膠紅酵母Rhodotorula mucilaginosa CM-1菌株的鑒定及胞外多糖的分離純化

馬文錦，李梅林，王博，周彥兵，張永顯，于長(zhǎng)青，彭濤

(甘肅省輕工研究院有限責(zé)任公司，甘肅 蘭州，730000)

酵母菌胞外多糖(exo-polysaccharide，EPS)是由酵母細(xì)胞產(chǎn)生的，分布于細(xì)胞壁之外的同多糖或異多糖，可以莢膜的形式附到細(xì)胞壁上或以黏液的形式分泌于胞外環(huán)境，由于其易與菌體細(xì)胞分離，因此可通過(guò)液態(tài)發(fā)酵實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。與植物多糖、動(dòng)物多糖等其他來(lái)源的多糖相比，EPS最大的優(yōu)勢(shì)在于易于分離純化、可連續(xù)化發(fā)酵，不受地域、季節(jié)等環(huán)境的影響，它不但在微生物領(lǐng)域具有重要應(yīng)用，而且在生物、醫(yī)藥和食品等行業(yè)上也有廣泛應(yīng)用。因此，EPS具有廣闊的發(fā)展前景。

膠紅酵母(Rhodotorulamucilaginosa)屬子囊菌門隱形酵母科紅酵母屬，是單細(xì)胞真核生物[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)，膠紅酵母富含蝦青素、β-胡蘿卜素和β-葡聚糖，可將糖蜜、三乙醇胺、二乙醇胺和一些簡(jiǎn)單的芳香族化合物作為滿足自身生產(chǎn)的氮源[3]。目前研究較多的為海洋膠紅酵母，楊鏗等[4]測(cè)出海洋膠紅酵母粗蛋白質(zhì)含量為49.2%、粗脂肪1.5%、總糖22.3%、灰分7.9%。含有16種常見(jiàn)的氨基酸，包括7種人體必需氨基酸和6種脂肪酸，并且含有豐富的β-胡蘿卜素、維生素E、核苷酸和蝦青素等微量營(yíng)養(yǎng)素。本文通過(guò)形態(tài)學(xué)、碳源/氮源同化實(shí)驗(yàn)及18S rDNA生物學(xué)方法，對(duì)菌株CM-1進(jìn)行鑒定，經(jīng)細(xì)胞液體培養(yǎng)累積胞外多糖，進(jìn)一步分離純化制備出組分單一、純度較高的膠紅酵母EPS組分，為后續(xù)膠紅酵母EPS的結(jié)構(gòu)解析與活性分析提供理論和數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 材料與試劑

膠紅酵母(RhodotorulamucilaginosaCM-1)菌株的獲得見(jiàn)篩選方法(1.2.1.1小節(jié))。濃H2SO4，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；苯酚、抗壞血酸，天津市天力化學(xué)試劑有限公司；考馬斯亮藍(lán)(G250)，上海麥克林生化科技有限公司；麥芽糖，合肥博美生物科技有限責(zé)任公司；蔗糖、乳糖，天津開(kāi)發(fā)區(qū)樂(lè)泰化工有限公司；蛋白胨，北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠；Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒，上海易利生物科技有限公司；DreamTaqTMDNA Polymerase，上海浩洋生物科技有限公司；SanPrep柱式質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒，上海生工生物工程股份有限公司。

1.1.2 儀器與設(shè)備

LDZX-30KBS高壓蒸汽滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠；UB103i生物顯微鏡，重慶澳浦光電技術(shù)有限公司；HPS-160恒溫生化培養(yǎng)箱，哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)有限公司；Universal Hood Ⅱ凝膠電泳呈像儀、7370XL測(cè)序儀、2720 thermal cycler PCR儀，美國(guó)伯樂(lè)BIO-RAD公司；EM-30 Plus掃描電鏡，北京天耀科技有限公司；DYCP-31DNDNA電泳槽，北京六一儀器廠；Vector 33 FT-IR分光光度計(jì)，德國(guó)Bruker。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1R.mucilaginosaCM-1菌種的鑒定

1.2.1.1 膠紅酵母菌株篩選方法

酵母菌接入酵母浸出粉胨葡萄糖(yeast peptone detrose,YPD)液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，用保護(hù)液對(duì)酵母菌培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋。取菌體稀釋液，制備菌膜。將制備的菌膜分別置于離子注入機(jī)小真空靶室的無(wú)菌靶臺(tái)上，采用不同能量、不同劑量的N+在真空狀態(tài)下，以5 s脈沖方式注入酵母菌菌膜。以真空條件下未注入N+的酵母菌膜為對(duì)照。離子注入結(jié)束后，立即用發(fā)菜基因組DNA的Tris-EDTA緩沖液浸泡酵母菌膜，30 ℃靜置溫育2 h。未注入N+的酵母菌膜也按相同方法處理，并以2 mL無(wú)菌水代替發(fā)菜基因組DNA TE緩沖液，與注入后的菌膜互為對(duì)照。溫育完畢后加入無(wú)菌水洗脫菌膜。取洗脫液涂于平板培養(yǎng)基中培養(yǎng)。以不注入N+的等量菌膜作為對(duì)照。利用構(gòu)建的多重PCR篩選體系對(duì)重組酵母進(jìn)行篩選得到。

1.2.1.2 形態(tài)學(xué)觀察

菌種在YPD培養(yǎng)基平板上劃線接種，28 ℃培養(yǎng)2 d進(jìn)行菌落形態(tài)觀察，并使用掃描電子顯微鏡對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察[5]。

1.2.1.3 同化實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[9-13]的方法并稍作改動(dòng)。

(1)R.mucilaginosaCM-1菌株基因組DNA的提取

取酵母菌菌液，常溫6 000 r/min離心2 min，吸去上清液；加入300 μL裂解液、2 μL β-巰基乙醇和20 μL蛋白酶K溶液，振蕩；將離心管置于恒溫水浴中至細(xì)胞完全裂解；取出冷卻至常溫，加入100 μL Buffer PE，渦旋振蕩后冰浴，加入20 μL的核糖核酸酶A，放置2～5 min；室溫12 000 r/min離心5 min，吸取上清液，加入200 μL Buffer BD，200 μL無(wú)水乙醇，充分混勻；放入吸附柱，加入溶液和半透明纖維狀懸浮液，靜止2 min，離心后依次用500 μL PW溶液、500 μL洗液清洗，除去殘留，吸附柱放入1.5 mL離心管，加入50 μL TE緩沖液靜置3 min后離心，收集DNA溶液用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(2)PCR擴(kuò)增

用NS序列通用引物(P1:5′-GTAGTCATATGCT TGTCTC-3′,P2:5′-GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC-3′)進(jìn)行基因擴(kuò)增并測(cè)序。PCR反應(yīng)體系見(jiàn)表1。PCR循環(huán)條件見(jiàn)表2。

表2 PCR循環(huán)條件Table 2 The PCR cycling conditions

(3)凝膠電泳

1%瓊脂糖電泳，150 V、100 mA、20 min電泳觀察。

(4)純化回收

PCR產(chǎn)物電泳條帶切割所需DNA目的條帶，PCR產(chǎn)物用PCR引物直接測(cè)序。

(5)序列比對(duì)

將測(cè)序結(jié)果登錄NCBI網(wǎng)站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)BLAST程序(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)進(jìn)行序列比對(duì)，并提交GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)申請(qǐng)登錄號(hào)ClustalX(1.83)軟件進(jìn)行多序列比對(duì)(multiple alignments)，用軟件 PHYLIP3.57進(jìn)行分析獲得系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。

1.2.2R.mucilaginosaCM-1胞外多糖的制備

1.2.2.1R.mucilaginosaCM-1細(xì)胞固體培養(yǎng)基培養(yǎng)

配制YPD固體培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、錐形瓶等物品高壓蒸汽滅菌，待培養(yǎng)液冷卻至40 ℃，倒平板備用；將R.mucilaginosaCM-1從-80 ℃冰箱中取出，室溫下接種于平板上，于28 ℃培養(yǎng)2～3 d活化；用稀釋涂布法將活化好的膠紅酵母菌進(jìn)一步分離純化；挑選單個(gè)菌落，按照上述的方法再次培養(yǎng)菌種，得到膠紅酵母菌種的純培養(yǎng)菌落；挑取單菌落于在載玻片上，滴加無(wú)菌水，放顯微鏡下觀察；使菌懸液在載玻片上形成均勻薄膜。待玻片自然干燥后，滴加少量美藍(lán)染液，靜置3 min，鏡檢。

1.2.2.2R.mucilaginosaCM-1細(xì)胞液體培養(yǎng)基培養(yǎng)

挑取活化好的R.mucilaginosaCM-1菌落接種于種子液體培養(yǎng)基(酵母膏1%、葡萄糖2%、蛋白胨2%，pH 6)擴(kuò)大培養(yǎng)，配制4 000 mL的無(wú)機(jī)培養(yǎng)液，種子液按5%的接種量接入。于28 ℃、80～100 r/min條件下培養(yǎng)6 d，分離上清液與細(xì)胞，提取EPS。

1.2.2.3R.mucilaginosaCM-1胞外粗多糖的分離

將液體培養(yǎng)液于9 000 r/min、4 ℃、6 min條件下離心分離酵母菌與培養(yǎng)液，取上清液，旋蒸濃縮。

1.2.3R.mucilaginosaCM-1胞外粗多糖分離純化

1.2.3.1R.mucilaginosaCM-1胞外粗多糖制備

為得到單一、純度高的EPS，先將濃縮好的上清液在乙醇溶液中醇沉24 h，乙醇終體積分?jǐn)?shù)為70%。將醇沉后的EPS在4 ℃、5 000 r/min、10 min的條件下離心，得白色沉淀，即為EPS粗品。收集粗品置于通風(fēng)櫥干燥，揮發(fā)乙醇。蒸餾水復(fù)溶后冷凍干燥，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3.2 三氯乙酸沉淀蛋白

稱取EPS樣品，蒸餾水溶解，緩慢滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的三氯乙酸。置于4 ℃的冰箱內(nèi)放置24 h，于5 000 r/min、4 ℃、10 min條件下去除白色沉淀。將多糖溶液醇沉后進(jìn)行凍干處理，保存后備用。

1.2.3.3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取烘干到恒重的葡萄糖0.025 g，蒸餾水溶解，使葡萄糖質(zhì)量濃度達(dá)到0.5 mg/mL。將葡萄糖溶液分置于6個(gè)具塞試管中，具體操作方法按照表3執(zhí)行。

表3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定 單位：mL

向各管內(nèi)滴入配制好的苯酚溶液1.0 mL，滴加5.0 mL的濃H2SO4振蕩，靜置5 min，100 ℃的水浴鍋中水浴25 min，冷卻，在484 nm處測(cè)量吸光值，以0號(hào)管為空白，橫坐標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖體積，縱坐標(biāo)為吸光值A(chǔ)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3.4 DEAE-52纖維素層析柱純化

在文獻(xiàn)[14-15]的方法基礎(chǔ)上稍作修改。將處理好的樹(shù)脂置于緩沖液內(nèi)進(jìn)行填料，保證填料柱子完整致密，無(wú)小泡。剩余樹(shù)脂浸泡在體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇溶液中保留備用。直立固定層析柱，加緩沖溶液，將DEAE-Cellulose 52處理后的渾濁液緩慢的注入到玻璃柱內(nèi)，自然沉降到柱高的1/3時(shí)，打開(kāi)層析柱下方的排液口，使液體均勻的流出，確保樹(shù)脂上表面平整且不能暴露在緩沖液外，觀察填料柱無(wú)小氣泡產(chǎn)生。將粗多糖RmEPS溶于蒸餾水中，離心去除未溶解的沉淀與雜質(zhì)，將上清液添加到DEAE-Cellulose 52柱上，用蒸餾水洗脫填料柱以除去未結(jié)合的EPS。將粗多糖依次用蒸餾水，0.3，0.6，0.9和1.2 mol/L NaCl以0.5 mL/min的流速洗滌，采用苯酚-硫酸法測(cè)定每管收集洗脫液的吸光值，繪制洗脫曲線，收集各峰值部分備用。

1.2.3.5 Sephadex G-100凝膠柱層析

用蒸餾水將主要組分進(jìn)一步洗脫[16]，濃縮，透析并凍干后備用。通過(guò)苯酚-硫酸法測(cè)定RmEPS-11的產(chǎn)量。

1.2.4 RmEPS-11多糖組分的初級(jí)結(jié)構(gòu)解析

1.2.4.1 分子質(zhì)量分布

通過(guò)高效凝膠滲透色譜(high performance gel permeation chromatography，HPGPC)分析RmEPS-11的平均分子質(zhì)量。測(cè)試條件：取10 mg多糖樣品，加1 mL 0.1 mol/L NaNO3，60 ℃孵育過(guò)夜，稀釋后過(guò)0.22 μm濾膜，上樣。儀器：凝膠色譜-示差-多角度激光光散射;檢測(cè)器：RI，MALS;流動(dòng)相：0.1 mol/L NaNO3;流速：0.8 mL/min;柱溫：45 ℃，分析柱型號(hào)：Ohpak SB-804 HQ，Ohpak SB-805 HQ;上樣量：100 μL。

1.2.4.2 傅里葉變換紅外光譜(Fourier transform infrared spectroscopy，F(xiàn)T-IR)分析

RmEPS-11的FT-IR分析通過(guò)KBr法實(shí)施[17]。將樣品RmEPS-11與KBr粉末充分混合，研磨并壓制成1 mm顆粒。使用FT-IR分光光度計(jì)以4～4 00 cm-1的分辨率記錄2 cm-1的FT-IR譜圖。

1.2.4.3 單糖組成分析

采用離子色譜法(ion chromatography，ICS)對(duì)RmEPS-11的單糖組成進(jìn)行測(cè)定。將RmEPS-11溶解于三氟乙酸，在121 ℃下保存2 h，采用N2氣流對(duì)其風(fēng)干。風(fēng)干后的樣品用甲醇進(jìn)一步萃取、洗滌、風(fēng)干，循環(huán)3～4次。得到的干樣品用蒸餾水溶解，取25 μL樣液采用ICS進(jìn)行分析，采用PAD軟件做出相應(yīng)的峰圖。設(shè)定條件如下：流動(dòng)相為NaOH，流速梯度為0～40 min，5 mmol；40～45 min，100 mmol；45～50 min，200 mmol；50.2～55 min，5 mmol；其中40～45 min內(nèi)同時(shí)加入100 mmol的醋酸鈉，流速設(shè)定為1 mL/min，上樣量25 μL，柱溫30 ℃，柱型為CarboPac-PA10。

1.2.4.4 甲基化分析

將甲基化的樣品RmEPS-11在100 ℃下用90.0%甲酸處理3 h，用甲醇萃取去除甲酸。產(chǎn)物進(jìn)一步用2.0 mol/L三氟乙酸在121 ℃水解2 h，用NaBH4還原，然后乙?；Ｍㄟ^(guò)GC-MS分析所得的部分O-甲基化糖醇乙酸酯，進(jìn)行GC-MS測(cè)定。溫度設(shè)定為140 ℃、2 min，然后以2 ℃/min的速度升溫至250 ℃保持20 min。使用氦氣作為載氣，流速為1.24 mL/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 R.mucilaginosa CM-1菌株的鑒定

2.1.1R.mucilaginosaCM-1菌株形態(tài)學(xué)觀察

如圖1-a所示，菌株R.mucilaginosaCM-1在瓊脂平板上的菌落形態(tài)為中等大小、圓形、隆起、濕潤(rùn)，邊緣整齊，菌落顏色均一，為橙色、深橙色或腥紅色。通過(guò)掃描電鏡(圖1-b)觀察，菌株R.mucilaginosaCM-1細(xì)胞形態(tài)呈球形、橢圓形、卵圓形或長(zhǎng)形，大小約3～4 μm，生殖方式多為芽殖。

圖1 R.milailaginosa CM-1的菌落(a)、 細(xì)胞形態(tài)(b)與電泳條帶圖(c)Fig.1 Colony(a), cell morphology(b) and electrophoretic band(c) of R.milailaginosa CM-1

2.1.2R.mucilaginosaCM-1的生理生化鑒定

在28 ℃培養(yǎng)3～7 d的R.mucilaginosaCM-1細(xì)胞能夠同化葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、棉子糖、海藻糖和D-阿拉伯糖，但不能同化半乳糖、乳糖、蜜二糖、肌醇、甲醇、KNO3、放線菌酮(1%)和乙胺。根據(jù)酵母菌的特征與鑒定手冊(cè)[18]，菌株CM-1初步確定為酵母菌。

2.1.3 18S rDNA分子生物學(xué)鑒定

R.mucilaginosaCM-1菌株的18S rDNA全長(zhǎng)約1 323 bp。選擇的引物(NS1和NS6)能夠清晰地?cái)U(kuò)增泳道1中18S rDNA的靶標(biāo)(圖1-c)。測(cè)定R.mucilaginosaCM-1的NS區(qū)和18S rDNA基因以及相關(guān)物種的菌株的保守序列。NS區(qū)比5.8S rDNA和26S rDNA更快的替換率對(duì)于檢查物種內(nèi)的遺傳變異或緊密相關(guān)物種間的系統(tǒng)發(fā)育是至關(guān)重要的[19]。與GenBank中的BLAST基因序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果表明：R.mucilaginosaCM-1的18S rDNA序列與R.mucilaginosaKM222281，R.mucilaginosa5H3-M3，R.mucilaginosa4H1-P3-P7-1，R.mucilaginosaRM-1，R.mucilaginosaL10-2的基因高度同源，分別為99%、99%、99%、99%、99%。經(jīng)鑒定，菌株CM-1為紅酵母屬(Rhodotorulasp.)。

2.2 R.mucilaginosa CM-1胞外多糖分離與純化

通過(guò)濃縮、醇沉、脫蛋白、脫色和透析等方法得到R.mucilaginosaCM-1胞外多糖RmEPS，經(jīng)苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量為7.35 g/L。通過(guò)DEAE-52纖維素陰離子交換層析分離獲得RmEPS-1、RmEPS-2、RmEPS-3、RmEPS-4、RmEPS-5和RmEPS-6六個(gè)多糖組分(圖2)，占主要部分的中性多糖RmEPS-1用蒸餾水洗脫，通過(guò)凝膠滲透在Sephadex G-100柱中分離純化，分別獲得了2個(gè)組分RmEPS-11、RmEPS-12組分(圖3)。收集RmEPS-11組分(RmEPS-11占RmEPS-1的73.4%)，透析、冷凍干燥，用于后續(xù)的結(jié)構(gòu)解析及活性分析。

圖2 DEAE-52纖維素柱層析洗脫曲線Fig.2 Elution curve of DEAE-52 cellulose column chromatography

圖3 SephadexG-100凝膠柱層析洗脫曲線Fig.3 Elution curve of SephadexG-100 gel column chromatography

2.3 RmEPS-11多糖組分的初級(jí)結(jié)構(gòu)解析

2.3.1 RmEPS-11多糖組分的均一性和分子質(zhì)量分布

HPGPC圖顯示多糖RmEPS-11的色譜圖為單一對(duì)稱洗脫峰(圖4)，表明多糖為相對(duì)均一的多糖組分，RmEPS-11的平均分子質(zhì)量為2.3×105Da。

圖4 多糖RmEPS-11分子質(zhì)量分布圖Fig.4 The molecular weight distributions of RmEPS-11

2.3.2 多糖RmEPS-11紅外光譜分析

圖5 多糖RmEPS-11紅外光譜圖Fig.5 FT-IR spectrum of the RmEPS-11 fraction

2.3.3 多糖RmEPS-11單糖組成分析

通過(guò)離子色譜測(cè)定多糖RmEPS-11的單糖組成，不僅可以分析多糖的構(gòu)成，而且準(zhǔn)確測(cè)定各單糖在多糖中所占的比例，單糖含量之和可以用來(lái)衡量對(duì)比多糖的質(zhì)量。試驗(yàn)中以阿拉伯糖、核糖、木糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、D-半乳糖為標(biāo)準(zhǔn)糖，測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)單糖的保留時(shí)間，通過(guò)相應(yīng)的峰面積和響應(yīng)因子對(duì)RmEPS-11的單糖組成進(jìn)行測(cè)算。基于標(biāo)準(zhǔn)單糖的ICS分析(圖6-a)，RmEPS-11主要由Ara，Gal，Glc和Man四種單糖構(gòu)成(圖6-b)，摩爾比分別為1.3∶4.4∶7.8∶86.4，其中甘露糖含量最高。

a-單糖標(biāo)準(zhǔn)品；b-RmEPS-11的單糖組成圖6 單糖標(biāo)準(zhǔn)品和RmEPS-11的ICS圖譜Fig.6 ICS profiles of monosaccharide standards and RmEPS-11注：Ara，Rib，Xyl，Glc，F(xiàn)ru，Man和Gal分別代表阿拉伯糖， 核糖，木糖，葡萄糖，果糖，甘露糖和半乳糖。

2.3.4 RmEPS-11的甲基化分析

如圖7所示，根據(jù)保留時(shí)間和質(zhì)譜圖分析RmEPS-11的碎片峰。表4分析結(jié)果表明,RmEPS-11的非還原末端含有甘露糖,分支位于半乳糖基和一些阿拉伯糖殘基上。可以得出以下結(jié)論：(1)甘露糖殘基以末端和1,3-連接的Manp殘基存在；(2)葡萄糖殘基作為1,2-連接的Glcp殘基存在；(3)半乳糖殘基以1,2,6-連接的Galp殘基存在；(4)阿拉伯糖殘基以1,2,3,4連接的Arap殘基存在。除了末端Manp殘基之外，上述這些殘基的數(shù)量占總甲基化糖的64.5%，這表明RmEPS-11的骨架由1,3-連接的Manp和1,2-連接的Glcp殘基組成，分支上是1,2,6連接的Galp和1,2,3,4連接的Arap。

1-2,3,4,6-Me3-Man;2-3,4,6-Me3-Glc;3-2,4,6-Me3-Glc; 4-3,4-Me3-Gal;5-阿拉伯糖醇圖7 RmEPS-11甲基化總離子流圖Fig.7 Total ion chromatogram of partially methylated alditol acetates of RmEPS-11

表4 RmEPS-11甲基化分析數(shù)據(jù)表Table 4 Methylation analysis of RmEPS-11

3 討論

微生物多糖是發(fā)酵工業(yè)的新產(chǎn)品，尤其是胞外多糖，相比動(dòng)物多糖與植物多糖，微生物多糖具有許多優(yōu)點(diǎn)，不僅可以方便地提取，而且成本低、無(wú)毒、環(huán)保，不受季節(jié)和地理?xiàng)l件及病蟲(chóng)害的影響，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)量及質(zhì)量都很穩(wěn)定，性價(jià)比高，具有動(dòng)植物多糖不具備的特殊功能，因此很大程度上滿足了人們對(duì)天然綠色產(chǎn)品的需求。本文通過(guò)形態(tài)學(xué)、碳源/氮源同化實(shí)驗(yàn)及18S rDNA生物學(xué)方法，鑒定菌株CM-1為膠紅酵母菌(R.mucilaginosa)。從R.mucilaginosaCM-1無(wú)機(jī)培養(yǎng)基中分離得到水溶性胞外多糖RmEPS。采用苯酚-硫酸法測(cè)定其產(chǎn)量為7.35 g/L。多糖RmEPS經(jīng)纖維素交換柱、凝膠滲透等純化方法得到單一組分多糖RmEPS-11，并對(duì)其分子質(zhì)量分布、紅外光譜、單糖組成及甲基化進(jìn)行了分析，為后續(xù)膠紅酵母EPS的結(jié)構(gòu)解析與活性分析研究提供了理論和數(shù)據(jù)支撐。