鮮竹瀝中1個新的萘酚

喻何云，趙敏敏，任琦，姚金龍，羅躍華，付輝政

1.江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術研究中心，江西 南昌 330029；2.江西省醫(yī)藥學校，江西 南昌 330001

鮮竹瀝是一味獨具特色的傳統(tǒng)中藥，《本草衍義》稱之為“痰家之圣劑”，為單方制劑鮮竹瀝和復方制劑復方鮮竹瀝液的主要原料，臨床應用廣泛［1-2］。鮮竹瀝始載于梁代陶弘景的《本草經(jīng)集注》，收載在1977年版《中國藥典》一部［3］，之后歷版藥典均未收載，現(xiàn)被《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》（1992年）中藥材（第一冊）收載，其標準中制法為禾本科植物粉綠竹、凈竹、毛竹及同屬的數(shù)種植物的鮮桿經(jīng)加熱后自然瀝出的液體，有清熱化痰作用。臨床應用于肺熱咳嗽、痰多、中風舌強、小兒驚風、氣喘胸悶等癥狀［4］。現(xiàn)行標準中涉及的檢驗項目有性狀、以酪氨酸為對照的薄層色譜鑒別以及pH 值、總固體、相對密度檢查項［4］，標準較低，產(chǎn)品質(zhì)量不易得到有效控制。國家藥典會將藥材鮮竹瀝列為2019年國家藥品標準提高品種，研究表明，鮮竹瀝主要含有酚酸、木脂素、氨基酸、糖等成分［5-12］。然而，目前對于鮮竹瀝的炮制工藝機制以及表征其炮制工藝的質(zhì)量標志物還沒有確定，為了揭示其炮制工藝機制，建立反映其內(nèi)在質(zhì)量并符合工藝特點的質(zhì)量標準，使得鮮竹瀝價值能夠得以充分挖掘，筆者在課題組化學成分和藥理作用的前期研究基礎上［13-18］，繼續(xù)運用現(xiàn)代先進的分析手段，從藥材鮮竹瀝活性部位乙酸乙酯中分離得到了1個化合物，確定為5-（4-羥基-3，5-二甲氧基苯基）-1，3-二甲氧基-2-萘酚，該化合物為新化合物。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UltiMate 3000 高效液相色譜儀（美國賽默飛公司）；Varian UNITY INOVA 600 超導核磁共振儀（美國Varian 公司）；島津20-AR 型半制備色譜儀（日本島津公司）；Buchi 中壓制備色譜儀（瑞士Buchi公司）；Micromass ZabSpec 質(zhì)譜儀（美國Micromass公司）；EYELA SB-1000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本EYELA公司）；UV-260 紫外分光光度儀（日本島津公司）；XT5B 熔點儀（天津天光光學儀器有限公司）。C18填料為日本YMC 產(chǎn)品，制備色譜柱為YMC（5 μm，250 mm×20 mm）；柱層層析硅膠、薄層層析硅膠（青島海洋化工廠）。

1.2 試藥

CD3OD 為美國劍橋公司產(chǎn)品，水為Milli-Q 超純水，甲醇和二氯甲烷為分析級試劑。毛竹采自江西省宜春市銅鼓縣，由江西省林業(yè)科學院余林博士鑒定為禾本科剛竹屬植物毛竹P.edulis（Carr.）J.Houz.的新鮮桿莖。標本現(xiàn)于江西省藥品檢驗檢測研究院中藥標本館存放。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取和制備方法

取新鮮毛竹（5 t），先進行切斷成1 米長左右并開片，將處理好的竹片放置在密閉不銹鋼罐中，用生物燃料加熱，收集濾出的液體，將液體濃縮得到鮮竹瀝浸膏。取浸膏，用等量乙酸乙酯溶劑萃取3 次，合并萃取液，低溫減壓濃縮后得乙酸乙酯萃取部位干膏280 g。將干膏用硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇（10∶1～6∶4）洗脫，薄層色譜檢視合并洗脫液，得流分Fr.1～Fr.9。Fr.2（13.6 g）進一步采用硅膠層析柱分離，二氯甲烷-甲醇（60∶1～30∶1）洗脫，薄層色譜檢視合并洗脫液，得流分Fr.2-1～Fr.2-15。Fr.2-9（2.3 g）再經(jīng)過中壓ODS 柱色譜分離，以30%～60%甲醇為流動相梯度洗脫，經(jīng)高效液相色譜檢測，合并洗脫液得流分Fr.2-9-1～Fr.2-9-10。Fr.2-9-5（56.9 mg）經(jīng)反相半制備液相色譜，以甲醇-水（30∶70）為流動相，得到化合物1（21 mg，tR=78.5 min）。

2.2 化學成分鑒定

化合物1：白色粉末，易溶于甲醇、丙酮、吡啶。mp 192～193 ℃；UV（CH3OH）λmax204 nm 和295 nm。HR-ESI-Q-TOF-MS 質(zhì)譜給出準分子離子峰m/z:355.116 4［M-H］-（計算值為C20H19O6，355.118 2），根據(jù)氫譜和碳譜數(shù)據(jù)，確定化合物1的分子式為C20H20O6。

在化合物1 的1H-NMR 譜中，顯示了一組ABC 鄰位偶合系統(tǒng)苯環(huán)質(zhì)子信號：δH7.22（1H,d,J=7.2 Hz），7.34（1H,t,J=8.4,7.2 Hz），7.90（1H,d,J=8.4 Hz）；一組A2苯環(huán)質(zhì)子信號：δH6.73（2H,s）；一個苯環(huán)5 取代的單峰質(zhì)子信號：δH7.12（1H,s）；4個甲氧基信號：δH3.96（3H,s），3.81（3H,s），3.87（6H,s）。在化合物1 的13C-NMR 譜中，顯示20個碳信號，其中16個苯環(huán)碳信號；4個甲氧基碳信號。根據(jù)上述數(shù)據(jù)初步推測化合物1 可能為萘酚類化合物，將化合物1 與文獻［19］所報道的Annulated HS結(jié)構(gòu)比較，分子式一致，且結(jié)構(gòu)基本相似，唯一不同的是4-羥基-3,5-二甲氧基苯基與萘環(huán)的連接位置不同。

在化合物1 的HMBC 中（圖1），H-2',6'（δH6.73）與C-4（δC101.8）、C-5（δC140.8）、C-6（δC126.2）、C-9（δC127.8）相關，表明4-羥基-3,5-二甲氧基苯基連接在萘環(huán)的C-5 位。另外，1-OMe（δH3.81）與C-1（δC142.1）存在相關聯(lián)、3-OMe（δH3.96）與C-3（δC151.0）存在相關聯(lián)，說明2個甲氧基分別與C-1 和C-3位相連接。另外，OMe-3'，5'（δH3.87）與C-3''，5''（δC149.4）相關，表明2個甲氧基位于C-3'和C-5'位。

綜上所述，化合物1 結(jié)構(gòu)鑒定為5-（4-羥基-3,5-二甲氧基苯基）-1,3-二甲氧基-2-萘酚，結(jié)構(gòu)和主要的HMBC 相關圖見圖1。詳細核磁數(shù)據(jù)見表1。

表1 化合物1的1H-NMR 和13C-NMR波譜數(shù)據(jù)（600/150 MHz，CD3OD）

圖1 化合物1的結(jié)構(gòu)和主要的HMBC相關圖

3 結(jié)論

鮮竹瀝作為一味療效確切且獨具特色的傳統(tǒng)中藥，其發(fā)揮作用的藥效物質(zhì)還不明確，制約了對其進行深度開發(fā)與利用。本課題組在原來研究基礎上繼續(xù)對鮮竹瀝化學成分進行研究，首次從鮮竹瀝中獲得1個新的萘酚類化合物，通過多種核磁波譜手段確定了其準確結(jié)構(gòu)，命名為鮮竹瀝素A，豐富了天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)，也為揭示鮮竹瀝鎮(zhèn)咳祛痰功效提供了物質(zhì)基礎。