間150 min，振蕩溫度57℃，振蕩頻率274 r/min。在該條件下測(cè)定黃酮提取率的平均值為（3.76±0.05）%，與預(yù)測(cè)值基本一致。該模型可以很好地反映最優(yōu)的振蕩輔助乙醇提取法工藝條件。

2.5 不同提取方法提取率和抗氧化能力對(duì)比

不同提取方法提取率及不同濃度下DPPH自由基清除能力和Fe3+還原能力對(duì)比見圖5。

圖5 不同提取方法提取率及不同提取液清除DPPH自由基能力和Fe3+還原能力對(duì)比Fig.5 Extraction rate of different extraction methods and DPPH radical scavenging capacity of different extracts and Fe3+reduction ability

由圖5A可知，超聲輔助乙醇提取法所得方竹葉黃酮提取率為（4.06±0.06）%，顯著高于其它3種方法（p<0.05）。由圖5B可知，隨著質(zhì)量濃度的增加，4種提取方法提取的方竹葉黃酮DPPH自由基清除率逐漸增強(qiáng)，表明其抗氧化能力逐漸增強(qiáng)。在超聲輔助乙醇處理下，提取的方竹葉黃酮在不同質(zhì)量濃度下DPPH自由基清除率都是最高的，其抗氧化能力也最強(qiáng)。由圖5C可知，4種提取方法下方竹葉黃酮Fe3+還原力同樣隨著質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)。在超聲輔助乙醇處理下，方竹葉黃酮Fe3+還原能力強(qiáng)于其它提取方式。綜上所述，超聲輔助乙醇提取法黃酮提取率高，提取到的黃酮抗氧化能力強(qiáng)，因此選擇超聲輔助乙醇提取法為最優(yōu)的方竹葉黃酮提取方法。

3 結(jié)論

以方竹葉為原料，通過對(duì)比乙醇提取、纖維素酶提取、振蕩輔助乙醇提取、超聲輔助乙醇提取4種不同提取方式對(duì)方竹葉黃酮提取率的影響，比較4種提取方式所得提取物體外抗氧化活性，確定了最優(yōu)的方竹葉黃酮提取工藝。通過對(duì)不同提取方法得到的黃酮提取率進(jìn)行比較，結(jié)果表明超聲輔助乙醇提取法黃酮提取率最高，為（4.06±0.06）%，最優(yōu)工藝條件為超聲時(shí)間112 min，超聲溫度57℃，超聲功率85 W。隨著質(zhì)量濃度的增加，不同提取方法所得提取物的DPPH自由基清除率和Fe3+還原力均逐漸增強(qiáng)，超聲輔助乙醇提取法所得提取物的DPPH自由基清除能力和還原力最強(qiáng)。對(duì)比黃酮提取率和抗氧化活性，確定最優(yōu)的方竹葉黃酮提取方法為超聲輔助乙醇提取法。該方法黃酮提取率高、便于操作、應(yīng)用成本較低，為方竹葉資源的開發(fā)利用提供技術(shù)支撐。